SNT 2497.17-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 哺乳动物行为毒理学试验 犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊 犘 犪 狉 狋 ：犜 犲 狊 狋 狅 犳犫 犲 犺 犪 狏 犻 狅 狉 犪 犾 狋 狅 狓 犻 犮 狅 犾 狅 犵 狔 犻 狀犿 犪 犿犿 犪 犾 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前 言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分： 第部分： 体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（ ） 试验； 第部分： 空斑形成细胞（ ） 试验； 第部分： 大型溞繁殖试验； 第部分： 酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第部分： 睾丸细胞 试验； 第部分： 哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第部分： 小鼠耳肿胀试验； 第部分： 腘窝淋巴结试验； 第部分： 血清溶血素测定试验； 第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验； 第 部分： 种系突变试验； 第 部分： 单细胞凝胶电泳分析试验； 第 部分： 荧光原位杂交试验； 第 部分： 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第 部分： 实验； 第 部分： 实验； 第 部分： 哺乳动物行为毒理学试验； 第 部分： 加合物的检测方法； 第 部分： 实验； 第 部分： 法测定蛋白质含量； 第 部分： 琼脂糖凝胶电泳试验； 第 部分： 的 值测定方法； 第 部分： 细胞器的分离实验方法； 第 部分： 细胞免疫功能体外检测方法； 第 部分： 体液免疫功能试验； 第 部分： 巨噬细胞功能试验； 第 部分： 流式细胞术检测凋亡； 第 部分： 穿梭质粒在突变检验中的应用； 第 部分： 生化需氧量（ ） 测定。 本部分为 系列标准的第 部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位： 中华人民共和国天津出入境检验检疫局、 中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人： 于艳军、 王利兵、 陈春、 赵黎华、 韩伟、 李学洋。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法 第 部分： 哺乳动物行为毒理学试验 范围 的本部分规定了进出口危险化学品的哺乳动物行为毒理学试验的术语和定义、 试验方 法、 试验结果和试验报告。 本部分适用于检测进出口危险化学品对哺乳类动物的行为毒性。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件， 其随后所有的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于本部分， 然而， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本 部分。 实验动物 配合饲料通用质量标准 实验动物 环境及设施 术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 神经毒性 狀 犲 狌 狉 狅 狋 狅 狓 犻 犮 犻 狋 狔 由于暴露于化学、 生物学或物理学因素而引起的神经系统结构或功能的有害变化。 无可见有害作用剂量 狀 狅 狅 犫 狊 犲 狉 狏 犲 犱 犪 犱 狏 犲 狉 狊 犲 犲 犳 犳 犲 犮 狋 犱 狅 狊 犲（犖 犗 犃 犈 犔） 未发现与染毒有关的有害作用的最高剂量。 主要仪器和设备 迷宫是用来测试学习和记忆功能中应用最广泛的设备， 本标准主要针对检测动物的空间记忆功能 介绍放射逼迷宫、 水迷宫和 形迷宫。 