GB 13091－91 饲料中沙门氏菌的检验方法.pdf
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13091-1991
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中华 人 民共 和 国 国 家标 准 饲料中沙门氏菌的检验方法G B 1 3 0 9 1 一 9 1 M e t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f S a l mo n e l l a i n f e e d s 本标准等效采用国际标准I S O 6 5 7 9 -1 9 8 1 饲料中沙门氏菌检验方法 。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中沙门氏菌的测定方法。 本标准适用于配合饲料( 包括混合饲料) 和动物性单一饲料中沙门氏菌的检验。 2 引用标准 G B 4 7 8 9 . 1 食品 卫生微生物学检验 总则 3 原理 根据沙门氏菌的生理特性， 选择有利于沙门氏菌增殖而大多数细菌受到抑制生长的培养基， 进行选 择性增菌、 选择性平板分离， 以求检出饲料中的沙门氏菌。 4 设备和材料 4 . 1 天平: 感量1 g ， 最大秤量1 0 0 0 g , 4 . 2 显微镜: 1 5 0 0 X。 4 . 3 温箱: 3 6 士1 “C. 4 3 士1 0C。 4 . 4 冰箱: 普通冰箱。 4 . 5 均质器: 8 0 0 0 1 0 0 0 0 r / m i n , 4 . 6 广口 三角瓶: 5 0 0 m L . 4 . 7 三角瓶: 2 5 0 m L . 4 . 8 水浴锅: 4 5 士1 0C , 5 5 士1 0C, 7 7 士1 C。 4 . 9 吸管: 1 , 5 , 1 0 m L , 4 . 1 0 平皿: 皿底直径9 C m, 4 . 1 1 电炉。 4 . 1 2 酒精灯。 4 . 1 3 接种棒: 镍铭丝。 4 . 1 4 试管。 4 . 1 5 载玻片。 4 . 1 6 试管架。 4 . 1 7 干燥箱: 5 0 - 2 5 0 士1 C。 4 . 1 8 乳钵。 国家技术监督局 1 9 9 1 - 0 7 - 1 6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一 9 1 4 . 1 9 M度计， l o o no 4 . 2 0 高压灭菌器: 2 . 5 k g 5 培养墓和试荆 详见附录A( 补充件) 。 5 . 1 缓冲蛋白陈水。 5 ， 2 四硫磺酸钠煌绿增菌液。 5 . 3 亚硒酸盐肌氨酸增菌液。 5 . 4 酚红煌绿琼脂。 5 . 5 D H L琼脂， 5 . 6 营养琼脂。 5 ， 7 三糖铁琼脂。 5 . 8 尿素琼A 6 5 . 9 赖氨酸脱狡试验培养基。 5 . 1 0 v - P反应培养基。 5 . 1 1 肌酸溶液。 5 . 1 2 - - 禁酚乙醉溶液。 5 . 1 3 氢氧化钾溶液。 5 . 1 4 靛基质反应培养基。 5 . 1 5 柯凡克试剂。 5 - 1 6 P 一 半乳糖昔酶试剂。 5 . 1 7 半固体营养琼脂。 5 . 1 8 盐水溶液。 6 样品采集 参照G B 4 7 8 9 . 1 的要求执行。 7 检验程序 沙门氏菌检验程序如下: 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G s 1 3 0 9 1 一9 1 检验样品 2 5 g 顶增菌 培养 荃 缓冲蛋白陈水) 2 2 5 . L . 