SNT 2315-2009 进出口动物源性食品中氨基糖苷类药物残留测定方法 放射受体分析法.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口动物源性食品中氨基糖苷类药物 残留测定方法 放射受体分析法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犪 犿 犻 狀 狅 犵 犾 狔 犮 狅 狊 犻 犱 犲 狊 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犚 犪 犱 犻 狅 狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前 言 本标准的附录 为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位： 中华人民共和国河南出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 魏蔚、 杨冀州、 袁萍、 刘亚风、 郭俊峰、 祝伟霞。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 犛 犖犜 进出口动物源性食品中氨基糖苷类药物 残留测定方法 放射受体分析法 范围 本标准规定了动物源性食品中链霉素、 双氢链霉素、 庆大霉素、 新霉素、 卡那霉素、 安普霉素、 巴龙霉 素等氨基糖苷类药物残留测定的制样和放射免疫受体分析法。 本标准适用于猪肉、 牛肉、 鸡肉、 鱼肉中链霉素、 双氢链霉素、 庆大霉素、 新霉素、 卡那霉素、 安普霉 素、 巴龙霉素等氨基糖苷类药物残留测定的放射受体筛选分析法。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有 的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 分析实验室用水规格和实验方法 试样制备与保存 从混合原始样品中取出部分代表性样品， 剔除脂肪组织后将可食部分取有代表性样品约 ， 用 组织绞碎机绞碎混匀， 均分成两份， 分别装入洁净容器中， 密封， 并标明标记， 于 以下冷冻保存。 制样过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 方法提要 检测的基础是竞争性受体免疫反应。样品中的氨基糖苷类药物残留经提取、 稀释后与 标记的 氨基糖苷类药物相互竞争结合位点， 样品中的氨基糖苷类药物含量越高， 竞争结合的位点越多， 标 记的氨基糖苷类结合的位点则越少。用液体闪烁计数仪测定 衰变发出的粒子放射性计数 （ ， 即每分钟脉冲数） 值， 该值与样品中氨基糖苷类残留量成反比。 试剂和材料 除非另有说明， 所用试剂均为分析纯， 水为 规定的一级水。 组织中庆大霉素 新霉素族测试试剂盒 ） ） 组织中庆大霉素 新霉素族、 链霉素族测试试剂盒与 分析仪是由 公司提供的产品。给出 这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果， 则可使 用这些等效产品。 每批新试剂盒使用前须进行性能监测， 参见附录 。试剂盒主要由以下部分构成： ） 萃取缓冲液： 加入 水溶解瓶中物质， 此溶液可在保存个月； 犛 犖犜 ） 多抗生素标准品： 加入 水溶解， 庆大霉素浓度为 ， 此溶液可在 保存 ； 或将该溶液保存于 以下， 使用时将其解冻， 解冻后的溶液在保 存 ； ） 庆大霉素 新霉素族受体药片： 白色药片， 以下保存， 应在包装盒所标明的有效期内； ） 庆大霉素 新霉素族氘标记药片： 黄色药片， 以下保存， 应在包装盒所标明的有效期内。 组织中链霉素族测试试剂盒 ） 每批新试剂盒使用前须进行性能监测， 参见附录 。试剂盒主要由以下部分构成： ） 阴性对照浓缩干粉： 加入 水溶解， 此溶液可在保存 ； 或将溶液保存于 以下， 使用时将其解冻， 解冻后的溶液在保存 ； ） 多抗生素标准品： 加入 水溶解， 临用前配制， 链霉素浓度 ， 溶液的保存 方法同 中） ； ） 萃取缓冲液： 加入 水溶解， 在可贮存个月； ） 缓冲液： 加入 水溶解， 在可贮存个月； ） 链霉素族受体药片： 白色药片， 以下保存， 应在包装盒所标明的有效期内； ） 链霉素氘标记物药片： 绿色药片， 以下保存， 应在包装盒所标明的有效期内。 氢氧化钠。 盐酸。 氢氧化钠溶液： 称取氢氧化钠（ ） ， 溶于 水。 盐酸： 量取 盐酸（ ） ， 缓慢地加入 水中， 混匀后用水定容 至 。 闪烁液： ?闪烁液或相当者。 仪器和设备 分析仪）。 ） 组织中庆大霉素新霉素族、 链霉素族测试试剂盒与 分析仪是由 公司提供的产品。给出 这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果， 则可使 用这些等效产品。 分析天平： 感量 。 计： 测量精度 。 恒温加热器： ， 。 高速组织捣碎分散匀质器。 离心机。 涡旋混匀器。 药片压杆。 具塞硅硼酸盐玻璃试管： 。 