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书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 ? ? ? ? ? ? ? ? 鱼淋巴囊肿病检疫技术规范 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?发布 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前?言 ?本标准按照 ? ? ? ? ? ?给出的规则起草? 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口? 本标准起草单位? 中华人民共和国广东出入境检验检疫局? 本标准主要起草人? 邱杨? 刘建丽? 赵丽? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 鱼淋巴囊肿病检疫技术规范 ?范围 本标准规定了在临床症状的基础上? 用显微镜检测鱼淋巴囊肿病的方法? 本标准适用于鱼淋巴囊肿病的检疫? ?规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的?凡是注日期的引用文件? 仅注日期的版本适用于本文 件?凡是不注日期的引用文件? 其最新版本? 包括所有的修改单? 适用于本文件? ? ? ? ? ?分析实验室用水规格和试验方法 ?缩略语 下列缩略语适用于本文件? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 淋巴囊肿病毒 ?试剂和材料 ? ?水? 符合 ? ? ? ? ? ?中一级水的规格? ? ? ? ? ? ? ? ? ?氏固定液? 见附录 ? ? ? ? ?苏木精染色剂? ? ?伊红染色剂? ?器材和设备 ? ?切片机? ? ?显微镜? ?鱼淋巴囊肿病临床诊断和显微镜检查 ? ?临床症状 鱼淋巴囊肿病是一种鱼的体表病? 参见附录? ? 病鱼体表皮肤? 鳍? 鳃和口部出现多个大小不等的 囊肿? 参见图? ? ? 以背鳍? 腹鳍基部最为严重? 似珍珠样? 单在或成群?病变部位呈灰白色或灰黄色? 有时带有出血而呈淡红色? 并常融合而成桑葚样?囊肿的质地柔软? 肉眼可见囊肿内有许多的小颗粒? 体表? 鳃? 颌部及肛门等多处有出血点? 剖检有时可见在鳃丝? 咽部有肿胀物? 有的肝脏切口边缘外翻? 提 示肝肿大? ? ?显微镜检查 取体表囊肿组织? 用 ? ? ? ? ? ? ? ?氏固定液进行固定?固定好的组织块用水充分洗涤? 按下列程序处 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 理制作组织切片? 依次浸入如下试剂? ? ?乙醇? ? ? ? ?乙醇? ? ? ? ?乙醇? ? ? ? 无水乙醇 ? ? ? ? 无水乙醇? ? ? ? ? 二甲苯? 无水乙醇? 体积比 ? ? ? ? ? ? 二甲苯? ? ? ? ? 二甲苯 ? ? ? ? 二甲苯?石蜡? 体积比? ? ? ? ? 石蜡? ? ? ? 石蜡? ? ? ? 根据组织块大小和种类? 各步时间作适当调整? ?石蜡包埋后? 进行切片?切片厚度不超过? 经苏木精 ? 伊红染色? 见附录 ? ? 后? 进行光学显微镜观察?发现原先肉眼可见囊肿内的许多小颗 粒镜下为巨大细胞? 参见图? ? ? 直径可达? ? ? ? ? 体积是正常细胞的数万倍? 有很厚的细胞 膜?细胞核偏离中心位置?细胞质内散布有大量大小不一的网状的包涵体?这种包涵体呈楔状? 块状? 或数个成链圈状排列? 且大多集中在细胞的边缘部分? ?鱼淋巴囊肿病综合判定 由于该病有其特异性的临床症状? 有囊肿判为可疑?然后通过组织切片观察巨大细胞来确诊?通 常不需要其他的检测手段? 很容易和其他体表疾病区别开来? 如? 痘疮病和水霉病等?患痘疮病的鱼体 表出现粘稠的石蜡状的白色增生物? 即痘疮? 痘疮里不含网状包涵体的巨大细胞?而患水霉病的鱼其体 表覆盖的丝状或絮状物? 