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文档简介

遗传学实验二,果蝇唾腺染色体的制备与观察,一、实验目的,1.练习剖取果蝇三龄幼虫唾腺的方法; 2.掌握制作果蝇唾腺染色体标本的技术; 3.观察果蝇唾腺染色体的形态特征。,二、实验原理,双翅类昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大,其中的染色体称为唾腺染色体(salivary chromosome); 这种染色体比普通染色体大得多,宽约5m,长约400m,相当于普通染色体的100-150倍,因而又称为巨大染色体; 唾腺染色体经过多次复制而并不分开,大约有1000-4000根染色体丝的拷贝,所以又称多线染色体(polytene chromosome);,唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状态体联会; 各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心(chromocenter); 唾腺染色体经染色后,出现深浅不同、密疏各别的横纹(band),其数目和位置是恒定的,代表着种的特征; 如果染色体有缺失、重复、倒位、易位等畸变,很容易在唾腺染色体上识别出来,因此唾腺染色体是研究染色体畸变的好材料。,三、实验材料,黑腹果蝇的三龄幼虫 为了得到更好的染色体标本,需要在2025和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓、肥大,爬上管壁的三龄幼虫(化蛹之前)做标本最佳。,三龄幼虫照片,四、实验仪器与试剂,. 器具: 双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。 . 试剂: 改良苯酚品红溶液、生理盐水、1N盐酸。,五、实验步骤,实验前知识准备: 果蝇三龄幼虫的唾腺位于幼虫的头部附近,可以看看显微照片中的位置,(点击图片观察放大图),实验开始,1.唾腺剖取 把载玻片置于双筒镜下。载玻片上滴加生理盐水1-2滴,取三龄幼虫放在其中,操作者两手各握一枚解剖针,左手的解剖针压住幼虫后端1/3处,固定幼虫。右手的解剖针按住幼虫头部,用力向右拉,把头部从身体拉开,唾腺随之而出,唾腺是一对透明的棒状腺体 。用针剔除脂肪组织。,图示,解离: 在载玻片上除去幼虫其它部分,用吸水纸吸去生理盐水,然后在腺体上加 1-2滴1NHCl溶液,作用5-10 min。 冲洗: 用吸水纸吸去HCl ,滴加蒸馏水于腺体上进行冲洗(两次)。 染色: 吸去蒸馏水,加1-2滴苯酚品红溶液,染色10min。 5. 压片观察:用镊子加盖玻片,压片。镜检。,六、实验结果,1.先用低倍物镜观察,找到好的染色体图像后,放到视野中心,再用高倍镜观察。,2. 黑腹果蝇染色体是2n=24=8(图一),但由于体细胞配对,又因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部,所以染色体的一端在染色中心上,看上去,各自只形成一条线状和点状染色体。只有第2和第3染色体的着丝粒在中央,它们从染色中心以V字形向外伸出(2L,2R,3L,3R),因此共有6条(图二)。,在显微镜下,短小的第4染色体有时不易观察到,所以最容易识别的是5条(图三)。,雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里,因为是异染色质,看起来染色可能深些。有经验的人可以发现雄果蝇的X染色体比雌果蝇X染色体要细些,因为雄性只有一条X染色体。,3.唾腺染色体上的横纹宽窄、深浅是一定的,但在果蝇的特定发育时期,它们会出现不连续的膨胀,这称为疏松区(puff),目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。,七、绘图,绘制你所观察到的清晰的果蝇唾腺染色体的图像。,八、实验分析与讨论,1、根据实验的观察可以确定果蝇的染色体数目吗? 2、制备果蝇唾腺染色体需注意哪几个关键步骤? 3、利用果蝇唾腺染色体可以进行哪些遗传学研究?,九、参考文献,张贵友,普通遗传学实验指导, 北京:清华大学出版社,2003 卢龙斗、常重杰,遗传学实验技术, 合肥:中国科学技术大学出版社,1996 刘祖洞、江绍慧,遗传学实验, 北京:高等教育出版社,1987,实验结束,果蝇三龄幼虫,下一张,果蝇三龄幼虫,下一张,果蝇三龄幼虫,返 回,果蝇唾腺位于头部附近,返 回,果蝇唾腺位于头部附近(放大图),返 回,1、两手各握一枚解剖针,左手解剖针压住幼虫后端1/3处,固定幼虫;右手的解剖针按住幼虫的头部用力向右拉,把头部从身体拉开,唾腺随之而出。,2、已剥离出的唾腺染 色体一对透明的棒状腺

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