检测步骤 庆大霉素 新霉素族残留测定（ 用于庆大霉素、 新霉素、 卡那霉素、 安普霉素、 巴龙霉素的测定） 阴性和阳性对照液的配制 阴性对照液的配制： 取 萃取缓冲液加入 水稀释， 混匀后取出 作为 阴性对照液， 使用前配制。 犛 犖犜 阳性对照液的配制： 取 多抗生素标准溶液加至 萃取缓冲液中， 混匀 后取出 ， 用 水稀释， 取出 作为阳性对照液， 使用前配制。 提取 称取 样品于 具塞离心管中， 加入 萃取缓冲液， 均质 ， 涡旋混匀 ， 于 恒温加热器中温育 ， 取出后放置冰水浴中冷却 ， 于 离心 ， 转移 全部上清液于另一 离心管中， 用 氢氧化钠溶液（ ） 或 盐酸溶液（ ） 调 节 值 ， 此样液待测定。 检测步骤 用药片压杆的平端， 将白色受体试剂药片压入 离心管中， 加入 水， 涡旋混匀 。 向离心管中加入 样品提取液（ ） ， 压入黄色庆大霉素氘标记物药片， 涡旋混匀 ， 温育 。 温育后取出于 离心 ， 立即倾去全部上清液， 将试管内的脂肪环和壁上残留 水溶液用棉签擦试干净。 加入 水， 涡旋混匀 ， 将试管中的沉淀物溶解。加入 闪烁液（ ） ， 加盖， 涡旋 混匀后放入 分析仪内， 频道计数 ， 测定 值。 链霉素族残留测定（ 用于链霉素和双氢链霉素的测定） 阴性和阳性对照液的配制 阴性对照液的配制： 取 萃取缓冲液与 阴性浓缩液混匀， 取出 作 为阴性对照液， 使用前配制。 阳性对照液的配制： 取 多抗生素标准品溶液， 加至 阴性浓缩液中， 混 匀后取出 ， 用 萃取缓冲液稀释， 取出 作为阳性对照液， 使用前配制。 提取 称取 样品于 具塞离心管中， 加入 萃取缓冲液， 均质 ， 涡旋混匀 ， 于 恒温加热器中温育 ， 取出后放置冰水浴中冷却 ， 于 离心 ， 转移全部上清液于另一 离心管中， 用 缓冲液调节 值 ， 此样液待测定。 检测步骤 用药片压杆的平端， 将白色受体试剂药片压入 离心管中， 加入 水， 涡旋混匀 。 向离心管中加入 样品提取液（ ） ， 涡旋混匀 ， 温育 。 取出后将绿色链霉素氘标记物药片压入离心管， 涡旋混匀 ， 温育 。 温育后取出于 离心 ， 立即倾去全部上清液， 将试管内的脂肪环和壁上残留 水溶液用棉签擦试干净。 加入 水， 涡旋混匀 ， 将试管中的沉淀物溶解。加入 闪烁液（ ） ， 加盖， 涡旋 混匀后放入 分析仪内， 频道计数 ， 测定 值。 结果判定 控制点的确定 庆大霉素新霉素族残留控制点的确定 称取 同类空白样品， 添加 多抗生素标准品溶液， 充分混匀， 按 和 进 行提取与测定， 测定个非重复加标样品的 计数值， 取结果平均值， 该平均值乘以系数 即为控 制点。 犛 犖犜 链霉素族残留控制点的确定 称取 同类空白样品， 添加 多抗生素标准品溶液， 充分混匀， 按 和 进 行提取与测定， 测定个非重复加标样品的 计数值， 取结果平均值， 该平均值乘以系数 即为控 制点。 结果判定 样品的 计数值大于控制点时， 则判断为阴性； 样品的 计数值小于或等于控制点时， 应重新 测定样品； 对于庆大霉素 新霉素族需重新测定阴性对照液（ ） 和阳性对照液（ ） ； 对于链 霉素族需重新测定阴性对照液（ ） 和阳性对照液（ ） ， 其 计数值应在正常范围内波动 （ 参见第 章） 。当重新测定样品的计数值大于控制点时， 判定为“ 阴性” ； 小于或等于控制点时， 则判 定为“ 初筛阳性” 。 确证试验 本标准为筛选方法， 对于阳性样品， 需用其他方法进行确证。 方法检出限 链霉素方法检出限为 ； 双氢链霉素方法检出限为 ； 庆大霉素方法检出限为 ； 新霉素方法检出限为 ； 卡那霉素方法检出限为 ； 安普霉素方法检出限为 ； 巴龙霉素方法检出限为 。 犛 犖犜 附 录 犃 （ 资料性附录） 试剂盒与仪器性能监测 犃 试剂盒性能监测 每一批新购试剂盒应首先检测阳性对照液和阴性对照液的比值， 若比值小于 ， 表明试剂有效， 可以进行检测； 若比值大于 ， 表明试剂失效。每一批号检测试剂盒需建立一个零点基准值。将次 阴性对照液测定结果取平均值， 即为零点基准值。当遇到“ 初筛阳性” 样品时， 通过测定阴性控制液和阳 性控制液 值与零点基准值比较， 可确定试剂和仪器是否工作正常， 判定原则： 阴性对照液测定结果一般在零点基准值左右波动， 幅度约 ； 阳性对照液测定结果应小于控制点。 如果以上条件不符， 应重新确定零点基准值与控制点。 犃 仪器性能监测 犃 犆 犺 犪 狉 犿 液体闪烁计数仪零点校准 取空的专用试管放入液体闪烁计数仪计数， 值需小于 ， 否则需调零。如测得的 值偏大， 可能由液体闪烁计数仪有大量静电存在所引起， 可用湿布将试管外壁湿润后放入液体闪烁计数仪进行 测定， 重复几次后可以达到正常值。 犃 犆 犺 犪 狉 犿 液体闪烁计数仪 犎 通道校准 将庆大霉素 新霉素族氘标记黄色药片、 链霉素族氘标记绿色药片加入玻璃试管， 并加入 水， 涡旋混匀使沉淀物完全破碎， 加 闪烁液到试管内涡旋混匀， 将试管放入液体闪烁计数仪内， 频道 计数， 测定 值。 通道 值应大于 ， 且 与 通道的 值比值 应小于 。 犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱 犃 狀 狀 犲 狓犃狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲 犱狅 犳 狋 犺 犲犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犎 犲 狀 犪 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犠 犲 犻犠 犲 犻，犢 犪 狀 犵犑 犻 狕 犺 狅 狌，犢 狌 犪 狀狆 犻 狀 犵，犔 犻 狌犢 犪 犳 犲 狀 犵，犌 狌 狅犑 狌 狀 犳 犲 狀 犵，犣 犺 狌 犠犲 犻 狓 犻 犪 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲 犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 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狊 犺 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犜 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狑 犺 犻 犮 犺，狋 犺 狉 狅 狌 犵 犺狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犻 狀狋 犺 犻 狊 狋 犲 狓 狋，犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狀 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉 狅 狉犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狊 狌 犫 狊 犲 狇 狌 犲 狀 狋犪 犿 犲 狀 犱 犿 犲 狀 狋 狊狋 狅，狅 狉狉 犲 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳，犪 狀 狔狅 犳 狋 犺 犲 狊 犲狆 狌 犫 犾 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狊犱 狅狀 狅 狋 犪 狆 狆 犾 狔 犎 狅 狑 犲 狏 犲 狉，狆 犪 狉 狋 犻 犲 狊 狋 狅犪 犵 狉 犲 犲 犿 犲 狀 狋 狊犫 犪 狊 犲 犱 犻 狀 狋 犺 犻 狊狀 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅 犻 狀 狏 犲 狊 狋 犻 犵 犪 狋 犲狋 犺 犲狆 狅 狊 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狅 犳犪 狆 狆 犾 狔 犻 狀 犵狋 犺 犲犿 狅 狊 狋 狉 犲 犮 犲 狀 狋犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犲 狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犻 狀 犱 犻 犮 犪 狋 犲 犱犫 犲 犾 狅 狑 犉 狅 狉狌 狀 犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狋 犺 犲犾 犪 狋 犲 狊 狋犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犺 犲狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲 犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狉 犲 犳 犲 狉 狉 犲 犱狋 狅犪 狆 狆 犾 犻 犲 狊 犌 犅犜 狑 犪 狋 犲 狉 犳 狅 狉犪 狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾 犾 犪 犫 狅 狉 犪 狋 狅 狉 狔狌 狊 犲犛 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狋 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊 犘 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狊 狋 狅 狉 犪 犵 犲狅 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲 犜 犪 犽 犲狋 犺 犲狉 犲 狆 狉 犲 狊 犲 狀 狋 犪 狋 犻 狏 犲狆 狅 狉 狋 犻 狅 狀 狊犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狑 犺 狅 犾 犲狆 狉 犻 犿 犪 狉 狔狊 犪 犿 狆 犾 犲 犃 犳 狋 犲 狉狋 狉 犻 犿犿 犲 犱犳 犪 狋狋 犻 狊 狊 狌 犲 