在3 6 - C C 培养1 6 -2 0 h 取 预场曲 培养 物 l O m L 接种于 四 硫砚 吐 钠 煌 姆增圈 液中 ， 在4 3 C培养1 8 -2 0 h 取 预增曲 培养 物 I O . L 接 种 于 亚硒 酸 盐跳氮酸 增自 液中 ， 在3 6 i 1 C 培养1 8 一 2 4 h 或4 8 h 煌绿林脂 ( 平皿) 3 6 3 1 Y 培弃 2 0 -4 0 h , 如有需要培养至相h D H L凉脂( 平皿) 3 6 3 1 C培养2 0 - 2 4 h , 如有书要，培养至4 8 h 每 乎 皿 取5 个 有 沙 门 氏 留 特 征 的 自 落 ， 接种在营养 旅 脂上，3 6 2 1 培养1 8 一 2 4 h 生化鉴定血清鉴定 结果报告 8 操作 8 . 1 预增菌培养 取检验样品2 5 g ， 加入装有2 2 5 m L缓冲蛋白 陈水的5 0 0 m L广口 瓶内( 粒状可用均质器， 以8 0 0 0 - 1 0 0 0 0 r / m i n 打碎1 m i n ， 或用乳钵加灭菌砂磨碎) 。 在3 6 士1 培养1 6 - 2 0 h , 82 选择性增菌培养 取预增菌培养物1 0 m L ， 接种于装有1 0 0 m L四硫磺酸钠煌绿增菌液的培养瓶中， 另取预增菌培养 物1 0 m L ， 接种于装有1 0 0 m L亚硒酸盐胧氨酸增菌液培养瓶中， 四硫磺酸钠培养瓶在4 3 培养。 亚硒酸 盐胧氨酸培养瓶在3 6 士1 培养。 8 . 3 分离培养 取8 . 2 培养物一接种环， 分别划线接种在酚红煌绿琼脂平皿和D E l琼脂平皿上， 为取得明显的单个 菌落， 取一环培养物， 接种两个平皿， 第一个平皿接种后， 不烧接种环， 连续在第二个平皿上划线接种， 将 平皿底部向上在3 6 士1 培养。 必要时可取8 . 2 培养物重复培养一次。 8 . 3 门培养2 0 - 2 4 h后， 检查平皿中是否出现沙门氏菌典型菌落， 生长在酚红煌绿琼脂上的沙门氏菌 典型菌落， 使培养基颜色由粉红变红， 菌落为红色透明; 生长在D H L培养基上的沙门氏菌典型菌落， 为 黄褐色透明， 中心为黑色， 或为黄褐色透明的小型菌落。 8 . 3 . 2 如生长微弱， 或无典型沙门氏菌落出现时， 可在3 6 士I C 重新培养1 8. 2 4 h 。 再检验平皿是否有 1 6 0 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一 9 1 典型沙门氏菌菌落。 8 . 3 . 3 辨认沙门氏菌菌落， 在很大程度上依靠经验， 它们外表各有不同， 不仅是种与种之间， 每批培养 基之间也有不同， 此时， 可用沙门氏菌多价因子血清， 先与菌落作凝集反应， 以帮助辨别可疑菌落。 8 ， 4 鉴定培养 从每种分离平皿培养基上， 挑取5 个被认为可疑菌落， 如一个平皿上典型或可疑菌落少于5 个时， 可 将全部典型或可疑菌落供进行鉴定。 挑选的菌落在营养琼脂平皿上划线培养， 在3 6 士1 培养1 8 2 4 h ， 用纯培养物作生化和血清鉴定。 8 . 4 . 1 生化鉴定 将从8 . 4 培养基上 挑选的典型菌落， 接种在8 . 4 . 1 . 1 8 . 4 . 1 . 6 培养基上。 8 . 4 门. 1 三糖铁培养基 在琼脂斜面上划线和穿刺， 在3 6 士1 培养2 4 h 。 培养基变化见表1 . 表 1 三糖铁培养基变化表 培 养 基 部 位培 养 基 变 化 琼脂斜面 琼脂深部 黄色 红色或不变色 底端黄色 红色或不变色 穿刺黑色 气泡或裂缝 乳糖和蔗糖阳性 乳糖和蔗糖阴性 葡萄糖阳性 葡萄糖阴性 形成硫化氢 葡萄塘产气 典型沙门氏菌培养基， 斜面显红色， 底端显黄色， 有气体产生， 有9 0 %形成硫化氢， 琼脂变黑。 当分离到乳糖阳性沙门氏菌时， 三糖铁斜面是黄色的， 因而证实沙门氏菌， 不应仅仅限于三糖铁培 养的结果。 8 . 4 . 1 . 2 尿素琼脂培养基 在琼脂表面划线， 在3 6 士1 培养2 4 h ， 应不时检查， 如反应是阳性， 尿素极快的释放氨， 它使酚红的 颜色变成玫瑰红色桃红色， 以后再变成深粉红色， 反应常在2 - 2 4 h 之间出现。 