ABO血型主要不合供者外周血造血干细胞采集和移植16例报告.doc

ABO血型主要不合供者外周血造血干细胞采集和移植16例报告【关键词】 基因 造血干细胞移植 异基因外周血造血干细胞移植(allogenetic peripheral blood stem cell transplantation, AlloPBSCT)是多种血液病和实体瘤的有效治疗方法12。供者与受者经组织配型相合能够大大提高受者的移植成活率。但是,组织配型相合的供者与受者之间ABO血型并非全部相同。当采集ABO血型主要不合(指受者血清中存在能与供者红细胞表面A和/或B血型抗原发生反应的抗体)供者的PBSC时,应尽量减少采集产品中混入供者红细胞,以保证回输时受者的安全。近年来笔者采用MCS+血细胞分离机对16例ABO血型主要不合供者PBSC采集和移植,临床效果满意,现报告如下。1 临床资料1.1 一般资料16例供者均为血缘供者,与受者经人类白细胞抗原（HLA）配型为全相合,男性7例,女性9例,年龄中位数31.5岁(31.59.2岁)。16例受者中男性10例,女性6例,年龄中位数31.4岁（31.48.6岁）,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)7例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL)3例（M21例、M41例、M51例）,慢性粒细胞白血病(CML)5例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)1例。16对供、受者ABO血型均不相合（ABO血型主要不合）。1.2 仪器与试剂MCS+血细胞分离机和一次性耗材（971E，美国血液技术公司）,粒细胞集落刺激因子（GCSF,惠尔血,日本麒麟啤酒株式会社高崎医药工厂）,ACDA血液抗凝剂（配方：枸椽酸钠22 g/L,枸椽酸8 g/L,葡萄糖24.5 g/L;广州华南医疗用品有限公司）。1.3 供者PBSC的动员和采集所有供者在采集前4 d开始皮下注射GCSF 510 gkg-1d-1。之后每天行血常规检查,监测供者外周血红细胞压积（HCT）、白细胞（WBC）计数和单个核细胞（mononuclear cell,MNC）占有核细胞比例的变化情况。在注射后4 d当供者外周血HCT为0.45左右、WBC计数达到20109 L-1,MNC占有核细胞比例0.10即可开始采集。采集时选择MCS+血细胞分离机的PBSC程序,安装一次性耗材,根据供者的性别、身高、体质量、动员后HCT、WBC数、MNC数和所需采集的MNC数、CD34+细胞数设置采集参数3：每46个小循环后行一个再循环,再循环数：810个。小循环开始采集时限管线探测器（line sensor,LS）=70%,结束时限LS=12%,续采量20 mL；再循环开始时限LS=70%,结束时限LS=12%,续采量7 mL左右。采集与回输速度根据供者的具体情况调整（范围20100 mL/min）。采集过程中为防止血液引入管道后发生凝集,采用ACDA血液抗凝剂。全血与抗凝剂的比例保持在101121。干细胞采集前口服10%葡萄糖酸钙10 mL,采集过程中循环血量每增加2 000 mL，口服10%葡萄糖酸钙10 mL,以预防低钙反应4。1.4 移植物、受者的处理和移植物的输注移植前从采集产品中留取样本检测MNC数、CD34+细胞数、MNC占有核细胞的比例、台盼蓝拒染率和混入红细胞的量；每次输注前10 min给受者静脉滴注地塞米松5 mg,并常规静脉滴注碳酸氢钠250 mL,每日2次,以碱化尿液；每次采集产品未去除红细胞直接回输,输注速度510 mL/min,输注结束后给予速尿20 mg,并观察尿液颜色,且嘱受者全天多饮水。每日输液量控制在4 000 mL。2 结 果2.1 采集不良反应16例供者采集过程中2人次出现轻度口唇、手脚麻木等低钙反应症状,给予口服10%葡萄糖酸钙10 mL,症状消失。2.2 采集产品细胞数 16例供者每人经2次（1次/d,连续2 d）采集,共采集32人次,平均每次采集产品含MNC数（3.860.53）108kg-1（kg指受者体质量,下同）、CD34+细胞数（4.121.16）106kg-1、MNC占有核细胞比例(932)%,台盼蓝拒染率均为100%,混入红细胞（4.50.5）mL（占产品体积的3%4%）。