狊， 犵 犲 犱 犻 犫 犾 犲狆 狅 狉 狋 犻 狅 狀 犻 狊犵 狉 犻 狀 犱 犲 犱犪 狀 犱犫 犾 犲 狀 犱 犲 犱犫 狔犪 狋 犻 狊 狊 狌 犲犫 犾 犲 狀 犱 犲 狉 犜 犺 犲犺 狅 犿 狅 犵 犲 狀 犻 狕 犲 犱狊 犪 犿 狆 犾 犲 犻 狊犱 犻 狏 犻 犱 犲 犱犲 狇 狌 犪 犾 犾 狔 犻 狀 狋 狅狋 狑 狅犪 狀 犱狆 狌 狋 犻 狀犪狊 狌 犻 狋 犪 犫 犾 犲犮 犾 犲 犪 狀犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀 犲 狉 犃 犳 狋 犲 狉犫 犲 犻 狀 犵狊 犲 犪 犾 犲 犱犪 狀 犱犾 犪 犫 犲 犾 犲 犱，狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲 狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋 犫 犲 犾 狅 狑 犐 狀 狋 犺 犲犮 狅 狌 狉 狊 犲狅 犳 狊 犪 犿 狆 犾 犻 狀 犵犪 狀 犱狊 犪 犿 狆 犾 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀，狆 狉 犲 犮 犪 狌 狋 犻 狅 狀 狊犿 狌 狊 狋 犫 犲 狋 犪 犽 犲 狀 狋 狅犪 狏 狅 犻 犱犮 狅 狀 狋 犪 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 狉犪 狀 狔犳 犪 犮 狋 狅 狉 狊狑 犺 犻 犮 犺犿 犪 狔犮 犪 狌 狊 犲狋 犺 犲犮 犺 犪 狀 犵 犲狅 犳 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲犮 狅 狀 狋 犲 狀 狋 犛 犖犜 犘 狉 犻 狀 犮 犻 狆 犾 犲 犚 犪 犱 犻 狅 狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉犿 犲 狋 犺 狅 犱犫 犪 狊 犲 狊狅 狀犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪狊 狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉 狊 犻 狋 犲 狋 犺 犪 狋 犫 犻 狀 犱 犳 狌 狀 犮 狋 犻 狅 狀犵 狉 狅 狌 狆狅 犳 犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狊 犐 狋犺 犪 狊犪犮 狅 狉 狉 犲 犾 犪 狋 犻 狅 狀犫 犲 狋 狑 犲 犲 狀狋 犺 犻 狊狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉狊 犻 狋 犲 狊犪 狀 犱犳 狌 狀 犮 狋 犻 狅 狀犵 狉 狅 狌 狆狅 犳犪 犿 犻 狀 狅 犵 犾 狔 犮 狅 狊 犻 犱 犲 狊犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狊 犛 狅狋 犺 犲狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 犻 狋 狔狅 犳 狋 犺 犲 狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉 犮 犪 狀 狉 犲 犪 犾 犻 狕 犲 狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犜 犺 犲犪 犿 犻 狀 狅 犵 犾 狔 犮 狅 狊 犻 犱 犲 狊犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狊狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊狑 犲 狉 犲犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犲 犱犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲，犪 狀 犱狋 犺 犲 狔狑 犲 狉 犲犱 犻 犾 狌 狋 犲 犱 犜 犺 犲 狔狑 犲 狉 犲犻 狀 犮 狅 犿 狆 犲 狋 犻 狋 犻 狅 狀狑 犻 狋 犺犪 狀犲 狓 犲 犿 狆 狋 犪 犿 狅 狌 狀 狋 狅 犳 犎 犾 犪 犫 犲 犾 犲 犱犪 犿 犻 狀 狅 犵 犾 狔 犮 狅 狊 犻 犱 犲 狊 犳 狅 狉 狋 犺 犲狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 犻 狋 狔狅 犳 狋 犺 犲 狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉 狊 犻 狋 犲 狊 犃 犳 狋 犲 狉 狉 犲 犪 犮 狋 犻 狅 狀 犻 狀 狋 犺 犲 狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲 犻 狋狑 犪 狊犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲 犱，犪 狀 犱 狋 犺 犲狌 狀 犫 犻 狀 犱犪 犿 犻 狀 狅 犵 犾 狔 犮 狅 狊 犻 犱 犲 狊犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狊狋 犺 犪 狋狑 犲 狉 犲犱 犻 狊 犮 犪 狉 犱 犲 犱 犜 犺 犲 狀 犻 狋狑 犪 狊犪 犱 犱 犲 犱狑 犻 狋 犺狋 犺 犲犛 犮 犻 狀 狋 犻 犾 犾 犪 狋 犻 狅 狀犉 犾 狌 犻 犱，犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犲犿 犻 狊 狊 犻 狅 狀狅 犳 狆 犪 狉 狋 犻 犮 犾 犲狉 犪 犱 犻 狅狋 犺 犪 狋狑 犪 狊犳 狉 狅 犿 犎 犱 犻 狊 犻 狀 狋 犲 犵 狉 犪 狋 犻 狅 狀，犪 狀 犱犮 狅 狌 狀 狋狆 犲 狉犿 犻 狀 狌 狋 犲 犜 犺 犲狏 犪 犾 狌 犲 狊狅 犳 犮 狆 犿 狑 犲 狉 犲 犻 狀 狏 犲 狉 狊 犲 狉 犪 狋 犻 狅犪 犿 犻 狀 狅 犵 犾 狔 犮 狅 狊 犻 犱 犲 狊犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狊 犻 狀狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊 犚 犲 犪 犵 犲 狀 狋犪 狀 犱犿 犪 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狊 犝 狀 犾 犲 狊 狊狅 狋 犺 犲 狉 狑 犻 狊 犲狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 犱，犪 犾 犾 狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狊狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狅 犳犪 狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾 犵 狉 犪 犱 犲；狑 犪 狋 犲 狉 犻 狊狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋犵 狉 犪 犱 犲狑 犪 狋 犲 狉 狆 狉 犲 狊 犮 狉 犻 犫 犲 犱犫 狔犌 犅犜 犜 犻 狊 狊 狌 犲犵 犲 狀 狋 犪 犿 犻 犮 犻 狀犪 狀 犱狀 犲 狅 犿 狔 犮 犻 狀 狋 狔 狆 犲狋 犲 狊 狋犽 犻 狋 ） 犐 狋犿 狌 狊 狋犫 犲狆 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犲 犱狋 犲 狊 狋 犲 犱狅 犳 犲 犪 犮 犺狋 犲 狊 狋 犽 犻 狋犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犻 狀 犵，狊 犲 犲犃 狀 狀 犲 狓犃犐 狋 犻 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犮 狅 犿 狆 狅 狊 犲 犱狅 犳 狋 犺 犲 犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狆 犪 狉 狋 狊 ） 犃 犵犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犫 狌 犳 犳 犲 狉：犚 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲 犻 狀 犿 犔狑 犪 狋 犲 狉，狊 犺 犪 犽 犲狌 狆 犜 犺 犲狉 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲 犫 狌 犳 犳 犲 狉犿 犪 狔犫 犲狊 狋 狅 狉 犲 犱犳 狅 狉 犿 狅 狀 狋 犺 狊犪 狋 ； ） 犕 犛 犝犕 狌 犾 狋 犻 犃 狀 狋 犻 犿 犻 犮 狉 狅 犫 犻 犪 犾犆 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犲犛 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱：犚 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲犻 狀 犿 犔狑 犪 狋 犲 狉 犜 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀犻 狊犲 狇 狌 犪 犾 狋 狅 犵犔犵 犲 狀 狋 犪 犿 犻 犮 犻 狀狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犜 犺 犲狉 