免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用.ppt

免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用,免疫组织（或细胞）化学技术是免疫学与组织化学两种技术的结合，它的基本原理是应用抗原与抗体的特异性结合，再用显色剂显色达到标记细胞的某种抗原物质的定性与定位检测技术，是一种方法简单，且有效的肿瘤标记技术。 当前在免疫组化技术围绕着提高敏感性与特异性不断改进和发展，但它仍有其局限性应用于蛋白水平，敏感性与特异性不足，故应与其他组织化学、电镜及分子生物学技术相结合。,一、免疫组化在诊断中的应用原则 1防止假阳性与假阴性，防止操作中的污染，规范操作，设阳性与阴性对照。 2选用2种以上同类抗体：目前肿瘤均为相关抗原，特异性不足，多种同类抗体可提高阳性率。 3正确评价免疫组化的结果：其结果受抗体、特异性与质量、操作、标本固定等多种因素影响。,4合理的选择抗体：既要符合设计的要求，价廉物美，分1、2、3线抗体。 5待检标本抗原保存要好：要求快速、新鲜、充份的固定，合适固定剂，福尔马林液固定标本要修复抗原。,二、免疫组化在肿瘤诊断中的应用 （一）上皮性肿瘤标记 1角蛋白（Keratin）：一种中间丝蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermal keratin，EK）鳞状上皮或高分化鳞癌标记；（2）细胞角蛋白（cytokeratin，CK）低分子角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌标记。一般用广谱型角蛋白抗体为好，常用。,2上皮膜抗原（Epithelial membrane antigen，EMA）：这亦是常用的上皮细胞标记抗体，细胞膜阳性，用Zankers、Bouin或B5固定液中固定为好。其在低分化和未分化上皮中表达好，但亦可在间变性大细胞淋巴瘤、恶性横纹肌样瘤中表达。 3桥粒蛋白（Desmoplakin）：主要标记上皮桥粒，Desmo仅表达于复层上皮。,4癌胚抗原（Carcinoembrgonic antigen，CEA）：是从结肠癌中分离而得一种球蛋白，定位于细胞膜上，对肠、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌标记阳性，但个别非上皮肿瘤也可阳性。 5甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）：由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，细胞浆和膜上表达，它对肝细胞癌、卵黄囊癌的特异性标记。睾丸,（二）间叶源性肿瘤免疫组化标记 间叶组织包括纤维结缔组织、脂肪、肌肉、血管、骨、软骨及外周神经等，间叶组织肿瘤往往由多向分化的原始间叶细胞产生，存在共性，标记抗体特异性不足，有交叉反应。 1波纹蛋白（Vimentin，Vim）：是一种细胞中间丝蛋白抗体，在多数软组织肿瘤均可表达，但纤维细胞较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应。常用作间叶源与上皮源肿瘤的第一线鉴别抗体,2结蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、横纹肌均可阳性。 3肌动蛋白（Actin）：平滑肌、血管内皮、肌上皮细胞标记，HHF35特异。 4肌球蛋白（Myotlobin），肌红蛋白（myosin）：对横纹肌标记较好。 5第因子，CD34：对血管内皮细胞肿瘤标记较特异。,6S-100蛋白：是一种周围神经雪旺氏细胞特异标记抗体，后发现对脂细胞、朗格罕氏细胞、肌上皮细胞、黑色素细胞及其肿瘤均可阳性。 7酸性或碱性磷酸酶：对骨与软骨肿瘤标记好。,（三）双向分化肿瘤标记 即有上皮与间叶两种细胞分化的肿瘤的标记，如滑膜肉瘤、间皮肉瘤、脑膜瘤、癌肉瘤、上皮样肉瘤等，一般采用CK、EMA标记上皮，Vim等标记间叶细胞。另外有一种恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维母细胞和组织细胞混合组成的恶性肿瘤，故应用Vim和组织细胞标记来诊断。,（四）神经细胞、胶质细胞及神经内分泌肿瘤标记 1神经原特异性烯醇化酶（Neuron Specific Enolase，NSE）：神经原肿瘤标记。 2胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillaly Acidic protein，GFAP）：脑胶质细胞特异性标记抗体。CD34+F8血管,3神经内分泌肿瘤标记：包括类癌、胰岛、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞癌、原始神经外胚层瘤（PNET）等，目前应用NSE、嗜铬蛋白颗粒A（CgA）及触突素（Syn）三种抗体同时或两种一起用，因NSE不够特异。,（五）淋巴网状组织肿瘤（淋巴瘤）标记 1B细胞标记抗体：CD20（L26），Ig重链（IgG、M、A、E）、轻链（、）、CD79a。 2T细胞标记抗体：CD45RO（UCHL-1），CD3较好。CD56 3组织细胞标记抗体：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（-1 Antichymotrypsin）等。,4霍奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma，HL）R-S细胞（Reed-Sternberg cell）标记抗体：CD15、CD30 5白细胞共同抗原（leucocyte common Antigen，LCA）：它对淋巴网状细胞均为膜阳性，作第一线抗体为好。 注：（1）国际上将百余种标记抗体统称为CD（Cluster Designation）系列。 （2）淋巴细胞标记与R-S细胞多数为膜阳性，而Ig与组织细胞标记为胞浆阳性。,（六）肿瘤细胞增殖活性与细胞凋亡标记抗体 瘤细胞增殖指数反应细胞增殖活性，是瘤细胞新生（恶性）状况的客观指标，与凋亡指数呈反比关系。常用抗体有： 1增殖细胞核抗原（proliferative neuclear Antigen，PCNA），核阳性。 2Ki-67，Brdu抗体：原要求新鲜组织，新近有Ki-67石蜡切片标记抗体问世。,3细胞凋亡（Apoptosis）标记抗体：开始发现细胞凋亡发生于正常细胞受基因调控性自然性死亡。后发现肿瘤细胞亦可发生，而且某些药物放、化疗亦可诱发细胞凋亡，故成了研究肿瘤发生、发展、治疗的热点。其标记抗体有： （1）凋亡抑制基因蛋白抗体：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。 （2）促凋亡基因蛋白抗体：Fas/FasL系统，wt