实验一光学显微镜技术.ppt

细胞生物学实验 2014,实验报告,六、作业,一、实验目的,二、实验原理,三、实验材料,五、实验结果及分析,四、实验步骤,实验一 光学显微镜技术,实验目的,了解普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和微分干涉显微镜的构造、工作原理和使用方法。 学习测微尺的用法并测量细胞的大小。,显微镜, 目镜测微尺(eyepieces or ocular micrometer ), 镜台测微尺（stage micrometer）, 载玻片, 盖玻片等。,实验用品,夹竹桃叶片横切片,实验材料,小肠切片,鸡红细胞,洋葱,采鸡血（阿氏液：血2：1) ( 阿氏液 红细胞保存液： 葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠 0.88g 氯化钠 0.42g 加蒸馏水至100ml，过滤分装，灭菌后在04冰箱中可保存两周。),普通光学显微镜,光镜主要由三部分组成： （1）光学放大系统：目镜与物镜 （2）照明系统 （3）机械和支架系统,调节光瞳间距，使左、右两个视场像合二为一; 调节屈光度以适应观察者的视力，调节方法随镜的不同而不同.,物镜标示,将孔径光阑缩至物镜数值孔径的60%80%或合适的范围。 注意：当物镜或标本更换时，需重新调节视场光阑和孔径光阑。,注意事项,移动显微镜，一手托镜座，一手拿镜臂! 更换物镜时，转动物镜转换盘! 使用油镜后，用镜头液清洗镜头。只有100倍物镜为油镜，在低倍镜下调焦清晰后，再转到油镜! 固定切片不要使用油镜!,暗视野显微镜,原理：利用暗视野聚光器使入射光束从聚光器斜向照明样品，使之发出反射和散射光。由样品发出的散射光和反射光形成了明亮的物体影象。背景是黑暗的。,相差显微镜,原理： 利用相差装置将透过细胞标本不同区域（密度不同）的光的光程差变成振幅差，从而使细胞内的各种结构之间呈现出清晰可见的明暗差异的显微镜。,在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：,1.环形光阑（annular diaphragm） 位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。 2.相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4。分为两种： A+相板：将直射光推迟1/4，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。 B+相板：将衍射光推迟1/4，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。,微分干涉显微镜,DIC利用的是偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器（polarizer）、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器（analyzer）。偏振器直接装在聚光系统的前面，使光线发生线性偏振。优点是能显示结构的三维立体投影影像。,四种不同显微镜显微镜所拍摄的体外培养成纤维细胞图像比较 （A）普通明视场显微镜 （B）相差显微镜 （C）微分干涉显微镜 （D）暗场显微镜,实验内容和方法,细胞形态的观察 细胞大小的测量,不同形状的动植物细胞,一、细胞观察,动物细胞的观察 植物细胞的观察,小肠切片: 细胞的形状，细胞核，核仁，细胞质 鸡血红细胞: 红细胞的特点,夹竹桃叶横切片: 表皮细胞和叶肉细胞 洋葱表皮细胞: 内表皮细胞,1、红细胞 2、中性粒细胞 3、嗜酸性粒细胞 4、嗜碱性粒细胞 5、单核细胞 6、淋巴细胞 7、异嗜性粒细胞 8、凝血细胞,Onion epidermal cells,二、细胞测量,如何使用测微尺? 如何测量细胞的大小? 如何计算细胞的大小?,如何使用测微尺?,目镜测微尺（Eyepiece micrometer） 镜台测微尺（Stage micrometer）,目镜测微尺,镜台测微尺,镜台测微尺的格数 目镜测微尺每格的微米数 = - 10 目镜测微尺的格数,如何测量细胞的大小?,测量一个洋葱表皮细胞的大小,如何计算细胞的体积?,椭球形 V=4ab2/3 圆球形 V=4/3r3 圆柱形 V=r2h * a: 长半径; b: 短半径； r: 半径; h: 高,作 业,计算不同倍数物镜下，一格目镜测微尺所代表的长度。,暗视野、相差、微分干涉显微镜与普通光学显微镜相比在结构上有何特点及用途。,绘洋葱表皮细胞的模式图，计算细胞的面积，注明物镜的倍数；说明动物细胞和植物细胞的异同点 。,镜油瓶的使用方法,(1),(2),(3),(4),(5),(6),(7),镜油瓶的使用方法,细胞生物学实验绘图方法与要求,二、用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表 示，点要圆而一致，不得涂暗影或进行其它美术加工。,一、在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、