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犿 犪 狔犫 犲 犺 犲 犾 犱犳 狅 狉 犺犪 狋 ；狅 狉 犳 狉 狅 狕 犲 狀犪 狋 犫 犲 犾 狅 狑 犇 犲 犳 狉 狅 狊 狋 狋 犺 犲 狉 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲 犱犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犲犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犻 狀 犵，犻 狋犿 犪 狔犫 犲狊 狋 狅 狉 犲 犱犳 狅 狉 犺犪 狋 ； ） 犌 犲 狀 狋 犪 犿 犻 犮 犻 狀犪 狀 犱狀 犲 狅 犿 狔 犮 犻 狀 狋 狔 狆 犲犫 犻 狀 犱 犻 狀 犵狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狋 犪 犫 犾 犲 狋：犠 犺 犻 狋 犲犮 狅 犾 狅 狌 狉，狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋犫 犲 犾 狅 狑 犪 狀 犱 狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狌 狊 犲 犱犫 犲 犳 狅 狉 犲狋 犺 犲犲 狓 狆 犻 狉 犪 狋 犻 狅 狀犱 犪 狋 犲犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狆 犪 犮 犽 犪 犵 犻 狀 犵犱 犪 狋 犲； ） 犌 犲 狀 狋 犪 犿 犻 犮 犻 狀犪 狀 犱狀 犲 狅 犿 狔 犮 犻 狀 狋 狔 狆 犲犱 犲 狌 狋 犲 狉 犪 狋 犲狋 犪 犫 犾 犲 狋：犢 犲 犾 犾 狅 狑 犮 狅 犾 狅 狌 狉，狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋犫 犲 犾 狅 狑 犪 狀 犱 狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狌 狊 犲 犱犫 犲 犳 狅 狉 犲狋 犺 犲犲 狓 狆 犻 狉 犪 狋 犻 狅 狀犱 犪 狋 犲犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狆 犪 犮 犽 犪 犵 犻 狀 犵犱 犪 狋 犲 ） 犜 犺 犻 狊 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狅 狀 犻 狊犵 犻 狏 犲 狀 犳 狅 狉 狋 犺 犲犮 狅 狀 狏 犲 狀 犻 犲 狀 犮 犲狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狌 狊 犲 狉，犫 狌 狋 狋 犺 犻 狊犱 狅 犲 狊狀 狅 狋 犻 犿 狆 狉 狅 狏 犲 狋 犺 犪 狋 狋 犺 犲狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 犻 狊犪 狆 狆 狉 狅 狏 犲 犱犐 犳狅 狋 犺 犲 狉犲 狌 狇 犪 犾 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊犺 犪 狏 犲狋 犺 犲狊 犪 犿 犲犲 犳 犳 犲 犮 狋 ， 狋 犺 犲 狔犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅狌 狊 犲 犛 犖犜 犜 犻 狊 狊 狌 犲犛 狋 狉 犲 狆 狋 狅 犿 狔 犮 犻 狀 狋 狔 狆 犲狋 犲 狊 狋犽 犻 狋 ） ） 犜 犺 犻 狊 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狅 狀 犻 狊犵 犻 狏 犲 狀 犳 狅 狉 狋 犺 犲犮 狅 狀 狏 犲 狀 犻 犲 狀 犮 犲狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狌 狊 犲 狉，犫 狌 狋 狋 犺 犻 狊犱 狅 犲 狊狀 狅 狋 犻 犿 狆 狉 狅 狏 犲 狋 犺 犪 狋 狋 犺 犲狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 犻 狊犪 狆 狆 狉 狅 狏 犲 犱犐 犳狅 狋 犺 犲 狉犲 狌 狇 犪 犾 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊犺 犪 狏 犲狋 犺 犲狊 犪 犿 犲犲 犳 犳 犲 犮 狋 ， 狋 犺 犲 狔犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅狌 狊 犲 犐 狋犿 狌 狊 狋犫 犲狆 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犪 狀 犮 犲狋 犲 狊 狋 犲 犱狅 犳犲 犪 犮 犺狋 犲 狊 狋犽 犻 