GBZ-T 160.81-2004 工作场所空气中生物类化合物的测定方法.pdf

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160.81-2004 工作场所空气中生物类化合物的测定方法 160.81 -2004 工作场所空气中生物类化合物 工作场所空气 生物类化合物 工作场所空气中 类化合物的测定方法GBZ-T
资源描述:
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内容简介:
C 52 GBZ 中华人民共和国国家职业卫生标准 GBZ/T 160.812004 工作场所空气有毒物质测定 生物类化合物 Methods for determination of biological compounds in the air of workplace 2004年5月21日发布 2004年12月1日实施 中华人民共和国卫生部 发布 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 GBZ/T 160.812004 前 言 为贯彻执行工业企业设计卫生标准(GBZ 1) 和工作场所有害因素职业接触限值 (GBZ 2) , 特制定本标准。本标准是为工作场所有害因素职业接触限值配套的监测方法,用于监测工作场所空 气中生物类化合物 包括洗衣粉酶等的浓度。 本标准从2004年12月1日起实施。 本标准由全国职业卫生标准委员会提出。 本标准由中华人民共和国卫生部批准。 本标准起草单位:上海医科大学公共卫生学院。 本标准主要起草人:梁友信等。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 GBZ/T 160.812004 工作场所空气有毒物质测定 生物类化合物 1 范围 本标准规定了监测工作场所空气中生物类化合物浓度的方法。 本标准适用于工作场所空气中生物类化合物浓度的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款,通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后 所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GBZ 159 工作场所空气中有害物质监测的采样规范 3 含酶洗衣粉中酶的抗体结合比色法 3.1 原理 空气中含酶洗衣粉粉尘中的酶用玻璃纤维滤纸采集,洗脱后,与包被在酶标板上的特异性抗体 (Ab1)结合,然后加入特异性抗体(Ab2),最后与一连有标记物的抗体(Ab3)结合,再与显色 剂反应生成有色化合物,比色定量。 3.2 仪器 3.2.1 玻璃纤维滤纸。 3.2.2 采样夹,滤料直径40mm。 3.2.3 小型塑料采样夹,滤料直径25mm。 3.2.4 空气采样器,流量010L/min。 3.2.5 烧杯,50ml。 3.2.6 酶标板和酶标板盖。 3.2.7 多孔道微量加样器。 3.2.8 可调微量加样器。 3.2.9 恒温箱。 3.2.10 离心管,25ml。 3.2.11 具塞试管,10ml。 3.2.12 酶标仪。 3.3 试剂 实验用水为去离子水。所有试剂于冰箱保存。 3.3.1 抗体包被缓冲液,pH9.60.2:称取1.51g 碳酸钠和2.93g 碳酸氢钠,溶于1000ml 水中。可 保存2 个月。 3.3.2 洗板液:称取29.22g 氯化钠、1.86g Tris和1.0g 牛血清白蛋白(BSA),溶于1000ml 水中,用盐 酸溶液(6mol/L)调pH至8.0,加入0.5ml 吐温20,混匀,可保存1 周。 3.3.3 柠檬酸- 磷酸缓冲液, pH5.00.2: 称取7.30g 柠檬酸和23.87g 磷酸氢二钠(Na2HPO4 12H2O) 溶于1000ml 水中,可保存1 个月。 5.4 BSA封闭液:2.0g BSA溶于100ml 洗板液中。 3.3.5 样品萃取液:称取29.22g 氯化钠、0.93g Tris、4.96g 硫代硫酸钠(Na2S2SO3 5H 2O)和0.147g 氯 化钙(CaCl22H2O),溶于约800ml 水中,加入1.0g BSA,溶解后,用盐酸溶液(6mol/L)调pH至8.0, 转移到1000ml 容量瓶中,定容后加入1.0ml 吐温20,混匀,可保存1 周。 