镜检是能观察到霉菌丝? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 附?录? ? 规范性附录? 试剂配制及染色方法 ? ? ? ? ? ? ? ? ?氏固定液配制 ? ?甲醛? ? ? ? ?乙醇 ? ? ? 冰乙酸? ? ? 蒸馏水? ? ? ? ?苏木精 ? 伊红染色方法 ? ? ?配制 苏木精? 氧化汞? ? 乙醇? ? 硫酸铝钾? 或硫酸铝铵? ? ? 去离子水? ? ? 在酒精内溶解苏木精? 在水内溶解硫酸铝钾? 加热助溶?混合苏木精和硫酸铝钾溶液? 尽快煮沸? 加入氧化汞? 此时溶液变成深紫色?在自来水中迅速冷却? 滤纸过滤? 装入瓶中盖紧? 室温保存? ? ? ?染色 ? ? ? ?脱蜡? 依次浸入如下试剂? 二甲苯? ? ? 二甲苯?无水乙醇? 体积比? ? ? ? ? ? ?乙醇 ? ? ? ?乙醇? ? ? ?乙醇? ? ? ?乙醇? ? ? 蒸馏水洗? ? ? ? ? ? ?用苏木精染色? ? ? ? ? ? ? ?在稀释的氨水中分化? 直至呈蓝色? 约? ? ? ? ? ? ? ? ?用? ?伊红复染? ? ? ? ? ?脱水? 依次浸入如下试剂? ? ?乙醇? ? ? ? ?乙醇? ? ? ? ?乙醇? ? ? ? ? ?乙醇? ? ? ? ? ? ? ?透明? 依次浸入如下试剂? 二甲苯石碳酸? ? ? ? 二甲苯? ? ? 二甲苯?无水乙醇? 体 积比? ? ? ? ? ? ?中性树胶封片? 注?此法用于观察细胞在体外感染后的一般形态?显示细胞的变化? 融合细胞形成及细胞内包涵体?嗜酸性包涵 体染色呈亮红色? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 附?录? ? 资料性附录? 鱼淋巴囊肿病概述 ?鱼淋巴囊肿病是一种常见于鱼类皮肤和鳍上的良性肿瘤样病? 广泛发生于全世界的海水鱼和淡水 鱼类? 如鲱科? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 脂科? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 鲈科? ? ? ? ? ? ? ? ? 虾虎科? ? ? ? ? ? ? 等均可患病?近年来由 于高密度养殖的推广? 特别是越冬养殖时的加温和密集养殖? 往往导致疾病爆发并引起大量死亡?而在 一般情况下死亡率并不是很高? 但会因体表上布满囊肿而丧失其经济价值? 该病的病原是病毒? 即淋巴囊肿病毒? ? ? ? ? 属于虹彩病毒科? 淋巴囊肿病毒属?该病毒的衣壳 外形呈六角形? 直径约为? ? ? ? ? ? ? 核心的直径约? ? ? ? 衣壳厚度约? ? ? 外有囊膜?鱼淋 巴囊肿病毒含双链? ? 基因组全长为? ? ? ? ? ? ? 至少存在三个基因型? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?唯一种 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?包括有从日本牙鲆中分离的 ? ? ? ? ? ?等?个株? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?平 分离 株等?个株? 可以用不同引物的? ? ?把它们相互区分开? 患病鱼的体表包括鳍条和口部出现多个大小不等的囊肿? 似珍珠样? 单在或成群?病变部位呈灰白 色或灰黄色? 有时带有出血而呈淡红色? 并常融合而成桑葚样? 严重时会遍布全身?肉眼可见囊肿内有 许多的小颗粒?经接触感染或者当囊肿破溃时? 病毒逸出于水中可能引起新的感染?鳃等是病毒的主 要入口? 没有证据显示可以垂直传播? 淋巴囊肿病的监床症状和病理变化十分特殊? 不需要分离病毒和进行血清学检测? 做组织病理切片 检查即可确诊?在淋巴囊肿的切片中? 镜下清楚可见囊肿内有巨大细胞? 直径可达? ? ? ?

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