(论文)HPLC在万寿菊活性组分皂化分离过程控制中的应用

HPLC在万寿菊活性组分皂化分离过程控制中的应用李宁 张雪霞 李晓露 张丽 林旸 (国家微生物药物工程研究中心,华北制药集团新药研究开发有限责任公司,石家庄,050015)摘要: 目的 建立高效液相色谱法对万寿菊活性组分含量的检测方法。 方法 采用Hypersil C8色谱柱(150mm4. 6mm,10m)，流动相为甲醇-1乙酸水，流速:1.0mLmin-1。结果 在一个色谱过程中同时测定万寿菊中多种活性组分。结论 本法筒便、准确、专属性强，为工艺控制和质量控制提供有效的分析方法。 关键词: 叶黄素；万寿菊； 含量测定；高效液相色谱法中图分类号: R284.1 文献标识码: A Determination of components from Lutein ester by HPLCLi Ning, Zhang Xue-xia, Li Xiao-lu Zhang Li, Lin Yang (National Microbial Medicine Engineering & Research Center; New Drug Research & Development Company of NCPC; Shijiazhuang 050015)Abstract： Objective To optimize a HPLC method to quantify active components in Tagetes erecta L. Methods A chromatographic condition was as follows: Hypersil C8 Column (150mm4.6mm,10m)，1 acetic acid with methanol as a mobile phase, flow rate at 1.0 mLmin-1. Results Many components in Tagetes erecta L. were simultaneously quantified in one course of chromatography. Conclusion This simple, accurate and specific procedure is applied to the quality control in preparation of active components from Tagetes erecta L. Key words： lutein; Tagetes erecta L.; content determination; HPLC万寿菊系菊科类1年生草本植物，其花瓣中富含天然叶黄素和玉米黄素。叶黄素和玉米黄素对人视觉有保护所用，此外它还具有预防白内障、预防和改善老年性视黄斑变性1、预防动脉硬化2、增强免疫力3等功效，特别是预防癌变的发生4。万寿菊中叶黄素和玉米黄素大部分以酯的形式存在，为了获得游离态叶黄素和玉米黄素，需要对其进行皂化，目前多采用薄层色谱对皂化程度进行检测，不能对皂化率进行定量分析。本实验提供了一个实用便捷的HPLC分析方法，可应用于叶黄素的研究和生产过程中，对皂化过程进行监测。1. 仪器与试剂1.1仪器：高效液相色谱仪（996检测器，美国Waters公司）；ZMD Micromass质谱仪（美国Waters公司）；。1.2试剂：万寿菊浸膏，美科尔（邯郸）生物工程有限公司；氢氧化钾，乙酸，乙醇，异丙醇为国产分析纯，甲醇为国产分析纯。2.试验方法2. 1色谱条件色谱柱：Hypersil C8 (150mm4.6mm,10m)，流动相：A：甲醇，B：1乙酸水；流速：1.0mLmin-1；检测波长：446nm；柱温：60。表1 流动相梯度设置Tab 1 Gradient of mobile phase configuration时间/min流速/mLmin-1A/%B/%01.0851551.08515151.01000201.01000251.08515301.085152皂化前样品制 取万寿菊浸膏75mg，加入100mL异丙醇，超声溶解，即为皂化前样品。3. 皂化后样品制备取万寿菊浸膏50g，加入50mL乙醇，搅拌中加入20mL40%氢氧化钾溶液，继续搅拌3h，过程温度70。待反应结束，取皂化液0.1mL,加入100mL异丙醇，超声溶解，用乙酸调节pH=8.0，即得皂化后样品。3.结果与讨论3.1 结果 上述条件下，叶黄素与叶黄素单酯、叶黄素双酯等组分在30min内洗脱完毕。如图1所示:叶黄素、玉米黄素作为同分异构体，为一混合峰，与单双酯可实现基线分离，足以满足工艺控制的需要，采用面积归一法可计算皂化率。 叶黄素、玉米黄素峰面积皂化率= 100% 所有色谱峰面积之和。 皂化前 皂化后1.叶黄素、玉米黄素混合峰图1万寿菊浸膏皂化前后HPLC图谱 图2 1#色谱峰质谱 上述峰已由HPLC-PAD和HPLC-MS（见图2）确认无误。2.讨论 本法筒便、准确、专属性强，为工艺控制和质量控制提供有效的分析方法，完全可以替代薄层色谱检测万寿菊浸膏的皂化程度。REFERENCES1 COHEN M.Age-related macular degeneration and its possible preventionJ.Med J Aust,2005,l82(6):3l0-311.2 ALVES-RODRIGUES A,THOMAS B.The role of Lutein in the prevention of atherosclerosisJ.J Am Coil Cardiol,2002,40(4):8353 CHEW BP,PARK JS.Carotenoid action on the immune response.J.J Nutr,2004，l34(1)：257-2614 VAINIO H,RAUTALAHTI M