试验方法 试验动物 试验动物的品、 系 常用的啮齿类动物是大鼠。试验开始时每种性别的动物的平均体重的差别不应该超过 。 动物数量 单独试验时， 每个剂量组和对照组至少选择 只动物（ 雌、 雄各半） 。 饲养条件 试验动物在试验开始前应在笼内至少饲养， 以便使动物适应试验条件。试验动物的饲养和环境 设施应符合 和 。 受试物 受试物可以是固体、 液体、 气体或蒸气。试验前应对受试样品的化学特性、 纯度（ 含有的重要杂质） 、 犛 犖犜 溶解性、 挥发性、 稳定性等进行了解。 剂量和分组 将动物随机分配到各染毒组和对照组中。动物笼的安放应尽量减少相互影响。应将动物统一编 号。至少选用个剂量组和对照组。如果从其他毒性鉴定资料中预期剂量 不会出现毒性 效应时， 可进行限度试验。如果没有合适的参考剂量时， 可进行预测剂量范围的预试验， 以便选定染毒 的剂量。对照组动物除不作染毒处理外， 其他处理条件应与剂量组动物相同。如果染毒时使用赋形剂， 应该给对照组动物等量的赋形剂。 动物的训练 放射迷宫试验 在一个试次开始时， 将大鼠放入迷宫的中央区域， 每个臂或其中四个臂尽头的小洞放一块食物， 然 后允许大鼠探究迷宫， 知道它收集到所有的食物。经过一段时间训练， 大鼠收集食物变得很有效率， 每 个测试中很少重复进入一个臂。 在这种任务中， 大鼠必须记住已经过去的臂或未过去的臂。大鼠完成此项任务依靠参照记忆功能。 大鼠还必须依靠工作记忆功能， 即每个试次它必须跟踪记载它已经去过的地方， 避免重复进入同一个 臂。对动物记忆的考察主要集中于两个方面， 即保持记忆时间和记忆容量。当动物不犯错或极少犯错 后（ ） ， 开始染毒试验。 水迷宫 在一个大水缸下面有一个平台， 把大鼠放入水缸中， 出于本能， 大鼠会试图逃脱而不停地游动直至 找到藏在水下的平台。在被反复放进水缸几次后， 平台的位置保持不变， 大鼠很快就能定向游向平台。 大鼠经过训练后， 利用一些周围的特征建立了一个认知地图， 当被重新放进缸里时， 它能准确地定位平 台在地图中的位置。 犜形迷宫 形迷宫实验有三个木质小平台， 实验动物位于字母 纵杆底端的小平台上， 诱饵位于字母 横 杠两头的小平台上， 有一金属布把通向诱饵的路隔成两边， 其中一边被有机玻璃阻挡无法通过， 而另一 条道路则可以通过。动物经过一段时间训练后， 找到食饵的准确率在 。 形迷宫的示意 图见图。 图 犜形迷宫示意图 试验步骤 限度试验 如果一个剂量水平至少 时受试动物不出现可见的神经毒效应， 同时根据构效关系的 资料预期也不会产生毒效应时， 可以不考虑选用个剂量的完整试验。在进行经口急性试验的限度试 验中剂量水平至少应达到 。 犛 犖犜 染毒 一般采用进口染毒， 可以灌胃， 将受试物溶于水或放入胶囊中染毒； 也可以采用其他染毒途径（ 例如 经皮或吸入） ， 但需要修改试验方法。染毒途径取决于人体接触方式、 现有毒理学或毒物动力学资料。 染毒不超过 ； 水溶液可考虑用至 。 试验结果 放射迷宫 比较染毒前后动物找到食物的准确率和错误率， 可以定量评价化学物对动物空间记忆功能的损伤 效应。 水迷宫 该方法给大鼠染毒的方法有两种， 一种是在训练前， 另一种是在训练后。前者是比较染毒组和对照 组大鼠找到平台的准确率、 错误率以及找到时所花的时间； 后者是比较一组大鼠经过训练后染毒前以及 染毒后上述指标的改变。 犜形迷宫 比较动物染毒前后通过 形杆或找到食饵的准确率， 就可以判断毒物对空间记忆能力的损伤 效应。 试验结果 可利用图像采集系统和行为分析软件对动物染毒前后的行为特点进行统计分析， 在可能条件下采 用合适的普遍接受的统计学方法对结果进行分析评价。 试验报告 如有可能， 测定结果报告将包含下列实验数据项： 受试物的物理状态和测定数据； 赋形剂的选择及其理由； 试验动物的品、 系、 鼠龄、 性别和动物数； 实验条件； 观察和测试的方法； 体重体重的变化， 包括处死时的体重； 毒性反应结果， 包括毒性表现或死亡率， 按动物性别和剂量水平描述； 详细的临床观察（ 包括可逆的和不可逆的） 结果的性质， 严重程度和持续的时间（ 出现的时间及 随后的经过） ； 详述各个功能测试的结果； 活体检查的结果； 如适用的话， 述及结果的统计处理。 剂量 反应资料； 任何其他经毒效应与受试物神经毒性结论的关系； 无明显有