(论文)HPLC法测定愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量

HPLC法测定愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷的含量卞俊，陈海飞，宣伟东（解放军第411医院南京军区药学专科中心，上海，200434）摘要 目的：采用高效液相法测定愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷的含量。方法：色谱柱Kromasil ODS-1 C18柱（4.6mm250mm，5m），流动相：乙腈-水（30：70），检测波长：210nm，流速：1 mlmin-1。结果：川续断皂苷的线性范围是0.4g3.28g（r=0.9994，n=7），回收率103.4%，RSD=1.76%。结论：该方法简便快捷，结果准确可靠，可作为愈骨疗伤胶囊的质量控制手段。关键词 愈骨疗伤胶囊；HPLC；川续断皂苷Determination of Asperosaponin in Yugu Liaoshang capsule by HPLCBIAN Jun， CHEN Hai-fei， XUAN Wei-dong ( .411 hospital of PLA， Shanghai 200434， China)ABSTRACT: OBJECTIVE To determine Asperosaponin in Yugu Liaoshang capsule by HPLC. METHODS The chromatography procedure was carried out using Kromasil ODS-1 C18 (4.6 mm250mm, 5 m) as an analytic column and a mixture of 30 volume of Acetonitrile,70 volume of water as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mlmin-1.The detection wave length was set at 210 nm. RESULTS Asperosaponin line range was between 0.4 g and 3.28 g (r=0.9994, n=7).The average recovery rate and RSD value of Asperosaponin ware 103.4% and 1.76%. CONSLUSION The method is simple, accurate, and reliable, it and can be used for the quality assess of Yugu Liaoshang Capsule.KEY WORDS :Yugu Liaoshang Capsule； Asperosaponin ；HPLC愈骨疗伤胶囊是依据解放军411医院传统验方，经现代提取技术、制备工艺加工制成的非标制剂，由川续断、骨碎补、自然铜、地必虫等11味中药组成。临床治疗骨折取得良好效果。该制剂以川续断科川续断属植物川续断（Dipsacus asper Wall ）川续断的根为君药，具有补肝肾、强筋、续折伤、止崩漏等功效1。川续断化学成分比较复杂，其中含有多种皂苷，其中川续断皂苷是其主要成分2。本研究采用HPLC法检测愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷的含量，经实验证明，该方法简便快速、专属性强。1 仪器与试药仪器日本岛津SPD-10A高效液相色谱仪，SK2200H型超声波清洗仪器（上海科导超声仪器有限公司），AB104-N型电子分析天平（梅特勒-扎利多上海仪器有限公司），川续断皂苷对照品（中国药品生物制品检定所，约20 mg，批号111685-200401），乙腈为色谱纯（上海凌峰化学试剂有限公司）；水为蒸馏水；其它试剂为分析纯，愈骨疗伤胶囊（四一一医院制剂室，批号20070804）。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil ODS-1 C18柱（4.6 mm250 mm， 5m）；流动相：乙腈-水（30：70）；检测波长：210 nm，流速：1 mlmin-1。；柱温：室温；近样量：20 l。2.2 对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液制备精密称取川续断皂苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1 ml含川续断皂苷对照品1 mg的溶液，即得对照品溶液；精密称取胶囊内容物0.03 g，加入甲醇15 ml后称其质量，超声30 min，放冷并补其失重，0.45 m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；取处方比例及工艺制备缺川续断的阴性样品，同供试品溶液制备的方法制得阴性对照溶液。在该色谱条件下，阴性对照应无干扰。色谱图见图1。2.3 线性关系考察取对照品溶液用甲醇稀释为0.164、0.109、0.082、0.0547、0.041、0.0273、0.0205mg/ml进样，每次进样20l。按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为Y轴，浓度为X轴进行线性回归得到回归方程：y=867560x（r=0.9994，n=7）。以上结果表明在0.4g3.28g范围内，川续断皂苷显良好线性关系。2.4 精密度考察取对照品溶液用甲醇稀释成高（0.082 mg/ml）、中（0.041mg/ml）、低（0.0205mg/ml）3种浓度的溶液，每个浓度重复进样6次，每次进样20l，按图1专属性实验图谱 A-阴性对照；B-愈骨疗伤胶囊；C-川续断皂苷对照品Fig.1 HPLC of specific testA-blank sample; B-sample; C-refercence 上述色谱条件测定峰面积。低、中、高浓度峰面积RSD分别为1.88%，1.66%和1.36%。2.5 重现性考察精密称取愈骨疗伤胶囊五份，照供试品制备方法平行处理，按上述色谱条件测定峰面积。其RSD为1.37%。2.6 加样回收率取已知含量的愈骨疗伤胶囊9份，分别精密加入1ml浓度为0.164g/ml的川续断皂苷对照品，按供试品溶液制备处理，测定，计算加样回收率，平均回收率为103.4%，RSD=1.76%。说明回收率达到良好效果。2.7 稳定性考察取愈骨疗伤胶囊1份，按供试品溶液制备方法制备，在0、2、4、6、8、10时进样，每次进样20l，得RSD=0.7%。说明在10h内川续断皂苷稳定性良好。2.8 样品含量测定精密称取3个批次的愈骨疗伤胶囊内容物，按照供试品的处理方法平行处理，上清液过滤待进样，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量。3个批次的愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷的含量分别为1.52%，1.64%，1.68%。3 讨论实验过程中，在190nm-400nm波长范围内进行紫外扫描发现，川续断皂苷在210nm处有最大吸收峰，故选用210nm作为检测波长。供试品溶液选择多种方法进行制备，包括正丁醇萃取、加水超声、加乙腈超声、加热回流等方法，发现正丁醇萃取的方法重现性较差，而水和乙腈作为溶剂时则含量测定偏低。甲醇超声的制备方法不仅有较好的重现性，而且方法简单、快速，因此选择该法作为供试品的制备方法。实验结果表明，HPLC法对愈骨疗伤胶囊内容物中川续断皂苷进行定量分析，具有较好的准确度和灵敏度，实验的重复性高。本方法可用于愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷的定性及定量研究，为愈骨疗伤胶囊的质量控制建立了分析方法。REFERENCES1 Ch. P(2005) Vol （中国药典2005年版.一部）S. Beijing: Chemical Industry Press，2005: 2312 Zhang Y W，XUE Z. The chemical components resesrch of Dipsacus asper WallJ .Acta Pharm sin(药学学报) ，1991，26（9）：676-681HPLC法测定愈骨疗伤胶囊中川续断皂苷的含量卞俊，陈海飞，宣伟东（解放军第411医院南京军区药学专科中心，上海，200434）摘要 愈骨疗伤胶囊以川续断为君药，具有补肝肾、强筋、续折伤、止崩漏等功效。本研究采用HPLC法测定川续断的主要成分川续断皂苷的含量，对愈骨疗伤胶囊的质量进行有效的控制。供试品溶液选择多种方法进行制备，包括正丁醇萃取、加水超声、加乙腈超声、加热回流等方法，其中甲醇超声的制备方法不仅有较好的重现性，而且方法简单、快速，因此选择该法作为供试品的制备方法。检测的条件为色谱柱：Kromasil ODS-1 C1