《药物分析》第12章：维生素类药物的分析.ppt

第12章 维生素类药物的分析,维生素： 是维持人体正常代谢所必需的一类微量元素 分类： 脂溶性：维生素A、维生素D2、D3、维生素E、维生素K1； 水溶性： B族 (维生素B1、B2、B6、B12)、维生素C、叶酸、烟酸和烟酰胺,第1节 维生素A的分析 一、结构与性质,维生素A的醋酸酯,具有共轭多烯侧链的环己烯,二、鉴别试验,1.三氯化锑反应 ：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中，显蓝色，渐变成紫红色。 溶剂采用饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液。 2.光谱法 ：维生素A分子中含5个共轭双键，其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收。 3.色谱法 ：英国药典（BP）和美国药典（USP）中维生素A 采用薄层色谱法鉴别,维生素A的紫外光谱图,图12-1,三、含量测定,中国药典 2005版：采用紫外-可见分光光度法测定维生素A 及其制剂的含量，以单位表示。 制剂：由于制剂中含有稀释用油和维生素A 原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A 独有的吸收。在规定的条件下，非维生素A 物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。,测定方法 中国药典2005版附录对维生素A的测定收载了“第一法”和“第二法”两种方法。 合成维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式维生素A。 如供试品中干扰的杂质较少，采用第一法（直接测定法，适用于高纯度的维生素A醋酸酯）测定；否则按第二法（皂化法，适用于维生素A醇）测定。,第2节 维生素B的分析 一、结构与性质,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),维生素B1,B族维生素主要有B1（盐酸硫胺）、B2（核黄素）、B6（吡多辛）、B12（氰钴胺）、烟酸及烟酰胺等。本节主要介绍维生素B1,性质：,1.共轭双键：UV （max = 246nm） 2.噻唑环含S原子：硫色素荧光法 分解产物与Pb(AC)2反应 3.碱性N原子：嘧啶环 伯氨 噻唑环 季铵 可与酸成盐；可与生物碱沉淀剂反应（鉴别和硅钨酸重量法）,二、鉴别试验,1.硫色素反应 ：维生素B1溶于氢氧化钠溶液中，噻唑环被氧化开环，生成硫醇化合物，经铁氰化钾氧化成硫色素，产物溶于正丁醇中，显蓝色荧光，加酸酸化后荧光即消失，再加碱，荧光又复显。 2.沉淀反应：可与多种生物碱沉淀试剂反应，生成不同颜色的沉淀 3.氯化物反应 ：水溶液显氯化物的鉴别反应,三、杂质检查,1.硝酸盐： 维生素B1在合成时需要使用硝酸盐，因此可能会引入硝酸盐杂质。采用靛胭脂法检查，限量为0.25%。 2.总氯量： 本品为盐酸盐，需检查总氯量。药典采用银量法检查，按干燥品计算，含总氯量应为20.6%21.2%。,四、含量测定,中国药典2005版规定 维生素B1原料药：非水滴定法 （加入醋酸汞消除盐酸盐的干扰，喹哪啶红亚甲蓝混合指示液 ） 片剂、 注射液：紫外分光光度法 （具共轭双键，在紫外区246nm处有最大吸收 ）,维生素B1片的含量测定,取本品20片，精密称定，研细， 精密称取适量（约相当于维生素 1 25mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液(91000) 约70ml，振摇15分钟使维生素1 溶解，加盐酸溶液(91000) 稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(91000) 稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在246nm 的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数为 421计算，即得。 计算：,第3节 维生素C的分析 一、结构与性质,L-抗坏血酸,1.多羟基化合物：具糖类似的性质 2. 具连二烯醇结构：强还原性，贮存过程中易变色 氧化还原滴定法,(O),3 .酸性：连二烯醇，可与Na2CO3成盐,4.旋光性：具手性C原子（C4、C5）， L(+)抗坏血酸活性最强,二、鉴别试验（2005版中国药典）,1.