SNT 2475-2010 植物类病毒脱除处理规程.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 植物类病毒脱除处理规程 犚 狌 犾 犲 狊狅 犳狆 犾 犪 狀 狋 狏 犻 狉 狅 犻 犱 狊 犲 犾 犻 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 食品伙伴网 书书书 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 植物类病毒脱除处理规程 中 国 标 准 出 版 社 出 版 北京复兴门外三里河北街 号 邮政编码： 网址 电话： 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷 印数 书号： 定价 元 食品伙伴网 书书书 前 言 本标准的附录 为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位： 中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人： 李桂芬、 王仁睿、 马洁、 李明福、 张永江、 魏梅生。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 食品伙伴网 植物类病毒脱除处理规程 范围 本标准规定了植物类病毒脱除处理方法。 本标准适用于检验检疫行业、 农业、 林业对带有类病毒的植物繁殖材料的脱除处理。 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 类病毒脱除处理 狏 犻 狉 狅 犻 犱犲 犾 犻 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 通过有效的方法， 脱去植物带有的类病毒的过程。 组织培养 狆 犾 犪 狀 狋 狋 犻 狊 狊 狌 犲 犮 狌 犾 狋 狌 狉 犲 在无菌条件下， 将离体的植物器官、 组织、 细胞以及原生质体等繁殖材料， 培养在人工培养基上， 并 在人工控制的环境中生长、 分化、 增殖至再生植株的过程。 茎尖培养 狊 犺 狅 狅 狋 犪 狆 犻 犮 犲 狊 犮 狌 犾 狋 狌 狉 犲 在无菌条件下剥取植物茎尖（ 顶端分生组织带个个幼叶原基） ， 在人工控制的条件下分化再 生的方法。 低温处理 犾 狅 狑狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲 狋 犺 犲 狉 犪 狆 狔 将植物或植物组织置于低温环境下（ ） ， 黑暗或光照条件下持续处理个月以上来抑制类 病毒增殖的方法。 无类病毒苗 狏 犻 狉 狅 犻 犱 犳 狉 犲 犲 狊 犲 犲 犱 犾 犻 狀 犵 狊 经过类病毒脱除处理过程和检测结果为阴性的再生种苗。 原理 处理原则 针对检验检疫或生产中发现植物携带管制的类病毒， 一般可进行销毁处理。如因植物珍贵或应客 户需求， 需针对管制的类病毒实施脱除处理。 植物类病毒脱除处理 针对植物类病毒在植物体内分布不均匀、 低温能够抑制类病毒增殖的特性， 设计在低温条件下对植 物进行处理加上茎尖分生组织培养， 以脱去植物类病毒。 仪器和用具 仪器 超净工作台。 天平（ ） 。 犛 犖犜 食品伙伴网 w w w . b z f x w . c o m 解剖镜。 光照培养箱。 高压灭菌锅。 计或 试纸。 仪。 分子杂交箱。 电泳槽。 用具 量筒。 容量瓶。 接种针。 镊子。 类病毒检测方法 生物学检测（ 指示植物法） 。 往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 。 方法。 核酸杂交方法。 类病毒脱除处理程序 植株的低温处理 将植株放在条件下， 在光照或黑暗条件下连续处理个月以上。 材料剪取与灭菌 剪取经过低温处理的植株茎尖 ， 自来水冲洗 ， 剥去外面的叶片。将茎尖置于超 净工作台上， 无菌条件下进行消毒： 的乙醇浸泡 ， 已灭菌的蒸馏水冲洗次次； 再用 的升汞浸泡材料， 滴入滴滴吐温， 消毒时间 ， 用灭菌的蒸馏水冲洗次次， 每次 。将处理过的材料放入灭菌的培养皿中待用。 茎尖剥离与接种 将经过上一步处理过的茎尖放在解剖镜下， 用已灭菌的解剖刀逐层剥去幼叶， 直至出现顶端分生组 织， 将顶端分生组织和毗邻的个个幼叶原基切下， 直立向上接种到适宜的固体培养基上。参见附 录 。 试管苗类病毒检测 用上述类病毒的检测方法检测试管苗， 如果检测结果为阴性则初步定为脱类病毒试管苗， 进行后期 的扩繁和生根移栽， 如果检测结果为阳性则不是脱类病毒试管苗， 需要再进一步进行类病毒脱除处理。 试管苗的扩繁与生根培养 试管苗的扩繁 检测结果为阴性的试管苗可接种到扩繁培养基上进行增殖。 生根培养 试管苗长至 时转至生根培养基进行培养。 试管苗的驯化 将生长茁壮、 有片片叶的试管苗移至温室进行炼苗。 犛 犖犜 食品伙伴网 w w w . b z f x w . c o m 移栽 过渡培养 取出试管苗， 洗净根部培养基， 移入适宜的栽培基质中， 刚移栽后的试管苗要避光， 湿度： ， 温 度： 白天 ， 夜间 。避光保湿培养后在正常的光照、 温湿度条件下进 行培养。 移入土壤 过渡培养周后， 将生长茁壮的植株移入土壤。 移栽后植株的类病毒复检 移栽后的脱类病毒植株长到一定大小需要进行类病毒复检， 若复检结果与第一次结果相同， 均为阴 性， 则可认定为脱类病毒苗； 若复检结果与第一次结果不同， 为阳性， 则该再生苗不是脱类病毒苗， 需要 进一步进行类病毒脱除处理。 扩大繁殖 经过上述过程， 进行两次类病毒检测的无类病毒植株作为健康母株， 进行扩大繁殖， 完成整个类病 毒脱除处理过程。 犛 犖犜 食品伙伴网 w w w . b z f x w . c o m 书书书 犛 犖犜 附 录 犃 （ 资料性附录） 常见植物的类病毒脱除方法 表 犃 植物种类常见类病毒检测方法类病毒脱除方法 马铃薯 马铃薯纺锤块茎类病毒 （犘 狅 狋 犪 狋 狅 狊 狆 犻 狀 犱 犾 犲 狋 狌 犫 犲 狉狏 犻 狉 狅 犻 犱） 生物学检测（ 指示植物法） ； 往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 ； 方法； 核酸杂交方法 低温处理结合茎尖培养：马铃薯植 株放在 条件下， 每天给与 ， 的光照。处 理 时 间 为个 月， 剥取 茎 尖；马 铃 薯 块 茎 放 在 、 黑暗条件下， 处理时间为 个月， 剥取茎尖 菊花 菊花 矮 化 类 病 毒 （犆 犺 狉 狔 狊 犪 狀 狋 犺 犲 犿 狌 犿狊 狋 狌 狀 狋狏 犻 狉 狅 犻 犱） 菊花褪绿斑驳类病毒（犆 犺 狉 狔 狊 犪 狀 狋 犺 犲 犿 狌 犿犮 犺 犾 狅 狉 狅 狋 犻 犮犿 狅 狋 狋 犾 犲狏 犻 狉 狅 犻 犱） 生物学检测（ 指示植物法） ； 往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 ； 方法； 核酸杂交方法 低温处理结合茎尖培养： 马铃薯植株 放在 条 件 下， 每 天 给 与 ， 的光照。处 理 时 间 为 个 月， 剥取茎尖 啤酒花 啤酒花潜隐类病毒（犎 狅 狆犾 犪 狋