GB 2905一82 谷类、豆类作物种子粗蛋白质测定法.pdf

中华人民共和国国家标准 谷类、豆类作物种子粗蛋白质测定法 ( 半微量凯氏法) UDC 6 3 3 . 1 / . 8 : 5 4 3. 8 5. 0 6 GB 2 9 0 5一 8 2 Me t h o d f o r i n d e t e r m i n a t i o n o f c r u d e p r o t e i n c e r e a l s a n d b e a n s s e e d s ( S e m i 一mi c r o k j e l d a h l m e t h o d) 1 适用范围 本标准适用于测定谷类、豆类作物种子粗蛋白质含量。 2 仪器、设备 2 . 1 2 . 2 2 . 3 2 . 4 2 . 5 2 . 6 2 . 7 分析天平: 感量。 . 0 0 0 1 克。 实验室用粉碎机。 半微量 凯氏 蒸馏装置 ( 推荐使用龙科 半微量滴定管: 容积1 0 毫升。 硬质凯氏烧瓶:容积2 5 毫升，5 0 毫升 锥形瓶:容积1 5 0 毫升。 电炉:6 0 0 瓦。 一A型半微量蒸馏装置)。 3 试剂 3 . 1 盐酸 ( G B 6 2 2 -7 7 )或硫酸 ( G B 6 2 5 -7 7 ) 。 分析纯。0 . 0 2 N、 0 . 0 5 N标准溶液 ( 邻苯二甲 酸氢钾法标定) 3 . 2 氢氧化钠 ( G B 6 2 9 -7 7 ):工业用或化学纯。 4 0 溶液( W/ V ) 3 . 3 硼酸一 指示剂混合液。 3 . 3 . 1 硼酸 ( G B 6 2 8 -7 8 ):分析纯。2 %溶液 ( W/ V ) 3 . 3 . 2 混合指示剂: 嗅甲 酚绿 ( H G 3 -1 2 2 0 -7 9 ) 0 . 5 克，甲基红 ( H G 3 -9 5 8 -7 6 ) 0 . 1 克， 分 别溶于9 5 写乙醇中，混合后稀释至1 0 0 毫升。将混合指示剂与2 % 硼酸溶液按 1: 1 0 0 比例混合，用稀 酸或碱调 节p H 值为 4 . 5 ，使呈 灰紫色。即为 硼酸一指示剂 混合 液。 注:此溶液放置时间不宜过长，斋在一个月之内使用。 3 . 4 加速剂:五水合硫酸铜 ( G B 6 6 5 -7 8 )分析纯，1 0 克， 硫酸钾 ( HG 3 -9 2 0 -7 6 ) 分析纯， 1 0 0 克，在研钵中研磨，仔细混匀，过4 0 目筛。 3 . 5 浓硫酸 ( G B 6 2 5 -7 7 )比重1 . 8 4 ，无氮。 3 . 6 3 0 % 过氧化氢 ( H G 3 -1 0 8 2 -7 7 ):分析纯。 3 . 7 3 0 % 过氧化氢一 硫酸混合液 ( 简称混液):3 0 % 过氧化氢、硫酸、水的比例为3 ， 2 ， 1 ， 即在 1 0 0 毫升蒸馏水中 慢慢加人2 0 0 毫升浓硫酸，待冷却后，将其加人3 0 0 毫升3 0 过氧化氢，混匀。 注: 此混液可一次配制5 0 0 -1 0 0 0 毫升 贮藏于试剂瓶中备用。夏天最好放人冰箱或荫 凉处 贮藏，室温 ( 2 0 C ) 上、 下时不必冷藏，贮藏时间不超过一个月。 3 . 8 蔗糖 ( HG 3 -1 0 0 1 -7 6 ):分析纯。 国家标准总局1 9 8 2 一 ,02 一 2 1 发布 1 9 8 3一5 1 1 一0 1 实施 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 GB 2 9 0 5 -8 2 4 试样的选取和制备 4 . 1 用 一 选取有代表性的种子 ( 带壳种子 需脱壳) 挑拣干 净， 按四分法缩减取样， 取样量不得少于 2 0 克。 将种 I 放1 6 0 - - 6 5 C烘箱中于 燥8 小时以上 ，用粉碎机磨碎， 9 5 %通过4 0 目筛， 装人磨口瓶备 5 测定步骤 5 . 1 称样称取0 . 1 克试 样两份( 含氮1 一7 毫克) ，准确至。 . 0 0 0 1 克，同时测定试样的水分含 量。 5 . 2 消煮: 5 . 2 . 1 将试样置于2 5 毫升凯氏瓶中， 加人加速剂粉末。 除水稻为1 克外，其他均为2 克。