db34 t 828-2008 尿液中莱克多巴胺的残留测定-气相色谱质谱法.pdf

ICS DB34 备案号： 安徽省地方标准 DB34/T 8282008 尿液中莱克多巴胺的残留测定 气相色谱质谱法 2008-08-01 发布 2008-08-01 实施 安徽省质量技术监督局 发布 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 DB34/T 8282008 I 前 言 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省质量技术监督局批准。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。 本标准起草人：许世富、汤春莲、陶小平、蔡东东、明文庆。 本标准于2008年8月1日首次发布。 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 DB34/T 8282008 1 尿液中莱克多巴胺的残留测定 气相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了尿液中莱克多巴胺检验的制样和气相色谱质谱（GC/MS）法测定方法。 本标准适用于尿液中莱克多巴胺的定量仲裁检测。 本标准定量限为1.0g/L，线性范围：0.05ng1.0ng。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 试样制备 采集的尿样应保存于4左右的冰箱中。尿样如有混浊，应经离心处理。 4 原理 用叔丁基甲醚为提取剂提取动物尿样中游离的莱克多巴胺， 然后用固相萃取柱净化， 双三甲基硅基 三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）衍生，最后用GC/MS进行分析。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合 GB/T6682 二级水的规定。 5.2 双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1三甲基氯硅烷（TMCS） 。 5.3 莱克多巴胺标准贮备溶液（5mg/mL） ：准确称取 50mg 莱克多巴胺对照品于 10mL 容量瓶中，用甲醇 溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用（18保存 90d） 。 5.4 莱克多巴胺标准工作溶液：取莱克多巴胺标准贮备溶液，用甲醇稀释至所需浓度（4保存 7d） 。 5.5 甲苯。 5.6 甲醇 色谱纯。 5.7 乙酸乙酯。 5.8 叔丁基甲醚。 5.9 无水硫酸钠。 5.10 氢氧化钠。 5.11 氯化钠。 5.12 氢氧化钠溶液（1mol/L） ：取澄清的氢氧化钠饱和溶液 56mL，加水至 1000mL，摇匀。 5.13 3甲醇乙酸乙酯溶液：取 15mL 甲醇加乙酸乙酯至 500mL，混匀。 5.14 50甲醇乙酸乙酯溶液：取 250mL 甲醇加乙酸乙酯至 500mL，混匀。 5.15 固相萃取柱：500mg/3mL，填充料为硅藻土和硅胶，或相当者。 6 仪器设备 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 DB34/T 8282008 2 6.1 气相色谱质谱仪。 6.2 干燥箱。 6.3 冷冻离心机。 6.4 振荡器。 6.5 涡旋混合器。 6.6 分析天平：感量 0.0001g。 6.7 旋转蒸发仪。 6.8 固相萃取装备。 6.9 离心管：50mL，10mL。 6.10 氮吹仪。 6.11 鸡心瓶，50mL。 7 测定步骤 7.1 试样提取 取试样10.0mL至50mL离心管中，用氢氧化钠溶液（5.12）调节pH值为10，加1g氯化钠，振摇数秒， 加l0mL叔丁基甲醚提取，涡旋lmin，中速振荡l0min，4条件下5000g离心5min，取上清液经无水硫酸 钠过滤，收集于50mL鸡心瓶中；另取10mL叔丁基甲醚重复提取一次。用2mL叔丁基甲醚洗涤无水硫酸钠， 50旋转蒸发至干。 7.2 试样净化 依次用5mL甲醇和5mL乙酸乙酯润洗固相萃取柱，用2mL乙酸乙酯溶解鸡心瓶中的残余物，过固相萃 取柱（5.15），另取3mL 3甲醇乙酸乙酯（5.13）洗涤鸡心瓶的残余物，过柱，抽干；再用5mL 50 甲醇乙酸乙酯（5.14）洗脱，氮气吹干。 7.3 试样衍生 吹干剩余物加0.1mL双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1三甲基氯硅烷（TMCS）（5.2），加盖 于旋涡混合器上振荡，80的干燥箱加热1h，氮气吹干，加0.2mL甲苯溶解。 另取适量的莱克多巴胺标准工作溶液，氮气吹干，与试样同法进行衍生化。 7.4 色谱条件 色谱柱：5苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱（30m0.25mm0.25m），或相当者。 进样口温度：300。 柱温程序： 初温150， 保持3min， 然后以10/min升至230， 保持10min， 再以20/min升至280 保持10min。 载气：高纯氦气（99.999）。 流速：1.0mL/min，不分流进样。 进样量：1.0L。 7.5 质谱条件 El源：源温230。 电子能量：70eV。 接口温度：280。 电子倍增器电压：高于调谐电压200V。 质量扫描范围：30U550U。 选择离子监测方式（SIM） 监测离子（m/z）：250、267、179、502。 溶剂延迟：5min。 7.6 上机测定 莱克多巴胺对照溶液和样品液分别注入气相色谱质谱仪， 记录谱图， 按外标法以峰面积进行计算。 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 DB34/T 8282008 3 8 结果计算 结果按下式计算： X=n m m1 （1） 式中： X样品中莱克多巴胺含量（ng/mL） m1质谱测定对应莱克多巴胺量（ng） m取样量（mL） n稀释倍数 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法莱克多巴胺的检测限为0.5 g/kg。