《药检项目》PPT课件.ppt

任务一 复方丹参滴丸冰片的鉴别,项目三 药物的鉴别,检验依据的查阅与使用,检验方法与步骤,主要内容,单元目标,1.检验依据的查阅与使用,仪器选用与使用 试药及试液配制 鉴别结果判断 原始记录及报告书,技能目标,掌握TLC鉴别原理 掌握TLC鉴别方法 掌握冰片的提取等,知识目标,液相色谱法鉴别 气相色谱法鉴别,拓展目标,树立依法操作的观念 操作应规范、严谨 务实的工作态度,素质目标,薄层板的制备,要求：玻璃板需光洁，否则吸附剂易脱落； 大小由需求决定。,2.检验-薄层板制备,薄层板分类和制法,软板的制备 硬板的制备 倾注法 平铺法 机械涂布法,2.检验-薄层板制备,（1）软板的制备,软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂,3.橡皮膏 4.橡皮管,要求：厚度随分离要求而定，一般0.250.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿影响厚度均一性 优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。 缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。,薄层板分类和制法,软板的制备 硬板的制备 倾注法 平铺法 机械涂布法,2.检验-薄层板制备,（2）硬板的制备,硬板：吸附剂加粘合剂制成的板,常用的粘合剂：煅石膏（） 机械强度差，易脱落，但不易腐蚀 羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 机械强度好，不易脱落，但易腐蚀,a、倾注法： 硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状 硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状,倒在玻璃板上,均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。,（2）硬板的制备,b、平铺法：,1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 3. 玻璃夹板 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板,过程：制板振荡晾干活化备用 优点：一次铺多块薄层板，简单易行。,（2）硬板的制备,c、机械涂布法：,优点：简单方便、薄板厚度均匀、分离效果好。,手动涂布器 全自动涂布器,常用的薄层板： 软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧化铝CMC-Na板、硅胶GF 、硅胶GF,（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？ 水可以用吗？,检验-点样,（2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响,点样基线：距底边2.0cm 样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm,检验-点样,（3）点样方法： 划线、样品记号点、点样 注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。,平头50ul微量点样器,全自动点样仪,样品溶液的配制,点样,检验-点样,展开缸（色谱缸）,检验-展开,水蒸气的影响,在吸附薄层色谱的展开过程中，空气的相对湿度以及展开槽中的水蒸气必须严格控制，微量的水也能对色谱分离结果产生较大的影响。 硅胶薄层板吸附水蒸气的速度很快，0.25mm厚、2020cm的薄层板在50%相对湿度中约3分钟就失去活性的一半，而15分钟时吸附的水分已达到最大值，因此，点样速度的快慢，空气相对湿度的大小，都可以影响分离以及重现性。 适宜的相对湿度范围也决定于溶质和溶剂的极性。,溶剂蒸气的影响,“边缘效应”：Stahl在用氯仿-甲醇（95：5）为展开剂展开麦角生物碱时发现，对同一种生物碱，在薄层板中部的Rf值比在边缘的Rf值小，称此现象为“边缘效应”（edge effect）。 展开槽中被展开剂蒸气饱和后再进行展开就可以消除。,图5 在未饱和展开槽中薄层板上出现的“边缘效应”,展开,展开,（1）展开方式：,a、近水平展开,特点：速度快、适用于软板的展开。,（1）展开方式：,b、上行展开,过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂前沿,展开,c、单向二次展开,d、双向二次展开,（2）注意事项：,a、色谱槽需密闭良好 脂溶性展开剂：甘油淀粉糊 水溶性展开剂：凡士林 b、注意防止边缘效应,展开,画溶剂前沿线,观察斑点,记录Rf值,薄层色谱展开示意图,1h反应混合液样,原料样,结论：反应结束,展距对结果的影响，硅胶HPTLC 分离洋甘菊油， a）3 cm、b）5 cm、c）7 cm、d）9 cm。,展距对结果的影响,一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂 加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法,紫外灯观察,喷显色剂观察,检验-显色,本身带有颜色,本身无颜色,含有荧光剂的薄层板,有色斑点,显色剂显色,暗色斑点,检验-显色,薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描,用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化从而达到定量的目的。,检验-结果,1,2,1为样品液 2为对照液,判断依据：Rf值、Rs值,1、查找资料：影响Rf值的因素 吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性；薄层厚度；点样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱和状态等。 2、对照品比较法：常用。,（一）定性鉴别,检验-结果,薄层色谱展开示意图,被分离混合物,组分一,组分二,1、对照品比较法：,杂质对照品制成一定浓度的溶液,样品制成一定浓度溶液,按相同的点样量点样,展开后观察斑点颜色深浅和大小,（二）杂质检查（杂质限量检查）,检验-结果,举例,如异烟肼中游离肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50g）的溶液，作为对照溶液。吸取供试液10l 与对照溶液2l，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（3:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。,仪器 托盘天平 玻璃板（515cm） 研钵 量筒（25ml） 制备 研磨 硅胶G 1份 0.5%CMC-Na溶液3份 晾干 活化：110/30min,本实验实行过程对照品比较法,仪器：分析天平（感量0.1mg）、超声波仪、研钵、量筒（25ml）、容量瓶（100ml）、烧杯、漏斗、玻棒等 供试液的制备：取本品40丸，研细，加无水乙醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。 对照液的制备：另取冰片对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。,本实验实行过程,2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）,样品溶液稀释制成一定浓度的溶液,样品制成一定浓度溶液,按相同的点样量点样,展开后观察斑点颜色深浅和大小,如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量，加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,3、目视比较法：,对照品制成不同浓度的系列溶液,样品制成定量溶液,按相同的点样量点样,展开后观察斑点颜色深浅和大小,注：本法适用于近似含量的测定，误差10%,4、斑点洗脱法,对照品制成溶液 点于薄板两侧,样品制成一定浓度溶液 线状点于薄板起始线中间部分,展开,对对照品显色，以此为依 据刮下含有样品的吸附剂,将样品溶解，按照分光光度法测定溶液浓度,注：本法适用于含量的测定,取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎，加硅藻土4g，研匀。加乙醚40ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述两种溶液各10l,分别点于同一硅胶薄层板上，以环己烷醋酸乙酯(3:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。 （2005年版中国药典一部 401页）,六味地黄丸中丹皮酚的薄层鉴别,应用实例,3、知识拓展,1.丹皮酚； 25.六味地黄丸,六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱,柱色谱薄层色谱和纸色谱气相色谱毛细管柱 色谱高效液相色谱薄层扫描仪毛细管电泳色谱-光谱联用、 多维色谱、 智能色谱。,液相色谱（经典）,3.知识拓展-色谱分析技术,色谱法又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极性、离子交换能力、分子大小等）的不同，当流动相携带样品流经固定相时，样品各组分在两相中不断的重新分配，最终达到分离与提纯，以便于对样品进行定性和定量分析的分析方法。,色谱法的分类,按两相状态不同分类 按操作方法不同分类 按色谱分离过程的原理不同分类,按两相状态不同分类,色谱其中的一相固定不动，称为固定相; 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。,两 相状 态,流动相 的物态,液相色谱（LC） 气相色谱（GC）,色谱法的分类,按两相状态不同分类 按操作方法不同分类 按色谱分离过程的原理不同分类,按操作方法不同分类,柱色谱,纸色谱,薄层色谱,色谱法的分类,按两相状态不同分类 按操作方法不同