8 . 4 . 1 . 3 赖氨酸脱浚反应培养基 将培养物刚好接种在液体表面之下， 在3 6 士1 0C 培养2 4 h ， 生长后产生紫色， 表明是阳性反应。 8 . 4 - 1 - 4 V- P反应培养基 将可疑菌落接种在V - P 反应培养基上， 在3 6 士1 培养2 4 h ， 取培养物。 . 2 m L于灭菌试管中， 加肌 酸溶液2 滴， 充分混匀后加a - 蔡酚乙醇溶液3 滴， 充分混匀后再加氢氧化钾溶液2 滴， 再充分振摇混匀， 在 1 5 m i n 内， 形成桃红色， 表明为阳性反应。 8 . 4 - 1 . 5 靛基质反应培养基 取可 疑菌落， 接种于装有5 m L胰蛋白陈色氨酸培养基的试管中， 在3 6 士1 培养2 4 h ， 培养结束后， 加柯凡克试剂1 mL ， 形成红色， 表明是阳性反应。 8 . 4 门， 6 检查P - 半乳糖昔酶的反应 取一接种环可疑菌落， 悬浮于装有。 . 2 5 m L生理盐水的试管中， 加甲苯1 滴， 振摇混匀， 将试管在3 6 士1 水浴锅中放置数分钟， 加O N P G试液。 . 2 5 mL ， 将试管重新放入3 6 士1 水浴锅中2 4 h ， 不时检查， 黄色表明为阳性反应， 反应常在2 0 m i n后明显出现。 8 . 4 . 1 . 7 生化试验( 见表2 ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G s 1 3 0 9 1 一 9 1 表 2 生化试验表 可疑蔺在培养基上的反应阳性或阴性 出现此反应者沙门氏菌株f “ 分率 三糖铁葡萄佬形成酸( 8 . 4 . 1 . 1 ) +1 00 三搪铁荀萄糖产气( 8 . 4 . 1 . 1 ) +9 1 .9 三锗铁乳精( 8 . 4 . 1 . 1 ) 99 . 2 三糖铁蔗锗( 8 . 4 . 1 . 1 )9 9 . 5 三糖铁硫化氢( H z S ) ( 8 . 4 . 1 . 1 ) +91 . 6 尿素分解( 8 - 4 . 1 - 2 )1 0 0 赖氨酸脱艘反应( 8 . 4 . 1 . 3 )十9 4 . 6 P - 半乳糖昔酶反应( 8 . 4 . 1 . 6 )9 8 . 5 V- P反应( 8 . 4 . 1 - 4 )9 8 . 5 靛荃质反应( 8 . 4 . 1 . 5 )9 8 . 5 8 . 4 . 2 血清学鉴定 以纯培养菌落， 用沙门氏菌因子血清O , V i 或H型， 用平板凝集法， 检查其抗原的存在。 8 . 4 - 2 . 1 除去能自 凝的菌株 在仔细攘净的玻瑞板上， 放1 滴盆水， 使部分被检菌落分散于盐水中， 均匀混合后， 轻轻摇动3 0 - 6 0 s ， 对着黑的背影观察， 如果细菌已 凝集成或多或少的清晰单位， 此菌株被认为能自 凝。 不宜提供作 抗原鉴定。 8 . 4 - 2 . 2 O抗原检查 用认为无自 凝力的纯菌落， 按8 . 4 - 2 . 1 方法， 用1 滴O型血清代替盐水， 如发生凝集， 判为阳性。 8 - 4 - 2 . 3 v i 抗原检查 用认为无自 凝力的纯菌落， 按8 . 4 - 2 . 1 方法， 用1 滴v i 型血清代替盐水， 如发生凝集， 判为阳 性。 8 . 4 . 2 . 4 H抗原检查 用认为无自 凝力的纯菌落接种在半固体营养琼脂中， 在3 6 士1 培养1 8 2 0 h ， 用这种培养物作为 检查H抗原用， 按照8 . 4 . 2 . 1 方法， 用1 滴H血清代替盐水， 如发生凝集， 判为阳性。 8 . 4 . 3 生化和血清试验综合鉴定( 见表3 ) 表 3 生化和血清试验综合鉴定表 生化反应有无自凝血清学反应说明 典型无O , V i 或H抗原阳性被认为沙门氏菌菌株 典型无全为阴性反应 可能是沙门氏菌 典型有未作检查 可能是沙门氏菌 无典型反应无 O , V i 或H抗原阳性可能是沙门氏菌 无典型反应无全为阴性反应不认为是沙门氏菌 注: 沙门氏菌可疑菌株， 送专门菌种鉴定中心进行鉴定。 