狋犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犻 狀 犵，狊 犲 犲犃 狀 狀 犲 狓犃 犐 狋 犻 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犮 狅 犿 狆 狅 狊 犲 犱狅 犳 狋 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狆 犪 狉 狋 狊 ） 犜 犻 狊 狊 狌 犲狆 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犪 狀 犮 犲狀 犲 犵 犪 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犲：犚 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲犻 狀 犿 犔狑 犪 狋 犲 狉 犜 犺 犲狉 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犿 犪 狔犫 犲犺 犲 犾 犱犳 狅 狉 犺犪 狋 ；狅 狉 犳 狉 狅 狕 犲 狀犪 狋犫 犲 犾 狅 狑 犇 犲 犳 狉 狅 狊 狋 狋 犺 犲狉 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲 犱犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犲犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犻 狀 犵，犻 狋犿 犪 狔犫 犲狊 狋 狅 狉 犲 犱犳 狅 狉 犺犪 狋 ； ） 犕 犛 犝犕 狌 犾 狋 犻 犃 狀 狋 犻 犿 犻 犮 狉 狅 犫 犻 犪 犾犆 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犲犛 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱：犚 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲 犻 狀 犿 犔狑 犪 狋 犲 狉犫 犲 犳 狅 狉 犲狌 狊 犻 狀 犵 犜 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 犻 狊犲 狇 狌 犪 犾 狋 狅 犵犔狊 狋 狉 犲 狆 狋 狅 犿 狔 犮 犻 狀狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犜 犺 犲狊 狋 狅 狉 犪 犵 犲狅 犳 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犻 狊狋 犺 犲狊 犪 犿 犲犪 狊 ） ； ） 犕 犛 犝犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犫 狌 犳 犳 犲 狉：犚 犲 犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲 犻 狀 犿 犔狑 犪 狋 犲 狉 犪 狀 犱狋 犺 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犻 狊狊 狋 狅 狉 犲 犱 犳 狅 狉 狋 狑 狅犿 狅 狀 狋 犺 狊犪 狋 ； ） 犕 犅 狌 犳 犳 犲 狉：犇 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲 犻 狀 犿 犔狑 犪 狋 犲 狉 犐 狋 犻 狊犺 犲 犾 犱犳 狅 狉 狋 狑 狅犿 狅 狀 狋 犺 狊犪 狋 ； ） 犛 狋 狉 犲 狆 狋 狅 犿 狔 犮 犻 狀 狋 狔 狆 犲犫 犻 狀 犱 犻 狀 犵狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狋 犪 犫 犾 犲 狋：犠 犺 犻 狋 犲犮 狅 犾 狅 狌 狉，犻 狋 犻 狊狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋犫 犲 犾 狅 狑 犪 狀 犱狊 犺 狅 狌 犾 犱 犫 犲狌 狊 犲 犱犫 犲 犳 狅 狉 犲狋 犺 犲犲 狓 狆 犻 狉 犪 狋 犻 狅 狀犱 犪 狋 犲犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狆 犪 犮 犽 犪 犵 犻 狀 犵犱 犪 狋 犲； ） 狊 狋 狉 犲 狆 狋 狅 犿 狔 犮 犻 狀 狋 狔 狆 犲犱 犲 狌 狋 犲 狉 犪 狋 犲狋 犪 犫 犾 犲 狋：犌 狉 犲 犲 狀犮 狅 犾 狅 狌 狉，犻 狋犻 狊狊 狋 狅 狉 犲 犱犪 狋犫 犲 犾 狅 狑 犪 狀 犱狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲 狌 狊 犲 犱犫 犲 犳 狅 狉 犲狋 犺 犲犲 狓 狆 犻 狉 犪 狋 犻 狅 狀犱 犪 