BDPharmingen产品专题.ppt

BD Pharmingen 产品专题,基因公司市场部 田丽平 Lynn_,主要内容,BD Pharmingen 简单介绍 BD Pharmingen 产品分类 BD Pharmingen 特色技术,BD Pharmingen 简介,BD公司成立于1897年，财富周刊500强 公司的业务分为三大类 ： BD医疗系统 BD生物科学系统 BD临床实验室系统 产品丰富，足迹遍及世界六大洲,BD Pharmingen 简介,BD Biosciencens BD Immunocytometry Systems (IS) BD Pharmingen /pharmingen/ BD Discovery Labware BD Clontech 分子生物学、 细胞生物学、免疫学、流式細胞分析技术等领域 为生命科学的基础研究和临床应用，提供全方位強有力的支援和协助。,BD Pharmingen 简介,BD Pharmingen是华人在美国最成功的生物公司 涉及领域：免疫学，细胞生物学，分子生物学 流式抗体和基于流式平台开发的产品种类日益丰富，拥有全球领先科技和多项专利，与高速发展的研究前沿保持一致,免疫学问题,产生哪些BRM, 以及由何种类型的细胞产生? 这些细胞的数目和产生频率? 体外分析抗原特异性 T cells? 对一个样品同时分析多种BRM (multiplexing)?,BD Pharmingen产品特色,PMG高品质的流式产品在BD和Beckman Coulter的流式细胞仪上都能得到完美的检测结果。 Pharmingen优势在于免疫学领域，不仅是流式。 直标型抗体，FITC, PE, APC等特异性灵敏性好 抗体涉及多个物种，常规抗体齐全。 抗体效价很高。 许多产品具有独家的专利产权。,BD Pharmingen常见抗体,ICC：免疫细胞化学(甩片) IHC：免疫组织化学 IHC(F)*：免疫组织化学-甲醛固定样品（需抗原修复） IHC(Fr)：免疫组织化学-冰冻切片 IHC(P)： 免疫组织化学-石蜡切片 IHC(Zn)：免疫组织化学-锌固定 IC/FCM：胞内染色（流式细胞分析） Ictrl：同型对照,BD Pharmingen 流式抗体标记,缩写 中文名 标记 em (nm) FITC 异硫氰酸荧光素 直标 530 PE 藻红蛋白 直标 575 APC 别藻蓝蛋白 直标 660 PerCP 多甲藻素叶绿素 直标 679 PerCPCy5.5 多甲藻素-叶绿素-花青甙5.5 直标 694 Biotin 生物素 间标，需加avidin/streptavidin标记的二抗 Purified 未标记，间接法检测，需加荧光标记的二抗,BD Pharmingen 产品分类,BD Dimer X,TCR不能自动与Ag结合，Ag必须被摄取、加工，与MHC结合为复合物由APC（DC、B细胞、巨噬细胞）呈递给T细胞。 MHC Class I 将Ag（胞内）呈递给CD8+T 细胞 产生细胞毒性免疫反应 MHC Class II 将Ag（胞外） 呈递给CD4+ T cells 引起细胞因子分泌和Ig的产生,BD Dimer X,MHC Class I 病毒、肿瘤细胞等胞内基因编码的Ag经加工后的肽段或者胞内寄生细菌产生的Ag经加工后的肽段 810 aa 的Ag肽段在ER中与MHC I分子结合 MHC I/肽复合物由Golgi 转运到细胞表面，Ag被呈递给CD8+T细胞 MHC Class II 胞外蛋白经过加工后的抗原肽段，比MHC I分子结合的肽段长且结构复杂 MHC II/肽复合物被呈递给CD4+T细胞,Dimer X 结构,b2微球蛋白使 MHC I 分子具有结合肽段的功能 重组融合蛋白表达于真核细胞系( 鼠浆细胞瘤细胞系J558L), 具有更好的构象完整性，更容易加载肽段，结构高度稳定。