2.3 采集产品输注结果采集产品输注过程中,16例受者均未出现寒战、发热、腰背疼痛、呼吸困难、脉搏细弱、血压下降等溶血性输血反应表现。采集产品输注后,16例受者尿血红蛋白、尿常规,血浆血红蛋白、游离胆红素,网织红细胞等未见异常。移植后中性粒细胞计数经1214 d恢复到0.5109L-1,经1425 d恢复到2.0109L-1。血小板计数经1114 d恢复到20.0109L-1,经1427 d回复到50.0109L-1。3 讨 论 输注ABO血型主要不合的红细胞,因输入的红细胞抗原与受者血清中相应的血型抗体结合,直接激活补体系统,红细胞在血管中凝集和破坏,一次输入1520 mL即可发生寒战、发热、腰背疼痛、呼吸困难、脉搏细弱、血压下降等临床表现,甚至出现血红蛋白尿和肾功能衰竭。因此,在ABO血型主要不合PBSC采集和移植过程中,采集产品混入红细胞的量将直接影响到受者生命安全和移植成败。 为防止ABO血型主要不合引起的输血反应及溶血现象,常用沉淀法或免疫吸附法清除产品中的红细胞,但这些方法复杂而又难以清除彻底5；国外大部分移植中心采用血细胞分离机（IBM 2991）直接通过Ficoll液分离出单个核细胞,大大降低了红细胞的混入量；目前新开展的异基因CD34+细胞移植更加避免了ABO血型主要不合供者红细胞的输入。但以上方法在去除红细胞的同时,都不同程度的损失了一定数量的造血干细胞56。 采用血细胞分离机采集供者PBSC可以避免采集骨髓时的麻醉及麻醉引起的意外,也可避免采髓的多点穿刺给供者带来的痛苦及一些后遗症；进行外周血造血干细胞移植,具有使受者造血及免疫功能重建和恢复快,且感染、出血等并发症少且轻等优点1。福建医科大学学报 2008年7月 第42卷第4期魏世金等：ABO血型主要不合供者外周血造血干细胞采集和移植16例报告 MCS+血细胞分离机主要根据血液中各成分密度不同,离心杯中的全血被分为不同层面,较密的细胞成分移到离心杯外侧,较轻的血浆成分移到中央,通过光电探测器探测各层面浊度不同来收集所需造血干细胞层面3。然后将收集到的造血干细胞产品贮存于离心仓外的产品袋中,避免了造血干细胞长时间遭受离心力的破坏,所以采集到的细胞均为活细胞。由于造血干细胞的比质量非常接近红细胞,因此在分离采集PBSC的同时也将混杂一定数量的红细胞7。笔直在采集过程中观察LS值,通过调整再循环续采量和增加再循环次数可以采集到足够多的造血干细胞及减少混入红细胞的量：当前一个再循环续采结束时LS如果>9%,则后续再循环将续采量调至9 mL左右,以增加造血干细胞的得率；LS如<9%,则后续再循环将续采量调至5 mL左右,以减少混入红细胞的量。在保证续采量中混入红细胞的量少的前提下,通过增加再循环次数,又可增加造血干细胞的获得率。采集结果较好地满足了PBSCT对MNC和CD34+细胞数的要求（基本要求：MNC数>2.0108kg-1 ,CD34+细胞数>2.0106kg-1）,移植后造血功能均获得重建。而移植后无1例受者出现溶血性输血反应的原因,考虑为与采集产品混入红细胞的量较少（每次采集产品混入红细胞的量平均4.5 mL）,输注时对受者采取一系列保护肾功能的措施,以及干细胞移植受者因放射治疗、化疗、反复输血等引起不同程度的骨髓抑制,使得体内IgG和IgM抗A和抗B效价较正常人低等因素有关6。【参考文献】 1 张之南,杨天楹,郝玉书. 血液病学M. 北京：人民卫生出版社, 2003,20472062.2 斯晓明,刘文超,贾 军,等. MCS+血细胞分离机在自体外周血造血干细胞采集中的应用J. 现代肿瘤医学, 2005,13(6)：761763.3 何志国,侯丽君,李碧香,等. 应用间断流动式血细胞分离机采集外周血造血干细胞的效果分析J. 中国组织工程研究与临床康复, 2007,11（24）：48154817.4 闫玉展.外周血干细胞采集不良反应的预防和处理J. 中国误诊学杂志, 2007,7（11）：25012502.5 杨成民,李家增,季 阳. 基础输血学M. 北京：中国科学技术出版社, 2001：336338.6 OzielTaieb S,FaucherBarbey C,Chabannon C,et alEarly and fatal immune haemolysis after socalled mi