SNT 2497.13-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第13部分：荧光原位杂交试验.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 荧光原位杂交试验 犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊 犘 犪 狉 狋 ：犉 犾 狅 狉 犲 狊 犮 犲 狀 犮 犲 犻 狀 狊 犻 狋 狌犺 狔 犫 狉 犻 犱 犻 狕 犪 狋 犻 狅 狀 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前 言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分： 第部分： 体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（ ） 试验； 第部分： 空斑形成细胞（ ） 试验； 第部分： 大型溞繁殖试验； 第部分： 酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第部分： 睾丸细胞 试验； 第部分： 哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第部分： 小鼠耳肿胀试验； 第部分： 腘窝淋巴结试验； 第部分： 血清溶血素测定试验； 第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验； 第 部分： 种系突变试验； 第 部分： 单细胞凝胶电泳分析试验； 第 部分： 荧光原位杂交试验； 第 部分： 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第 部分： 实验； 第 部分： 实验； 第 部分： 哺乳动物行为毒理学试验； 第 部分： 加合物的检测方法； 第 部分： 实验； 第 部分： 法测定蛋白质含量； 第 部分： 琼脂糖凝胶电泳试验； 第 部分： 的 值测定方法； 第 部分： 细胞器的分离实验方法； 第 部分： 细胞免疫功能体外检测方法； 第 部分： 体液免疫功能试验； 第 部分： 巨噬细胞功能试验； 第 部分： 流式细胞术检测凋亡； 第 部分： 穿梭质粒在突变检验中的应用； 第 部分： 生化需氧量（ ） 测定。 本部分为 系列标准的第 部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位： 中华人民共和国天津出入境检验检疫局、 中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人： 张园、 王利兵、 王华、 赵琢、 韩伟、 熊中强。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 荧光原位杂交试验 范围 的本部分规定了进出口危险化学品荧光原位杂交试验的主要试剂和材料、 主要仪器、 试验步骤、 试验结果和试验报告。 本部分适用于进出口危险化学品荧光原位杂交试验。 术语、 定义和缩略语 术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 核酸探针 狀 狌 犮 犾 犲 犻 犮犪 犮 犻 犱狆 狉 狅 犫 犲 能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交， 杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸链。 缩略语 下列缩略语适用于本部分。 犇 犃 犘 犐 ， 犱 犻 犪 犿 犻 犱 犻 狀 狅 狆 犺 犲 狀 狔 犾 犻 狀 犱 狅 犾 犲 ， 联脒 苯基吲哚 犘 犅 犛 磷酸盐缓冲液 犘 犐 犘 狉 狅 狆 犻 犱 犻 狌 犿犐 狅 犱 犻 狀 犲 碘化丙啶 原理 荧光原位杂交技术（ ， 简称 ） 是一种利用非放射性的荧光信 号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、 安全性， 荧光信号的直观性和原位杂交 的高准确性结合起来， 通过荧光标记的 探针与待测样本的 进行原位杂交， 在荧光显微镜下 对荧光信号进行辨别和计数， 从而对染色体或基因异常组织样本进行检测。 主要试剂和材料 除另有规定外， 所有试剂均为分析纯， 实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。 ： 在 蒸馏水中溶解 ， ， 和 ， 用 调节溶液的 值至 ， 加水定容至， 在 （ ） 高压下灭菌 ， 保存于室 温。 ： 在 水中溶解 和 柠檬酸钠， 加入数滴 溶液 调节 值至 ， 加水定容至， 分装后高压灭菌。 ， 由 溶液稀释而成。 变性液： ； 蒸馏水； 甲酰胺。每次新鲜配制。 杂交液： ， 甲酰胺（ ， 待检 ， 硫酸葡聚糖） 。 犛 犖犜 杂交后洗涤液： ， 蒸馏水 ， 甲酰胺 。每次新鲜配制。 梯度乙醇。 ： 溶液。 或 。 主要仪器 恒温箱。 荧光显微镜。 试验方法 用 犚 犖 犪 狊 犲处理标本片 将铺有染色体或细胞的玻片放入含有 的溶液中 （ ） 室温洗 次， 次 乙醇 乙醇 乙醇在 中进行脱水 次室温干燥。 变性 变性液中孵育 ， 然后立即移入预冷的 乙醇中作用 ， 再依次移入 、 和 的 预冷乙醇内， 每次 ， 室温干燥。 杂交 将玻片放在小盒（ 平皿） 内， 底层与少许水， 保持玻片有一定湿度， ， 。 探针变性： 取 生物素标记 探针（ ） 加入到 杂交液中， 混匀后放入 水浴变性 后迅速放入冰冷却后加到玻片上（ 每张玻片 ） 用盖玻片盖好， 置 ， 。 去掉盖玻片， 浸入洗涤液中， 洗 ， 然后用 洗次， 再浸入 溶液 中。 杂交信号显示 将玻片从 溶液中取出， 平放在玻片架上， 加 封闭液， 用石蜡膜盖好， 室温下作用 。 去掉石蜡膜， 加 荧光标记 （ 抗生物素蛋白） ， 。 在 溶液中洗片次， 每次 。 杂交信号放大， 在玻片上加 封闭液， 室温下作用 ， 加抗 的抗体 ， 。 用 洗次， 再次 （ 室温） 加终止液 ， 室温 加荧光标记 ， ， ， 用 洗次。 染色体显色， 在玻片上加 或 等荧光染料， 再加抗荧光淬灭剂封片液室温反应 ， 加盖玻片在荧光显微镜下观察。 试验结果 可采取镜下计数细胞、 照相的方法， 或可采用专业荧光原位杂交分析系统进行结果分析。 犛 犖犜 书书书 犜 犖犛 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 进出口危险