,BD OptEIA,特色： F(ab)检测抗体、专用Buffer和稀释体系 包装： Kit、Set 和Pair,BD IMAG 磁分离系统,抗原-抗体反应 磁场原理,BD IMAG 磁分离流程,1 向细胞悬液中加入抗体标记的磁珠,BD IMAG 磁分离产品,BD IMag：直接标记磁珠/间接标记磁珠 磁珠包被了针对白细胞亚群表面特异性标志的单抗 磁珠包被了链霉亲和素（streptavidin） 在实验系统中加入biotin标记的单抗，磁珠通过streptavidin与biotin标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。 这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。,BD ELISPOT,ELISPOT（酶连免疫斑点）：体外检测单个细胞分泌某特定蛋白的水平和确定产生该特定蛋白的细胞频率的工具。,BD ELISPOT,单细胞水平检测分泌到的胞外细胞因子 动态观察活细胞应答而非检测培养上清、血清、血浆、裂解液（静态） 结果以斑点显示, 能计数效应细胞，分析效应分子产生频率 能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达1/300,000 捕获抗体为BD Pharmingen高亲和力、无叠氮钠、低内毒素抗体，不会引起非特异性细胞激活。,ELISA与ELISPOT比较,ELISPOT-细胞产生效应分子一分泌出细胞，被包被在板上的抗体直接捕获，灵敏度更高 ELISA - 细胞产生的效应分子分泌到上清后被稀释，或者被其高亲和力的受体吸收而不被抗体检测到或被蛋白水解酶降解而灵敏度较低ELISA只能检测到分泌的效应分子总量，而不知效应细胞有多少 ELISPOT能计数效应细胞，得到单个细胞分泌效应分子的相对量；细胞活化后产生效应分子的变化,BD CBA,BD Cytometric Bead Array 简称BD CBA，是利用一系列荧光强度不同的微球，同时分析样本中多种成分的流式检测方法。,BD CBA,携带有荧光的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样本孵育后，形成“三明治”复合物。微球在流式细胞仪的FL3通道检测，定性目的蛋白，PE标记的检测抗体在FL2通道来对目的蛋白定量。 液相ELISA 流式检测,BD CBA 技术原理,CBA检测原理,BD CBA特点,液相中反应,实时检测细胞因子的表达 操作简单（无需包被），省时（3h） 同时同步检测多指标 微量样本(5-50ul) 特异性和灵敏度2-7pg/ml, (20-100pg/ml) 避免由于信号放大的假阳性 更好的线性度和更宽的检测范围 流式细胞仪和CBA软件自动分析,CBA与ELISA比较,ELISA 抗原检测的经典方法 单项检测 每项实验样本用量50-200L 需要抗原包被 实验时间大于24h 酶-底物背景干扰,BD CBA 多参数检测 样本用量少-50L 操作方便，节省时间 流式细胞仪自动检测 标准曲线自动生成， 专用软件自动计算结果 无酶-底物背景干扰 提高检测效率,BD CBA 应用,眼泪等来源珍贵的微量样本(5-10ul)，血清、血浆或培养液上清 细胞凋亡等信号传导通道蛋白 肿瘤研究，疾病诊断、预后判断、病程检测 多参数同时分析 SLE，新生儿脓血症等免疫疾病的监控 药物研发，疫苗研究总体免疫功能分析 免疫性疾病：自身免疫病、过敏等炎症反应，白血病、淋巴瘤、癌症等,BD CBA Flex Set-New,Flex Set微球带有近红外和红色两种荧光，分别在流式细胞仪的FL3（近红外荧光）和FL4（红色荧光）通道检测，通过这个二维矩阵（对应于微球上的特定序号）识别捕获微球，从而定性目的蛋白，PE标记的检测抗体在FL2通道来对目的蛋白定量。,CBA Kit与CBA Flex Set比较,CBA Kit 同时检测5或者6个 捕获微球、标准品、检测抗体、缓冲液和稀释液等全部试剂 灵敏度0.3pg/ml 检测范围 0-5000pg/ml CBA Analysis Software和FCAP Array So