《药物的鉴别试验》PPT课件.ppt

1,药物的鉴别试验,曹 蕊,2,主要内容,一 、药物鉴别试验的定义与目的,三、 鉴别方法,四、 鉴别试验的条件及方法验证,二、 药物试验的项目,3,一、 药物鉴别试验的定义与目的,根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断其真伪。 鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的定性。 鉴别试验方法应专属，每个品种一般23条。,性状项和物理常数确认,鉴别项下规定的试验,原料药鉴别,制剂鉴别,二、 药物试验的项目,性 状 （Description）,定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等。,外 观,溶解度,物理常数,外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。,性 状 （Description）,溶解度：药品的一种物理性质，一定程度上反映了药品的纯度、晶型或粒度。药品在不同溶剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。,物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。,性 状 （Description）,熔点：多数固体有机药物的重要物理常数。鉴别方法和纯度检查手段。 比旋度：反映手性药物特性及其纯度的主要指标，可用区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。 吸收系数：吸光物质的重要物理常数，用于考查原料药的质量，UV测定含量时的依据。测定方法应按药典规定方法进行。,是指依据某一类药物的共同的化学结构或相同的理化特性，通过化学反应来鉴别药物的真伪。,一般鉴别试验,有机药物-典型的官能团反应 无机药物-阴离子、阳离子,中国药典2010附录收载一般鉴别试验： 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类 有机氟化物类、有机酸盐 无机酸盐 (Cl- 、 SO42- 、 NO3-) 无机金属盐类（Na+, K+, Ca2+, Ba2+, Li+, Fe3+ , Al3+ , Zn2+,Cu 2+, Ag+, Hg2+等）,10,1.有机氟化物,一般鉴别试验,有机氟,氧瓶燃烧,无机氟离子,pH4.3,茜素氟蓝,硝酸亚铈,蓝紫色络合物,碱液吸收,11,2. 有机酸盐 (1) 水杨酸盐,水杨酸 + FeCl3,中性条件,弱酸性条件,红色配位化合物,紫色配位化合物,水杨酸盐+稀盐酸水杨酸（白色沉淀） 溶于醋酸铵,鉴别方法二：,鉴别方法一：,(2) 酒石酸盐,供试品溶液（中性）+ 氨制硝酸银,水浴中,银镜,12,供试品,+,稀盐酸 0.1mol/L亚硝酸钠 碱性-萘酚试液,橙黄色到猩红色沉淀,3.芳香第一胺类,13,4.托烷生物碱类 此类生物碱中具有莨菪酸结构，有Vitali反应, 显紫色。,莨菪酸,托烷类,14,5.无机金属盐（Na, K, Ca, NH4+) (1) 钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应 焰色反应：Na显鲜黄色；K显紫色；Ca显砖红色 Ba：黄绿色，自绿色玻璃中透视，火焰呈蓝色,(2) 铵盐,15,6. 无机酸根 氯化物：Cl- + Ag+ AgCl 白色乳状 Cl- + MnO2 Mn2+ + Cl2 硫酸盐： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色 SO42- + Pb2+ PbSO4 白色 加盐酸，无白色沉淀(与硫代硫酸盐区别) 硝酸盐: Cu + NO3- Cu(NO3)2+2NO（红棕色） Fe2+ +NO3- Fe 3+ +NO（棕色环） 区分 NO3- 、NO2-,H2SO4,使湿润的KI_淀粉试纸变蓝,KMnO4,褪色 NO2-,不褪色 NO3-,H2SO4,H2SO4,在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解,16,是证实某一种药物的依据。 根据一类药物中每一种药物化学结构的差异及理化特性，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。 一般鉴别试验依据某类药物共同的特点，区别不同类药物。 专属鉴别试验在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，鉴别各个药物单体。,专属鉴别试验,17,三、 鉴别方法,1、化学鉴别法 2、光谱鉴别法 3、色谱鉴别法 4、显微鉴别法 5、生物学法 6、指纹图谱与特征图谱鉴别法,18,（一）化学鉴别法 供试品加入适当的试剂，在一定条件下，发生化学反应，通过产生可观测到的明显现象，来鉴别药物真伪的方法。 包括：1、呈色反应鉴别法 2、沉淀生成反应鉴别法 3、荧光反应鉴别法 4、气体生成反应鉴别法 5、使试剂褪色鉴别法 6、测定生成物的熔点,19,化学鉴别法特点 反应原理应明确 操作简便、反应快速、实验成本低、应用广 但专属性比仪器分析法差,20,指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。,呈色反应鉴别法,酚羟基的三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基, 有机氟化物的茜素氟蓝法, 芳香第一胺类重氮化-偶合反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基,托烷生物碱类-Vitali反应,肾上腺皮质激素类的四氮唑,含羰基结构的苯肼反应,氨基酸及氨基糖苷类的茚三酮呈色反应,双缩脲反应,21,供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成沉淀,沉淀生成反应鉴别法,还原性基团的银镜反应（异烟肼）,丙二酰脲类的硝酸银反应,氯化物的银盐沉淀,含氮杂环类与生物碱沉淀剂（碘化铋钾、硅钨酸）的沉淀反应,苯甲酸盐类的三氯化铁反应,生成氧化亚铜红色沉淀反应（如肾上腺皮质激素类、葡萄糖）,与重金属离子的沉淀反应（利多卡因）,磺胺类药物的铜盐反应,22,药物本身在可见光下发射荧光 如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光 药物与适当试剂反应后发射荧光 如：氯普噻吨+HNO3后，紫外下显绿色,荧光反应鉴别法,23,大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后加热产生氨气。 