9 检验报告 综合以上生化试验、 血清鉴定结果， 报告检验样品是否含有沙门氏菌。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一9 1 附录A 培养基和试剂制备 ( 补充件) 除特殊规定外， 本标准所用化学试剂为分析纯或化学纯; 生物制剂为细菌培养用; 水为蒸馏水。 缓冲蛋白膝水 1 成分 蛋白陈 氯化钠( G B 1 2 6 6 ) 磷酸氢二钠( N a , H P 0 , “ 1 2 H , O, G B 1 2 6 3 ) 磷酸二氢钾( K H , P O G B 1 2 7 4 ) 蒸馏水 月.If AA 1 0g 5g 9g 1 . 5 g 1 0 0 0 m l p H7 . 0 A l . 1 . 1 制法 按上述成分配好后. 校正p H， 分装于大瓶中， 1 2 1 C 高压灭菌2 0 m i n , 临用时分装在5 0 0 m L瓶中， 每 瓶2 2 5 m l - ， 或配好后校正p H， 分装于5 0 0 m L瓶中， 每瓶2 2 5 m L , 1 2 1 高压灭菌， 2 0 m i n 后备用。 A 2 四硫确酸钠煌绿增菌液 A 2 . ， 基础液 A 2 . 1 . 1 成分 牛肉 浸膏5 9 氯化钠( G B 1 2 6 6 ) 3 g 蛋白 陈.1 0 g 碳酸钙4 5 g 蒸馏水1 0 0 0 m L p H7 . 0 A 2 门， 2 制法 将各成分加入蒸馏水中， 加热至约7 0 溶解， 校正p H, 1 2 1 高压灭菌2 0 m i n , A 2 . 2 硫代硫酸钠溶液 A 2 . 2 . 1 成分 硫代硫酸钠( N a , S , O , “ 5 H , O, G B 6 3 7 ) 5 0 g 蒸馏水1 0 0 m L A 2 . 3 碘溶液 A 2 . 11 成分 碘( G B 6 7 5 ) 2 0 g 碘化钾( G B 1 2 7 2 ) 2 5 g 蒸馏水加至1 0 0 m L A 2 . 3 - 2 制法 将碘化钾充分溶解于少量蒸馏水中， 加入碘片， 振摇玻璃瓶至碘片全部溶解， 再加入蒸馏水至规定 量， 贮 于 棕色瓶内， 紧塞瓶塞备用。 A 2 . 4 煌绿水溶液 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一 9 1 A 2 . 4 . 1 成分 煌绿 蒸馏水 放在暗处， 不少于1 d ， 使其自然灭菌。 A 2 . 5 牛胆盐溶液 A 2 . 5 . 1 成分 千燥牛胆盐 蒸馏水 A 2 . 5 . 2 制法 煮沸溶解， 1 2 1 高压灭菌2 0 m i n , A 2 . 6 完全培养基制备 基础液 硫代硫酸钠溶液 碘液 煌绿溶液 牛胆盐溶液 临用前， 按上列顺序， 以无菌操作， 依次加入于基础液中 成分， 分装于灭菌瓶中， 每瓶1 0 0 m L , 。 59 1 0 0 M L 1 0g 1 0 0 m l 9 0 0 mL 1 0 0 mL 2 0 mL 2 mL 5 0 mL ， 每加人一种成分， 均应摇匀后再加另一种 亚硒酸盐脱氮酸增菌液 ， 基础液 . 1 . 1 成分 胰蛋白陈 乳糖( H G 3 -1 0 0 0 ) 磷酸氢二钠( N a , H P O , “ 1 2 H , O, G B 1 2 6 3 ) 亚硒酸钠 蒸馏水 J八0八1曰 AAA 5g 4g 1 0g 4 9 1 0 0 0 ml p H7 . 0 A 3 . 1 . 2 制法 溶解前三种成分于水中， 煮沸5 m i n ， 冷却后， 加人亚硒酸钠， 校正p H后分装， 每瓶1 0 0 0 m L A 3 . 2 1 - 脱氨酸溶液 A 3 . 2 . 1 成分 L - 肤氨酸。 . 1 g 1 m o l / L氢氧化钠( G B 6 7 9 ) 溶液1 5 m L A 3 . 2 . 