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ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes,主要技术手段: MARCM技术 TUNEL法,MARCM技术,如果想在嵌合体中敲除基因, 用FLP/FRT系统,如果想在嵌合体中增加基因表达, 用UAS/Gal4系统,GAL4/UAS系统是一种转基因体系。 原理:利用特定的启动子或增强 子,以组织特异性的方式激 活酵母转录激活子GAL4的表 达,GAL4又以同样的方式引 起GAL4反映元件(UAS)-靶 基因的转录。,GAL4,UAS,UAS/Gal4系统,FLP/FRT 系统,果蝇含有四对染色体,每对染色体中的一条被称为同源染色体,分别来自于母本和父本。 在正常的细胞分裂中,一对同源染色体总是能忠诚地复制,然后分配到新分裂的细胞中,FLP是一个来自酵母的染色体重组酶 FRT则是FLP催化的一段DNA序列,同源重组产生会两个子细胞中, 一个含有双份正常染色体,令一个含有双份突变染色体。 如果我们在正常染色体上添加标示(GFP),那么,可以在果蝇组织中观察突变细胞的表型变化,如果两条染色体中的一条是正常的,而另一条基因被突变掉, 那么对于绝大部分没有重组的细胞来说,它们是“杂合体”。,FLP/FRT 系统,MARCM 技术 (mosaic analysis with a repressible cell marker ),同源染色体重组,非同源染色体组合,GAL80,UAS/GFP/mutation,突变细胞,TUNEL法 DNA片段化与检测,细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的过程,染色体DNA首先在核酸内切酶作用下,随机切断; 在核小体单位之间被随机切断。形成180-200bp核小体式片段; DNA双链断裂出现缺口即可产生一系列DNA的3-OH末端,被染色。,增加细胞膜通透性,TdT 酶和荧光素标记 的dUTP进入细胞,在TdT酶的辅助下dUTP与凋亡细胞中断裂DNA的3-OH末端结合,HRP标记的抗荧光 素抗体特异结合,HRP底物,H2O2发生氧化、环化反应,形成棕褐色,显微镜
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