红色石蕊试纸变蓝 硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色,气体生成反应鉴别法,化学结构含硫药物，可经强酸处理后加热产生硫化氢气体,含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸汽,含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。,24,使试剂褪色的鉴别法,维生素C的二氯靛酚反应 氧烯洛尔的高锰酸钾反应 司可巴比妥那的碘试液反应,测定生成物的熔点,制备衍生物测定熔点法 操作繁琐费时间，应用较少。,25,（二）光谱鉴别法 1、紫外光谱鉴别法 2、红外光谱鉴别法 3、近红外光谱法 4、原子吸收法 5、核磁共振法 (NMR) 6、质谱鉴别法 (MS) 7、X射线粉末衍射法,26,测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长； 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度； 规定吸收波长和吸收系数法； 规定吸收波长和吸光度比值法； 经化学处理后, 测定其反应产物吸收光谱特性 以上方法可单用，也可几个结合起来使用， 以提高专属性,紫外光谱鉴别法,紫外光谱法操作简便、快速。 用作鉴别的专属性远不如红外光谱法。,27,专属性强、准确度高的特点，应用广（固、液、气） 主要用于组分单一、结构明确的原料药以及结构相近的同类物质。,红外光谱鉴别法,标准图谱法：中国药典要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与药品红外光谱集中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。 对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造成的误差。USP多采用对照品法。,28,利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定量、定性分析。 主要用于元素分析,原子吸收法,29,通过测定供试品指定基团上的质子峰的化学位移 和偶合常数进行鉴别。 NMR技术已在BP和USP中用于药物的鉴别。,核磁共振法,质谱鉴别法 (MS),X射线粉末衍射法,30,鉴 别 方 法,化学鉴别法,光谱鉴别法,指纹图谱与特征图谱鉴别法,色谱鉴别法,显微鉴别法,生物学法,第三节 鉴别方法,薄层色谱鉴别法,HPLC、GC鉴别法,31,（三）色谱鉴别法,利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（保留时间，比移值）进行的鉴别试验。 常采用对比法（与对照品、已知药品，在相同条件下进行色谱分离并比较。） 包括 ：1、薄层色谱鉴别法 2、HPLC、GC鉴别法,32,薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。 在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法。 通过Rf值，斑点颜色进行定性。,薄层色谱鉴别法,HPLC、GC鉴别法,供试品和对照色谱峰保留时间一致。 在鉴别试验中，通常含量测定同时用于鉴别的一种方法。,33,色谱谱鉴别法小结,适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点. 高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC) 供试品和对照品色谱峰保留时间一致. 薄层扫描法(TLC)对照品比较法，供试品斑点与对照品的Rf值及斑点的颜色应一致.,色谱法（ HPLC GC TLC),34,主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。,显微鉴别法,35,利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别。,生物学法,生物效应鉴别法,基因鉴别法,36,中药指纹图谱：目的是通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。 特征图谱：指主要有效成分的特征峰谱图，而指纹图谱除了主要有效成分的特征峰外，还包括更多内容，更具专一性。,指纹图谱与特征图谱鉴别法,第三节 鉴别试验的条件及方法验证,（一）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中max, A, E1%1cm) （二）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察 不到结果，故试验中应注意温度的控制。,38,（三）溶液的酸碱度 许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下进行，溶液的酸碱度能够使各反应物有足够的浓度处于活化状态、使反应产物处于稳定和易于观察状态。 （四）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。,第三节 鉴别试验的条件及方法验证,39,（五）鉴别方法的验证 专属性: 是指其他成分（其他药物成分、杂质、降解产物、辅料等）存在的情况的下，采用的鉴别方法也能正确地鉴别出被测物质的特性。 每种鉴别方法都存在一定的局限性，一般至少采用两种以上不同类型的方法，如化学法和光谱法。 耐用性：测定条件发生小的变化时，不影响测定结果。,第三节 鉴别试验的条件及方法验证,40,（一）鉴别方法选择的原则： 方法要有一定的专属性、灵敏性，便