氧化反应 与硝酸银反应 ：+AgNO3 Ag （黑色） 与2，6-二氯靛酚的反应 ：+ 2，6-二氯靛酚钠 蓝色消失 与碱性酒石酸铜的反应：维生素C钠+碱性酒石酸铜 红色沉淀 2.光谱法 :红外光谱法,HCI,三、杂质检查,1.铁盐和铜盐的检查：原子吸收分光光度法 2.溶液颜色与澄清度的检查 ：紫外-可见分光光度法，在420nm 的波长处测定吸光度，不得过0.03。 3.炽灼残渣 ：不得过0.1 % 4.重金属：不得过百万分之十 5.细菌内毒素（注射剂）,四、含量测定,直接碘量法： （原料药及其制剂均采用此法） 1.原理 维生素C具有较强的还原性，在稀醋酸酸性溶液中，可被碘定量氧化，以淀粉为指示剂，终点显蓝色。 2.注意事项： （1）溶剂：加新沸冷H2O，减少水中溶解氧对测定的影响 （2）酸性环境：HAC，减慢VitC被O2氧化速度 （3）立即滴定：减少O2的干扰 （4）附加剂干扰的排除 片剂 滑石粉 过滤 注射剂 抗氧剂 ,丙酮,3.测定方法,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml 与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml ，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg 的C6H8O6。 计算：,第4节 维生素D的分析 一、结构与性质,维生素D2,维生素D3,甾醇的衍生物,主是维生素D2和维生素D3,性质： 1.旋光性：具手性碳原子，有旋光性，D2的比旋度为+102.5+107.5；D3比旋度为+105+112。 2.稳定性：含有多个双键，极不稳定，在空气、日光下，遇酸或氧化剂，均能发生氧化反应而变质。 3.醋酐-浓硫酸显色反应 ：本品的氯仿溶液，加入醋酐-浓硫酸溶液，摇振后，显色。 4.紫外吸收特性 ： D2和D3均含共轭体系，有紫外吸收，,二、鉴别试验（2005版药典）,1.醋酐-浓硫酸显色反应 ： 维生素D2或D3 +氯仿+醋酐-浓硫酸 初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色 D2最后成绿色 2.光谱法 ：维生素D2和维生素D3的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。,D3再变为蓝绿色，最后变为绿色,三、杂质检查,维生素D2原料药中应检查麦角甾醇。 检查方法：取本品10mg，加90乙醇2ml 溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷20mg，加90乙醇2ml ，加热溶解制成）2ml ，混合，放置18小时，不得发生浑浊或沉淀。,四、含量测定,中国药典2005版附录中收载了维生素D的含量测定方法 采用高效液相色谱法 分三法,第一法：无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品,第二法：有干扰的,第三法：按第二法处理后前维生素D峰仍受杂质干扰，仅维生素D峰可以分离时,维生素D对光敏感，测定应在暗室中进行。,第5节 维生素E的分析 一、结构与性质,维生素E,苯并二氢吡喃类 带有脂肪侧链R1、R2和乙酰化酚羟基，又称生育酚醋酸酯。,性质： 1.水解性：乙酰化的酚羟基（酯键） ，易水解成游离生育酚 2.还原性：游离生育酚易被氧化，遇光易变质 3.旋光性：天然具旋光性 合成品无旋光性 4.紫外吸收：具有苯环,图12-2,维生素E的紫外吸收图谱,0.01%无水乙醇中 max = 284nm min = 254nm,二、鉴别试验,1.硝酸反应 ： 维生素E在酸性条件下加热，先水解生成游离生育酚，再进一步被硝酸氧化成生育红而显橙红色。 方法：取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75加热约15分钟，溶液显橙红色。 2.光谱法 ：本品的红外光吸收图谱应与对照图谱一致。,三、杂质检查,游离生育酚的检查 ： 1.来源：制备中未酯化的或贮存中分解的生育酚 2.方法：硫酸铈滴定法（铈量法） 3.原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈。终点时过量硫酸铈与二苯胺（指示剂）反应，显蓝色。 取本品0.10g ，加无水乙醇5ml 溶解后，加二苯胺试液1 滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L) 滴定，消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L) 不得过1.0m