3.3.6 邻苯二胺(OPD)溶液,pH5.0:称取8.0mg OPD,置于50ml 棕色瓶中,加入15ml 柠檬酸- 磷酸缓冲液,溶解后,加入5l 过氧化氢(30),混匀。临用前配制。若溶液变黄,应重新配制。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 3.3.7 兔抗体包被溶液:用10ml 抗体包被缓冲液稀释10l 兔抗血清,混匀。 3.3.8 豚鼠抗体:用10ml 洗板液稀释10l 豚鼠抗体,混匀。 3.3.9 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体:用10ml 洗板液稀释10l 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体, 混匀。 3.3.10 硫酸溶液,1mol/L:将55.5ml硫酸(201.84g/ml)慢慢加入900ml 水中,混匀。 3.4 样品的采集、运输和保存 现场采样按照GBZ 159执行。 3.4.1 短时间采样:在采样点,用装好玻璃纤维滤纸的采样夹,以5L/min 流量采集15min 空气样品。 3.4.2 长时间采样:在采样点,将装好玻璃纤维滤纸的小型塑料采样夹,以1L/min 流量采集28h 空气样品。 3.4.3 个体采样:在采样点,将装好玻璃纤维滤纸的小型塑料采样夹佩戴在采样对象的前胸上部,以 1L/min 流量采集28h 空气样品。 采样后,将玻璃纤维滤纸的接尘面朝里对折2次,放入清洁的塑料袋或纸袋中运输和保存。 3.5 分析步骤 3.5.1 对照试验:将装好玻璃纤维滤纸的采样夹带至采样点,除不连接采样器采集空气样品外,其余 操作同样品,作为样品的空白对照。 3.5.2 样品处理:将采过样的玻璃纤维滤纸放入烧杯内,加 25ml 样品萃取液,至少搅拌 20min 后, 用滤纸过滤或离心,滤液或上清液供测定。若样品液中待测物的浓度超过测定范围,可用样品萃取 液稀释后测定,计算时乘以稀释倍数。 3.5.3 标准曲线的绘制: 3.5.3.1 在8只具塞试管中,用标准酶配制成0、0.3、0.6、1.2、2.4、3.6、4.8和6.0ng/ml 标准系列。 3.5.3.2 酶标板的包被:于酶标板的每个孔中加100l 兔抗体包被溶液,置4冰箱内放置过夜。(加 样时不可触摸酶标板底部,不容许冰冻)。第二天,从冰箱内取出酶标板,翻转,弃去兔抗体包被 溶液,在数层纸上拍打,甩尽孔中的兔抗体包被溶液。每个孔用洗板液洗涤3 次,每次约250l。然 后加200l BSA封闭液,加样头不能接触酶标板。盖上酶标板盖,放置1h 以上。甩尽孔中液体。若 不立即使用,可用酶标板膜封好,可储存2 个月。 3.5.3.3 向每个孔中加入50l 标准酶溶液,全部加平行样。加入50l 豚鼠抗体。将酶标板放入37 恒温箱内,反应90min。取出,每个孔用洗板液洗涤3 次,每次约250l。各加入100l 标有过氧化 物酶的兔抗豚鼠抗体,再置37恒温箱内,反应90min。取出,每个孔用洗板液洗涤3 次,每次约250 l。用柠檬酸- 磷酸缓冲液冲洗3 次。以保持同一时间间隔向每个孔加入100l OPD溶液;放入37恒 温箱内,反应至有合适的黄色生成;向每个孔以保持同一时间间隔加入150l 硫酸溶液,以终止显 色反应。擦净酶标板底部,用酶标仪测定每个孔的吸光度(双波长法为492nm和620nm)。 3.5.3.4 以测得的吸光度值对相应的酶浓度(ng/ml)绘制标准曲线。 3.5.4 样品测定:用测定标准系列的操作条件测定样品溶液,由标准曲线得样品中酶浓度(ng/ml)。 3.6 计算 3.6.1 按式(1)将采样体积换算成标准采样体积: 293 P V o = V (1) 273 + t 101.3 式中:V o 标准采样体积,L; V 采样体积,L; t 采样点的温度,; P 采样点的大气压,kPa。 3.6.2 按式(2)计算空气中酶的浓度: 25 c C = (2) Vo 式中:C 空气中酶的浓度,g/m3 ; 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 c 测得样品中酶的浓度,ng/ml; 25 洗脱液的体积,ml; Vo 标准采样体积,L。 3.6.3 时间加权平均容许浓度按GBZ 159规定计算。 3.7 说明 3.7.1 本法的检出限为0.05ng/ml,最低检出浓度为0
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