SNT 2497.21-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 琼脂糖凝胶电泳试验 犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊 犘 犪 狉 狋 ：犃 犵 犪 狉 狅 狊 犲犵 犲 犾 犲 犾 犲 犮 狋 狉 狅 狆 犺 狅 狉 犲 狊 犻 狊 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前 言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分： 第部分： 体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（ ） 试验； 第部分： 空斑形成细胞（ ） 试验； 第部分： 大型溞繁殖试验； 第部分： 酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第部分： 睾丸细胞 试验； 第部分： 哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第部分： 小鼠耳肿胀试验； 第部分： 腘窝淋巴结试验； 第部分： 血清溶血素测定试验； 第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验； 第 部分： 种系突变试验； 第 部分： 单细胞凝胶电泳分析试验； 第 部分： 荧光原位杂交试验； 第 部分： 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第 部分： 实验； 第 部分： 实验； 第 部分： 哺乳动物行为毒理学试验； 第 部分： 加合物的检测方法； 第 部分： 实验； 第 部分： 法测定蛋白质含量； 第 部分： 琼脂糖凝胶电泳试验； 第 部分： 的 值测定方法； 第 部分： 细胞器的分离实验方法； 第 部分： 细胞免疫功能体外检测方法； 第 部分： 体液免疫功能试验； 第 部分： 巨噬细胞功能试验； 第 部分： 流式细胞术检测凋亡； 第 部分： 穿梭质粒在突变检验中的应用； 第 部分： 生化需氧量（ ） 测定。 本部分为 系列标准的第 部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位： 中华人民共和国天津出入境检验检疫局、 中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人： 吕刚、 王利兵、 李晶、 张颖、 赵好力宝、 庞震。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 琼脂糖凝胶电泳试验 范围 的本部分规定了进出口危险化学品琼脂糖凝胶电泳的术语和定义及操作步骤。 本部分适用于进出口危险化学品琼脂糖凝胶电泳试验。 术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 琼脂糖凝胶电泳 犪 犵 犪 狉 狅 狊 犲犵 犲 犾 犲 犾 犲 犮 狋 狉 狅 狆 犺 狅 狉 犲 狊 犻 狊 一种简便高效的分离和纯化 片断的方法。由于 分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷 的磷酸根残基， 因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度下， 分子的迁移速度取决于分子筛 效应。具有不同的相对分子质量的 泳动速度不一样， 因而可依据 分子的大小来使其分离。 在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。 试剂和材料 电泳缓冲液： 可根据实验要求和实际情况根据表选择适当缓冲液。 表 常用电泳缓冲液 缓冲液贮存液（） 乙酸（ ） 碱， 冰乙酸， （ 值 ） 磷酸（ ） 碱， 磷酸， （ 值 ） 硼酸（ ） 碱， 硼酸， （ 值 ） 碱性缓冲液 ， （ 值 ） 注：碱性缓冲液应现用现配。 溴化乙锭溶液： 工作液 ， 避光保存。溴化乙锭是强烈诱变剂， 使用时必须戴手套。 电泳级琼脂糖： 根据要分离的 片段大小按照表选择配制适当浓度的琼脂糖凝胶。 表 不同含量琼脂糖的凝胶分离范围 琼脂糖含量 线状 分子的有效分离范围（ ） 加样缓冲液。 犛 犖犜 相对分子质量标准品。 仪器和设备 水平板电泳槽。 电泳仪。 微波炉。 操作步骤 凝胶的制备 称取需要量电泳级的琼脂糖于一烧瓶中， 取适量的电泳缓冲液加入烧瓶中。在微波炉中融化琼 脂糖， 旋转使之均匀混合。 待琼脂糖冷却至 ， 加入溴化乙啶， 倒入插有样孔梳的凝胶灌制平板上， 去除气泡。 待凝胶完全凝固后， 小心移去梳子， 将凝胶放入电泳槽中。 上样 在电泳槽中加入足量的电泳缓冲液， 盖住凝胶并超过胶高。 将所制备的 样本加上加样缓冲液混匀， 总量不能超过凝胶孔的容积， 用微量加样枪将样 本加入凝胶孔中， 并加入适量的 相对分子质量标志物。 电泳 连接导线， 使 在凝胶中向阳极移动， 设定电压强度， 一般是 ， 开始电泳。 当加样缓冲液中的溴酚蓝染料迁移的距离足以判断 片段的分离时， 关闭电源， 电泳结束。 观察和分析 将电泳结束的凝胶直接置于紫外灯下进行观察， 如有成像系统可进行拍照， 并根据试验目的进行初 步分析。 犛 犖犜 书书书 犜 犖犛 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 琼脂