2 制法 在灭菌瓶中， 用灭菌水将上述成分稀释到1 0 0 m L ， 毋须燕汽灭菌。 A 3 . 3 完全培养基制备 基础液1 0 0 0 ml L - 胧氨酸溶液1 0 ml , p H7 . 0 基础液冷却后， 以无菌操作加L - 胧氨酸溶液， 将培养基分装于适当容量的灭菌瓶中， 每瓶1 0 0 m l 注: 培养基在配制当日使用。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 13 0 9 1 一 9 1 A 4 酚红、 煌绿琼脂 A 4 . 1 基础液 A 4 . 1 . 1 成分 牛肉 浸膏5 9 蛋白 陈1 0 g 酵母浸液粉末3 9 磷酸氢二钠( N a , H P O G B 1 2 6 3 ) 1 g 磷酸二氢钠( N a H , P O G B 1 2 6 7 ) 0 . 6 g 琼脂1 2 1 8 g 蒸馏水9 0 0 m L p H7 . 0 A 4 . 1 . 2 制法 将上述成分加水煮沸溶解， 校正p H, 1 2 1 高压灭菌2 0 m i n , A 4 . 2 糖、 酚红溶液 A 4 . 2 . 1 成分 乳糖( H G 3 -1 0 0 0 ) 1 0 g 蔗糖( H G 3 -1 0 0 1 ) 1 0 g 酚红( H G 3 -9 5 9 ) 0 . 0 9 g 蒸馏水加至1 0 0 m L A 4 . 2 - 2 制法 将各成分溶解于水中， 在7 0 水浴锅中加温2 0 m i n ， 冷却至5 5 立即使用。 A 4 . 3 煌绿溶液 见A 2 . 4 条。 A 4 . 4 完全培养基制备 基础液9 0 0 m L 糖、 酚红溶液1 0 0 m L 煌绿1 m l , 在无菌条件下， 将煌绿溶液加入到冷却至约5 5 的糖、 酚红溶液中， 再将糖、 酚红、 煌绿溶液加入到 5 0 5 5 基础液中混合。 A 4 . 5 琼脂平皿制备 将A 4 . 4 制备的培养基在水浴锅中溶解， 冷却至5 0 -5 5 C， 倾注入灭菌的平皿中。 大号平皿， 倾入约 4 0 m l ， 小号平皿， 倾入约1 5 m L， 待凝固后备用， 平皿在室温保存， 不超过4 h ， 在冰箱保存， 不超过2 4 h , A 5 D H L琼脂 A 5 . 1 成分 蛋白陈 牛肉浸膏 乳糖( H G 3 -1 0 0 0 ) 蔗糖( H G 3 -1 0 0 1 ) 去氧胆酸钠 硫代硫酸钠( G B 6 3 7 ) 柠檬酸钠( H G 3 -1 2 9 8 ) 2 0 g 3g 1 0 g 1 0g1 0 1g 2 . 3 g 1 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一 9 1 柠檬酸铁钱1 9 中 性红。0 3 g 琼 脂1 8 2 0 g 蒸馏水1 0 0 0 m L p H7 . 3 A S 门. 1 制法 将除中性红和琼脂以外的成分溶解于4 0 0 m L蒸馏水中， 校正p H， 再将琼脂于6 0 0 m L蒸馏水中煮 沸溶解， 两液合并， 加入。 . 5 %中 性红水溶液6 m L ， 待冷却至5 0 -5 5 C ， 倾注平皿。 A 6 营养琼脂 A 6 . 1 成分 牛肉浸膏 蛋白陈 琼脂 蒸馏水 3g 5g 9 1 8 g 1 0 0 0 ml , p H7 . 0 A 6 . 1， 制法 将上述各成分煮沸溶解， 校正p H , 1 2 1 高压灭菌2 0 m i n . A 6 . 1 - 2 平皿制备 将A 6 . 1 . 1 制备的营养琼脂在水浴锅里溶解， 冷却至5 0 - 5 5 时， 倾注入灭菌平皿中， 每皿约1 5 mL a A 7 三枪铁琼脂 A 7 . 1 成分 牛肉浸膏3 g 酵母浸青3 g 蛋白 陈2 0 g 氯化钠 G B 1 2 6 6 ) 5 g 乳糖( H G 3 -1 0 0 0 ) 1 0 g 蔗糖( H G 3 -1 0 0 1 ) 1 0 g 葡萄糖( H G 3 -1 0 9 4 ) 1 g 柠檬酸铁。 . 3 g 硫代硫酸钠( G B 6 3 7 ) 0 . 3 g 酚红( H G 3 -9 5 9 ) 0 . 0 2 4 g 琼脂1 2 1 8 g 蒸馏水1 0 0 0 m L p H7 . 4 A 7 _ 1 . 1 制法 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中， 校正p H ， 加入琼脂， 加热煮沸， 以溶化琼脂， 再加人 0 . 2 % 酚红溶液1 2 m L ， 摇匀， 分装试管， 装量宜多些， 以 便得到较高的底层， 1 2 1 高压灭菌2 0 m i n ， 放置 高层斜面备用。 A S 尿紊琼脂 A 8 . 1 基础液 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一 9 1 A 8 . 1 . 1 成分 蛋白 陈 1 9 葡萄糖( H G 3 -1 0 9 4 ) 1 g 氯化钠( G B 1 2 6 6 ) 5 g 磷酸二氢钾( K H 2 P 0 4 , G B 1 2 7 4 ) 2 g 酚红( H G 3 -9 5 9 ) 0 . 0 1 2 g 琼脂1 2 1 8 g 蒸馏水1 0 0 0 m L p H6 . 8 A 8 . 1 . 2 制法 将上述成分溶于水中， 煮沸， 校正p H, 1 2 1 高压灭菌2 0 m i n e A 8 . 2 尿素溶液 A 8 . 2 . 1 成分 尿素4 0 0 g 蒸馏水加至1 0 0 0 m L A 8 . 2 . 2 制法 将尿素溶于水中， 通过滤器除菌， 并应检查灭菌情况。 A 8 . 3 完全培养基制备 基础液9 5 0 m L 尿素溶液5 0 m L 在无菌条件下， 将尿素溶液加到事先溶化并冷却至4 5 基础液中， 分装试管， 放置成斜面备用。 A 9 赖氮酸脱翔试验培养荃 A 9 . 1 成分 L赖氨酸盐酸盐5 g 酵母浸膏3 9 葡萄糖( H G 3 -1 0 9 4 ) 1 g 澳甲酚紫0 . 0 1 5 g 蒸馏水1 0 0 0 m L p H6 . 8 A 9 . 1 . 1 制法 将上述各成分溶于水中煮沸， 校正p H， 分装于小试管中， 每支约5 m l , , 1 2 1 高压灭菌1 0 m i n ， 备 用。 A1 0 A 1 0 . A1 0 . V - P反应培养荃 1 成分 蛋白肮79 葡萄糖( H G 3 -1 0 9 4 ) 6 g 磷酸氢二钾5 9 蒸馏水1 0 0 0 m L p H6 . 9 ， . 1 制法 将上述成分溶于水中， 加热溶解， 校正p H， 分装在小试管中， 每支约分3 m L , 1 1 5 高压蒸汽灭菌 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 1 一 9 1 2 0 mi n, A 1 0 . 2 肌酸溶液 A 1 0 . 2 . 1 成分 肌酸单水化合物 蒸馏水 A 1 0 - 2 . 2 制法 将肌酸单水化合物溶于水中， 备用。 A 1 0 . 3 - - 禁酚乙醇溶液 A 1 0 . 11 成分 a 一 蔡酚 9 6 %乙醇( G B 6 7 9 ) A 1 0 . 3 . 2 制法 将Q 一 蔡酚溶于乙醇溶液中。 A 1 0 . 4 氢氧化钾溶液 A 1 0 . 4 . 1 成分 氢氧化钾( G B 2 3 0 3 ) 蒸馏水 A 1 0 . 4 . 2 制法 将氢氧化钾溶于水中。 0 . 5 g 1 0 0 M I 6g 1 0 0 mL 4 0 g 1 0 0 mL A1 1 A1 1 艘荃质反应培养垂 1 成分 胰蛋白陈 氯化钠( G B 1 2 6 6 ) D L 一 色氨酸 蒸馏水 1 0g 5g 1g 1 0 0 0 M
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