不同程度干旱对小麦幼苗体内游离脯氨酸含量的影响实验报告.doc

不同程度干旱对小麦幼苗体内游离脯氨酸含量的影响 姓名：侯 菲 学号：2011070100981实验目的 学习测定植物体内脯氨酸含量的方法，并了解植物体内游离脯氨酸的积累与植物抗逆性的关系。2实验设计 （1）取适量的小麦品种，先用0.1%的HgCl2消毒5 min，再用流动的自来水浸种24 h。 （2）在25 下催芽后，选取露白一致的种子腹沟朝下均匀播在塑料盆中，并坚持每天给小麦浇水。 （3）等长到两叶一心时 ，每天用100ml 20%的 PEG-6000营养液处理一周。 （4）根据具体操作步骤，进行小麦幼苗体内游离脯氨酸含量的测定。3实验原理 胁迫条件下植物体内脯氨酸大量积累，而且胁迫时间越长,积累的脯氨酸越多；因此植物体内的脯氨酸含量在一定程度上反映了植物受胁迫影响的程度，可作为植物对逆境响应的一个参考指标。在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应，生成红色化合物，此产物在520nm波长下具有最大吸收峰，可用分光光度计测定，此法具有专一性。在pH1-7时用人造沸石可以除去一些干扰的氨基酸。4实验材料 小麦幼苗的叶片和根5方法与步骤 1.取材取0.5g叶片或根剪碎放入大试管中，2.浸提用5mL3%的磺基水杨酸在沸水浴中加盖提取10分钟，3.冷却、过滤4.取滤液2mL于具塞试管中，加2mL冰醋酸，再加入2mL酸性茚三酮，在沸水浴中加热30分钟。5.冷却后加入4mL甲苯，充分振荡，静止分层。6.取上层甲苯溶液于比色杯中在515nm处比色，计算Pro的含量。C=A/WV1/V2 C：脯氨酸含量g.g-1 W：样品重g A：曲线查得脯氨酸g（OD值380） V1：样品提取液体积ml V2：样品反应液体积ml6注意事项1、配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好现用现配； 2、甲苯萃取色素时必须注意要进行充分振荡，以防色素提取不完全。此外，甲苯有毒，需格外小心，注意教室通风；3、离心前必须平衡，外管壁要干燥，离心机要水平放置等待离心机完全停止后再取出试管；4、材料研磨得不够仔细，会使得组织中脯氨酸提取得不完全；同时离心后没有对离心的残渣进行再提取会有部分损伤；5、沸水浴的温度一直要达到，防止反应不够充分，也不要让在沸水浴的过程中沸腾，避免溶液体积的减小和蒸汽中各种物质的污染影响； 6、使用分光光度计时，先调好波长，使用比色皿时只能拿粗糙面，使用前必须润洗。7 结果与分析表1 不同程度干旱对小麦幼苗叶片内游离脯氨酸的影响处理010%20%30%40%50%60%脯氨酸（gg-1FW）172.14152.76210.141060.07257.89766.711198.14 如上表所示：在干旱条件下，小麦幼苗叶片中的游离脯氨酸的含量受到明显的影响，且随着干旱程度的增加，游离脯氨酸的量也相应的增加（30%处理的数据有些不合理，或许是由于实验误差引起），说明小苗幼苗叶片中的游离脯氨酸对干旱条件比较敏感，干旱条件对脯氨酸含量的影响作用不较大。表2 不同程度干旱对小麦幼苗根内游离脯氨酸的影响处理010%20%30%40%50%60%脯氨酸（gg-1FW）108.93159.83104.73207.48145.54562.91951.33 如表所示，干旱胁迫下，小麦幼苗根部的游离脯氨酸的含量也有很明显的变化，与干旱胁迫程度呈正比关系变化（20%处理下的数据有明显的误差）。 实验误差分析 1.材料研磨得不够仔细，使得组织中脯氨酸提取得不完全。 2.离心后没有对离心的残渣进行再提取，会有部分损伤。3.制作标准曲线用的是蒸馏水来稀释标准液，虽然同样可以有结果，但应该和用酒精稀释有一定差异。 4.沸水浴的温度一直也达不到，所以反应不够充分，同时在水浴过程中怕溶液沸腾，有一段时间没有加塞，所以溶液体积有一定的减小，同时有蒸汽中各种物质的污染影响。8 讨论 脯氨酸具有偶极性，是植物细胞中一种游离氨基酸，它可以保持细胞膜系统，维持胞内酶的结构，减少胞内蛋白质的降解，脯氨酸含量的增高能降低细胞的渗透势，防止细胞脱水，它的积累可以防止氮素的流失，而且不产生毒性副作用。植物在逆境胁迫下，植物体内的生理活动受到严重干扰。与此同时，植物本身会通过改变生理代谢来作出反应，脯氨酸质量分数的变化正是这样的一种生理响应。在本实验，不同干旱胁迫下，游离脯氨酸的含量变化，可分析出小麦幼苗不同部位对干旱条件的敏感情况以及抗干旱胁迫的能力。 当植物处于干旱条件下时，为了保护植物对干旱逆境的反应，在干旱胁迫下脯氨酸质量分数呈急剧上升的趋势。在干旱条件下，叶片中的脯氨酸合成速度及质量分数明显增加，因此，脯氨酸与植物的抗旱性有密切关系。而对于植物的不同部位积累的脯氨酸的质量分数也表现不同，本实验中，对于小麦幼苗的叶片和根部游离脯氨酸含量均受到干旱的胁迫，但其变现的程度却有高低之分。如数据所示，叶片中脯氨酸的含量变化比根部的脯氨酸含量变化程度要大，这表明不同部位对干旱胁迫敏感程度不同，可以分析出根部对干旱的胁迫