然后加3 毫升浓硫酸，轻轻摇动凯氏瓶，使试样被硫酸湿润，将凯氏瓶倾斜置于电 炉上加热，开始小火，待泡 沫停止后加大火力， 保持凯氏 瓶， f ， 的液体连续沸腾， 沸酸在瓶颈中部冷凝回流。待溶液消煮到尤微小 的碳粒并呈 透明的蓝绿色时， 谷类继续消煮3 0 分钟，豆类继续消煮6 0 分钟。 5 . 2 . 2 将试样置于 5 0 毫升凯氏瓶中，加人0 . 5 克加速剂和3 毫升混液， 在凯氏瓶上放一曲颈小漏斗 、 倾斜置于电炉七 加热， 开始小火( 用调压器将电压控制在1 7 5 伏左右) ，保持凯氏瓶中液体呈微沸状态。 5 分 钟后加大火力( 将电 压控制在2 0 0 伏左右) ， 保持凯氏 瓶中 的 液体连续沸腾。 消煮总时间， 水稻、 高粱为 3 0 分钟， 其他均为4 5 分钟。 注: 采用5 . 2 . I 或5 . 2 . 2 消煮，其准确度与精密度一致，可任取一种。 5 . 3 蒸馏、 消煮液稍冷后加少量蒸馏水， 轻振摇匀。移人半微量蒸馏装置的反应室中，用适量蒸馏 水冲洗凯氏 瓶4 一5 次。蒸馏时将冷凝管末端插到盛有1 0 毫升硼酸一 指示剂混合液的锥形瓶 、 ，向反 应室中加人4 0 氢氧化钠溶液1 5 毫升* *，然后通蒸气蒸馏，当 馏出液体积约达5 0 毫升时，降下 锥形 瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1 一2 分 钟，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶 1 ， 。 5 . 4 滴定谷类以。 . 0 2 N,豆类以0 . 0 5 N盐酸或硫酸标准溶液滴定至锥形瓶内的溶液由蓝绿色变 成灰紫色为终点。 5 . 5 空白 用0 . 1 克蔗糖代替样品作空白测定。消耗酸标准溶液的体积不得超过0 . 3 毫升。 s 测定结果的计算 6 。 1 计算公式 粗蛋白质，% ( 干基) ( w , 一v , )x Nx0 . 0 1 4 0 x Kx1 0 0 W x ( 1 0 0 一X) x 1 0 0 式中:v 2 -滴定试样时消耗酸标准溶液的体积 ( 毫升); 巧 -滴定空白时消耗酸标准溶液的体积 ( 毫升); N 酸标准溶液的当量浓度，Ns K氮换算成粗蛋白质的系数， W试样重量 ( 克) ， X-试样水分含量; 0 . 0 1 4 00 . 0 1 4 0 每毫克当 量氮的克 数。 : 一: 平行测定的结果用算术平均值表示，保留 小数后二位。 测定两类作物种子 粗蛋白 质的平行测定结果为1 5 %以下时， 其相对 相差不得大于3 %t 1 5 % - 3 0 % 时为2 %;3 0 %以上时为1 %o 6 . 4 结果报告中必须注明氮换算成粗蛋白质的系数。换算系数见下表。 应加热有硫酸部位的瓶底.不使瓶壁的温度过高，以免按盐受热分解造成氮的损失。 采用消煮条件5 . 2 . 2 时加1 0 毫升即可。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 GB 2 9 0 5 - 8 2 不同作物种 t 含氮量换算成粗蛋白质之系数 币 P了换算系数K 麦类、U类 水稻 高粱 人皿 其他吞类 5 . 7 0 5 . 9 5 5 . 8 3 6 . 2 5 6. 2 5 1 7 9 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 GB 2 9 0 5 - 8 2 附录A 参考资料 ( 参考件) A . 1 化学L生物，Vo l 4，No t , 1 9 6 6 年。 A. 2 J . o f A OA C, Vo l 5 9 , No 6 ， 1 9 7 6 年。 A. 3 I n t e r n a t i o n a l A s s o c i t i o n f o r C e r e a l C h e m i s t r y ( I CC) S t a n d a r d Nr . 1 0 5 o A . 4 I n t e r n a t i o n a l St a n d a r d I SO 1 8 7 1 0 A . 5 A A C C Me t h o d 4 6 一1 0 . A. 6 F e r t i l i z e r