狋 犲犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狆 犪 犮 犽 犪 犵 犻 狀 犵犱 犪 狋 犲 犛 狅 犱 犻 狌 犿犺 狔 犱 狉 狅 狓 犻 犱 犲 犎 狔 犱 狉 狅 犮 犺 犾 狅 狉 犻 犮犪 犮 犻 犱 犿 狅 犾 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狔 犮 犻 狀，犪 狆 狉 犪 犿 狔 犮 犻 狀，犪 狀 犱狆 犪 狉 狅 犿 狅 犿 狔 犮 犻 狀） 犖 犲 犵 犪 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 犪 狀 犱狆 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀 犖 犲 犵 犪 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀：犇 犻 犾 狌 狋 犲 犿 犔犃 犵犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犫 狌 犳 犳 犲 狉狑 犻 狋 犺 犿 犔狅 犳 狑 犪 狋 犲 狉 狋 狅犿 犪 犽 犲 狋 犺 犲狀 犲 犵 犪 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊 犃 犳 犲 狋 犲 狉犿 犻 狓 犻 狀 犵，狌 狊 犲 犿 犔犪 狊狀 犲 犵 犪 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犘 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀：犇 犻 犾 狌 狋 犲 犿 犔犕 犛 犝犕 狌 犾 狋 犻 犃 狀 狋 犻 犿 犻 犮 狉 狅 犫 犻 犪 犾犆 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犲 犛 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犻 狋 犺 犿 犔狅 犳犃 犵犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犫 狌 犳 犳 犲 狉犪 狀 犱犿 犻 狓 犉 狌 狉 狋 犺 犲 狉犱 犻 犾 狌 狋 犲 犿 犔狅 犳狋 犺 犻 狊犿 犻 狓 狋 狌 狉 犲狑 犻 狋 犺 犿 犔狅 犳狑 犪 狋 犲 狉 犝 狊 犲 犿 犔犿 犻 狓 狋 狌 狉 犲犪 狊狆 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犈 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀 犠犲 犻 犵 犺 犵狅 犳 狊 犪 犿 狆 犾 犲 狋 狅犪 犿 犔犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲 狋 狌 犫 犲狑 犻 狋 犺犪犮 犪 狆 犃 犱 犱 犿 犔犃 犵犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犫 狌 犳 犳 犲 狉 狋 狅狋 犺 犲 犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲狋 狌 犫 犲 犎 狅 犿 狅 犵 犲 狀 犻 狕 犲犳 狅 狉犿 犻 狀犪 狀 犱狏 狅 狉 狋 犲 狓犳 狅 狉犿 犻 狀 犜 犺 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀犻 狊犻 狀 犮 狌 犫 犪 狋 犲 犱犻 狀 犳 狅 狉 犿 犻 狀 犃 犳 狋 犲 狉狋 犪 犽 犲 狀狌 狆，狋 犺 犲狋 狌 犫 犲犻 狊狆 狌 狋犻 狀犻 犮 犲 狑 犪 狋 犲 狉犫 犪 狋 犺犳 狅 狉 犿 犻 狀 犆 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲犳 狅 狉 犿 犻 狀犪 狋 狉犿 犻 狀，犪 狀 犱狋 犺 犲 狀狋 犺 犲狊 狌 狆 犲 狉 狋 犪 狀 狋狑 犪 狊 狋 狉 犪 狀 狊 犳 犲 狉 狉 犲 犱狋 狅犪 狀 狅 狋 犺 犲 狉 犿 犔犮 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲 狋 狌 犫 犲犪 狀 犱犪 犱 犼 狌 狊 狋 犲 犱狋 狅 狆 犎 狑 犻 狋 犺 犿 狅 犾 犔狊 狅 犱 犻 狌 犿犺 狔 犱 狉 狅 狓 犻 犱 犲（ ）狅 狉 犿 狅 犾 犔犺 狔 犱 狉 狅 犮 犺 犾 狅 狉 犻 犮犪 犮 犻 犱（ ） 犜 犺 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犻 狊 狉 犲 犪 犱 狔犳 狅 狉犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