脓汁中病原性球菌和粪便中致病性杆菌的鉴定.ppt

脓汁中病原性球菌和粪便中致病性杆菌的鉴定,新乡医学院微生物学教研室,目的要求,掌握血浆凝固酶试验和玻片凝集试验的操作方法； 熟悉血浆凝固酶试验和玻片凝集试验的原理； 了解病原性球菌和杆菌的一般鉴定过程。,脓汁中病原性球菌的鉴定,脓汁标本在血平板上经过24小时的培养，已经长出菌落，首先观察菌落的特点： 菌落的形态； 光滑程度； 色素的产生情况； 细菌的溶血情况。,观察菌落特点,形态学鉴定,革兰染色，观察细菌的染色性状和排列特点。,G-球菌,双球菌 结合临床进行判断,G+菌链状排列或成对排列,肺炎链球菌 胆汁溶菌；菊糖发酵；奥普托辛 甲链 A群链球菌 乙链 丙链,胆汁溶菌实验,肺炎双球菌 + 甲型溶血性链球菌 ,菊糖发酵实验,肺炎双球菌 + 甲型溶血性链球菌 ,奥普托辛实验,奥普托辛能干扰肺双叶酸的合成，故对肺炎 双球菌的抑制作用比较大。 肺双的抑菌圈直径一般大于20mm为阳性； 甲链的抑菌圈直径小于12mm为阴性； 如果介于1220mm之间时应重复试验。,结果判断,菌落特点：形态；色素；溶血； 革兰染色的特点：判断形态，排列和染色； 根据溶血判断链球菌的种类；根据生化反应 区别肺炎双球菌和甲链。,G+菌葡萄串状排列,首先观察菌落特点：色素；溶血情况； 进一步鉴定： 血浆凝固酶实验； 耐热核酸酶实验； 甘露醇的发酵,凝 固 酶 试 验,新 乡 医 学 院 微生物学教研室,凝固酶,是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔的血浆发生凝固的酶类物质。 致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶 凝固酶分为两种：游离凝固酶、结合凝固酶,方法,试管法 适合于游离凝固酶的检查,玻片法 适合于结合凝固酶的检查,试管法凝固酶试验,原理,凝血酶样物质,玻片法凝固酶试验,纤维蛋白原受体 （结合凝固酶）,原理,致病菌,纤维蛋白原,材料,菌种：金黄色葡萄球菌，白色葡萄球菌 兔血浆 试剂：生理盐水（N.S） 玻片：,方法,分区 制备细菌悬液 滴加兔血浆 观察结果,1. 分区,玻片分为左右两区并做好标记,2. 制备细菌悬液,每区分别加N.S 1滴,分别挑取金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌培养物少许，各置N.S中制成均匀的细菌悬液，观察无自凝现象者可继续后续实验步骤。,3. 滴加兔血浆,于每滴细菌悬液内各加兔血浆一滴，混匀。,4. 观察结果,如出现颗粒状凝集现象即为阳性。如不立即发生凝集，可稍待1-2min，并轻摇玻片加速反应，若仍无凝集则为阴性。,结果判断,菌落特点：形态；色素；溶血； 革兰染色的特点：判断形态，排列和染色； 根据色素，溶血，血浆凝固酶判断细菌的致 病性强弱，是否为金葡菌。,粪便中致病性杆菌的鉴定,肠杆菌的一般鉴定程序,标本 直接涂片 分离培养：（SS，EMB/MAC） （染色镜检） 可疑菌落 TSIA或KIA 药物敏感试验 生化，血清学鉴定，动物试验,1 粪便标本在SS平板上经过24小时的培 养，长出菌落，首先观察菌落的特点： 2 挑取可疑菌落，革兰染色，进行形态学 检测，同时接种于双糖铁培养基。,观察菌落特点,肠道杆菌的生长结果,SS 双糖铁 大肠杆菌 粉红色大菌落 黄色 痢疾杆菌 无色细小 上红下黄 半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 上红下黄 半透明菌落 黑色沉淀,血清学鉴定,凝集反应： 试管凝集； 玻片凝集。,玻片法凝集反应 原理：颗粒性抗原(未知细菌)+抗体(已知) 电解质 凝集(+) ; 未凝集(-) 材料，方法： 伤寒血清+待测菌 伤寒血清+待测菌 结果：凝集+ ；无凝集 。,结果判断,SS平板：菌落的形态，颜色； 双糖铁培养基上生化特点； 革兰染色：形态，排列，染色特点； 玻片凝集的反应结果。,操作内容,1 革兰染色： 每台2张玻片，染1张球菌和1张杆菌； 2 血浆凝固酶实验： 每台1张玻片； 3 玻片凝集反应： 每台1张玻片； 4 接种双糖铁培养基： 每