SNT 2464-2010 洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法 犐 犱 犲 狀 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犝 狉 狅 犮 狔 狊 狋 犻 狊 犮 犲 狆 狌 犾 犪 犲犉 狉 狅 狊 狋 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前 言 本标准的附录 和附录均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位： 中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 廖芳、 罗加凤、 郭京泽、 张裕君、 刘跃庭、 崔铁军、 王金成、 刘鹏。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法 范围 本标准规定了进出境植物检疫中洋葱条黑粉病菌（ ） 的检疫鉴定方法。 本标准适用于葱属寄主上洋葱条黑粉病菌的检疫鉴定。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有 的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 植物检疫 小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 原理 洋葱条黑粉病菌（ ） 主要为害葱属（ ） 植物， 不危害葱属以外的植 物。洋葱条黑粉病菌寄主范围、 孢子球形态特征、 寄主植物的症状（ 参见附录 ） 、 洋葱琼脂培养基上孢 子球萌发特性是鉴定该病菌的依据。 仪器和用具 多功能显微镜（ 具测微尺） 、 体视显微镜、 手持放大镜、 低速离心机、 往复式振荡器、 涡旋振荡器、 干热 灭菌器、 高压灭菌器、 普通天平（ 感量 ） 、 生物安全柜或超净台、 生物培养箱（ 具光照） 、 可调微量加 样器（ ） 、 三角瓶（ ） 、 离心管、 载玻片（ 长宽为 ， 厚 ） 、 盖玻片（ ） 、 膜或铝箔纸、 管（ ） 、 培养皿、 接种针、 三角推。 试剂和培养基 试剂 有效成分为 的次氯酸钠溶液、 吐温 （ ） 、 席尔氏浮载剂（ 见 附录 中席尔氏浮载剂配制方法） 、 封片剂、 无荧光显微镜物镜镜头油（ ） 、 琼脂粉、 灭菌水。 培养基 洋葱琼脂培养基用于病原菌培养性状的观察及病原菌的保存。 洋葱琼脂培养基的制备： 称取琼脂粉 ， 加入 水和 新鲜的健康洋葱汁液， 装入三角瓶中， 高压灭菌 ， 待冷却至 左右， 倒入培养皿， 凝固后， 用三角推蘸取悬浮液 均匀涂布在培养基表面。 实验室检验 种子的洗涤检验 样品制备及离心与定容 按 执行。 镜检 按 检查洋葱条黑粉病菌孢子球的有无及其形态大小， 经检查含有可疑孢子球的进一 步作萌发实验。 犛 犖犜 w w w . b z f x w . c o m 鳞茎与寄主残体的检验 用放大镜或肉眼仔细检查鳞茎或寄主残体表面是否存在银灰色泡状囊肿， 用针刺破银灰色泡状囊 肿， 用席尔氏浮载剂制成玻片， 在显微镜下观察孢子球的形态大小， 并将可疑孢子球进一步作萌发实验。 孢子球的萌发试验 在 离心管中加入适量次氯酸钠溶液， 挑取一定数量的孢子球放入， 密度以显微镜低倍视 野下 个 个孢子球为宜， 用涡旋振荡器混合， 消毒 后， 以 离心 ， 立即用微 量加样器吸去上清液， 加无菌水离心清洗次， 将孢子球沉淀物转至洋葱琼脂培养基上培养， 在 、 光照、 的相对湿度条件下生物培养箱中培养， 重复个培养皿。 鉴定特征 鳞茎与寄主残体的症状 种子发芽后周内， 病菌从子叶基部等处侵入， 病苗叶色微黄， 局部膨肿扭曲， 银灰色纵向排列的不 透明的泡状瘤肿出现在子叶和叶片上， 随后破裂露出黑褐色的孢子团， 成株期的叶、 叶鞘和鳞片出现银 灰色瘤肿条斑， 病部充满黑粉， 重病株矮化或死亡。 孢子球形态特征 洋葱条黑粉病菌的孢子球由许多细胞组成， 孢子球直径 ， 多为个孢子球聚在一起。 孢子球中央有暗色， 大小在 的冬孢子常为个， 甚少个， 成熟孢子球的冬孢子外形为 不规则的多面体， 壁褐色， 厚约， 外面紧密包围着无色至淡黄色、 透明的不孕孢， 不孕孢没有原生 质， 胞壁相对较薄， 个 个不孕孢甚至 个， ， 外形和大小一致（ 参见附录） 。 孢子球萌发特性 孢子球在洋葱琼脂培养基上培养后进行观察， 冬孢子伸出条甚少条短而半圆形、 无色的先 菌丝， 先菌丝长至 停止生长， 萌发过程中不产生担孢子和菌丝连接， 但先菌丝能产生分 支， 分支菌丝再形成分隔的菌丝， 分支菌丝长至 左右停止生长， 这种分支菌丝能够断裂， 再形成 新的菌丝体， 菌丝上直接形成孢子球， 将萌发后的菌丝转接到琼脂斜面上保存。 结果判定 如果鳞茎及寄主残体上具有 的特征， 且孢子球特征及其萌发特性与 、 相符， 判定为洋葱 条黑粉病菌。 实验结果和样品保存 经鉴定为洋葱条黑粉病菌的样品置低温干燥处妥善保存个月， 以备接受复核、 重复鉴定。保存期 满后， 需经灭菌处理。 犛 犖犜 w w w . b z f x w . c o m 附 录 犃 （ 资料性附录） 洋葱条黑粉病菌的背景资料 犃 分类地位 英文名： 中文名： 洋葱条黑粉病菌 学名： 洋葱条黑粉病菌（ ） 属真菌界（ ） ， 担子菌门（ ） ， 黑粉菌纲 （ ） ， 黑粉菌目（ ） ， 条黑粉菌属（ ） 。 犃 分布 非洲： 埃及、 加蓬、 摩洛哥。 亚洲： 印度、 伊朗、 伊拉克、 日本、 韩国、 尼泊尔、 菲律宾、 泰国、 中国。 大洋洲及太平洋岛屿： 澳大利亚、 新西兰。 欧洲： 奥地利、 比利时、 北爱尔兰自治区、 保加利亚、 捷克、 斯洛伐克、 丹麦、 芬兰、 法国、 德国、 希腊、 意 大利、 马耳他、 荷兰、 挪威、 波兰、 罗马尼亚、 瑞典、 瑞士、 前苏联、 前南斯拉夫、 塞浦路斯、 匈牙 利。 北美洲： 加拿大、 墨西哥、 美国。 中美洲及西印度群岛： 古巴、 波多黎各、 圣卢西亚。 南美洲： 智利、 秘鲁。 犃 寄主 洋葱 、 韭葱 、 大蒜 、 鸦葱 、 、大葱 、 长喙葱 、 韭菜 等葱属植物。 犃 危害及症状 洋葱条黑粉病菌是洋葱的一种毁灭性病害， 造成的损失达 。种子发芽后周内， 病菌 从子叶基部等处侵入， 病苗叶色微黄， 局部膨肿扭曲， 成株期的叶、 叶鞘和鳞片受到感染时出现银灰色条 斑， 病部充满黑粉， 重病株矮化或死亡。 犃 传播方式 洋葱条黑粉病菌是一种土传病害， 病菌的孢子球对干燥和寒冷的抵抗力较强， 在干燥土壤中最长可 存活 年， 是初次侵染源。土壤是一种主要的传播方式， 也可以通过器具、 风或者水流进行传播， 另外 带病的寄主组织和无性繁殖体也是传播此病的主要途径， 种子一般不带病， 但如混有病组织的碎片或病 土