SNT2060-2008进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量 测定方法 酶联免疫法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犈 狀 狕 狔 犿 犲 犾 犻 狀 犽 犲 犱 犻 犿犿 狌 狀 狅 狊 狅 狉 犫 犲 狀 狋 犪 狊 狊 犪 狔 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量 测定方法 酶联免疫法 中 国 标 准 出 版 社 出 版 北京复兴门外三里河北街 号 邮政编码： 网址 电话： 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷 印数 书号： 定价 元 前 言 本标准的附录为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位： 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 施伟良、 张晓峰、 黎昊雁、 朱振江、 何永强。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量 测定方法 酶联免疫法 范围 本标准规定了蜂王浆和王浆冻干粉中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。 本标准适用于蜂王浆和王浆冻干粉中泰乐菌素残留量的测定。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件， 其随后所 有的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 分析实验室用水规格和试验方法（ ， ： ） 方法提要 本标准以酸性的庚烷磺酸钠缓冲液来提取蜂王浆中残留的泰乐菌素， 沉淀王浆中蛋白后并调节 至 。处理后样品中残留的泰乐菌素与酶标记泰乐菌素共同竞争结合至包被在微孔板上的绵羊 抗兔抗体， 通过洗涤除去未结合的泰乐菌素和酶标记泰乐菌素， 然后加入底物显色， 用酶标仪测定吸光 度， 根据吸光度值得出试样中泰乐菌素的含量。 试剂和材料 除注明外， 所有试剂均为分析纯， 水为 规定的一级水。 泰乐菌素检测试剂盒（ 参见附录） 。 庚烷磺酸钠缓冲液： 称取 庚烷磺酸钠 （） ， 磷酸钠（ ） 用水溶解并定容到， 用磷酸调节 至 。 磷酸盐缓冲液： 称取磷酸钠（ ） ， 用水溶解并定容到， 调节 至 。 小柱， （ 或相当产品） ， （ ） 。 泰乐菌素标准品： 纯度大于等于 。 泰乐菌素标准品溶液的配制： 用甲醇作为溶剂配制成 的储存液， 于 条件下 保存。 仪器和设备 酶标仪。 八道移液器： 。 单道移液器： ， 和 。 混合振荡器。 高速低温离心机： 。 具塞试管： 。 电子天平： 。 酸度计。 犛 犖犜 试样的制备与保存 试样的制备 原始样品总量不得少于 ， 蜂王浆充分搅拌均匀后， 将样品分成两等份； 冻干粉采用四分法， 将 样品分成两等份。分好的样品装入洁净容器， 加封并做标识。 试样的保存 将样品于 条件下保存。 分析步骤 提取 称取 蜂王浆样品， 置于 具塞试管中， 加入 庚烷磺酸钠缓冲液（ ） ， 充分振荡， 条件下 离心 ， 取 上清液于一干净试管， 加入 磷酸盐缓冲液 （ ） ， 混合均匀， 调节 至 ， 此溶液即可供 检测用。最后样品稀释倍数为。王浆 冻干粉则用水以比例稀释， 充分浸泡（ 以上） 后， 称取 按照上述王浆前处理方法进行提 取， 最后稀释倍数为 。 测定条件 ） ） 给出该信息是为了方便本标准的使用者， 并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有 不同， 需经实验评估后采用。 操作条件 所有操作应在室温下（ ） 进行， 泰乐菌素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温 （ ） 后方可使用。 洗板条件 人工洗涤次数次以上， 每次加入洗涤液量为 ； 自动洗板可以预定次。 酶标仪测定条件 酶标仪测定波长为 。 测定步骤 将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上， 记录标准品及样品等在微孔架上的位置。 吸取 泰乐菌素标准溶液（ 浓度分别为： 、 、 、 、 、 、 ） 于孔 、 、 ； 吸取 样品溶液于其余微孔中。 吸取 泰乐菌素酶标记物溶液于每一个微孔。用封口膜封孔条， 并持微孔板在台面上以 圆周运动方式混匀， 室温（ ） 下避光温育 （ 温育过程中晃动振动反应板） 。 倒出孔中的液体， 将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打， 以除去孔中过多的残液， 用洗涤缓冲液洗 板次。 迅速加入 底物溶液于每一个微孔底部， 然后， 持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀 后， 室温（ ） 下避光温育 。 迅速加入 反应终止液于每一个微孔， 然后， 持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀 后， 将微孔架置于酶标仪中， 在 处测量吸光度（ 加入反应终止液后应在 内 读 取吸 光度） 。 平行试验 按以上步骤， 对同一标准溶液、 同一样品溶液均应进行平行试验测定。 空白试验 除不称取试样外， 均按上述步骤进行。 犛 犖犜 阳性质控 每次测定均应做一个添加自配泰乐菌素标准品溶液（ ） 的监控样品。以确定实验过程的操作准 确性。 结果计算 标准品和样品的 平均值除以零标准（ 、 ） 的平均 值， 再乘以 ， 计算出各标准液和样 品的百分比吸光度值。零标准为 （ 最大吸光度值） ， 其他 值为最大吸光度值的百分数。 以吸光度的百分比值（ 犅犅） 为纵坐标（） ， 泰乐菌素标准溶液浓度（ ） 的对数值为横坐标， 绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的泰乐菌素浓度后， 结果按式（ ） 进行计算： 犡犮犞 犿 （） 式中： 犡 样品中泰乐菌素的残留量， 单位为微克每千克（ ） ； 犮 从标准工作曲线上得到的样品中泰乐菌素浓度， 单位为纳克每毫升（ ） ； 犞 样品溶液的最终定容体积， 单位为毫升（ ） ； 犿 样品溶液所代表的最终试样质量， 单位为克（） 。 也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。所得结果表示至一位小数。 确证试验 如被测样品中泰乐菌素残留量的值大于限量要求时， 应用其他方法进行确证。 本方法测定低限和回收率 检测低限 本方法的检测低限为 。 回收率 本方法泰乐菌素添加浓度和回收率实验数据： 添加量为 时， 回收率为 ； 添加量为 时， 回收率为 ； 添加量为 时， 回收率为 。 犛 犖犜 附 录 犃 （ 资料性附录） 泰乐菌素试剂盒（ 杭州迪恩科技有限公司产品） ） 犃 试剂盒组成 犃 预包被抗体的 孔板： 条孔。 犃 泰乐菌素标准溶液： 。 犃 泰乐菌素酶标记物溶解液。 犃 泰乐菌素酶标记物冻干粉： 根据泰乐菌素试剂盒中说明， 可用酶标记物溶解液配制成泰乐菌素 酶标记物溶液。 犃 显色剂。 犃 稀释液： 根据泰乐菌素试剂盒中说明， 可用蒸馏水 倍稀释后使用。 犃 洗涤浓缩液（ 倍浓缩） ： 可用水稀释后使用。 犃 反应终止液。 试剂盒应在避光条件下保存。 犃 标准校正曲线 标准校正曲线见图 。 狔 狓 犚 图犃 标准校正曲线 ） 给出该信息是为了方便本标准的使用者， 并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果， 需经实 验评估后使用这些等效产品。 犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱 犜 犺 犲犪 狀 狀 犲 狓犃狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狀 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲 犱狅 犳 犮 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犪 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犪 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犣 犺 犲 犼 犻 犪 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 狑 犪 狊 犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔 犠犲 犻 犾 犻 犪 狀 犵犛 犺 犻，犉 犲 狀 犵 狓 犻 犪 狅犣 犺 犪 狀 犵，犎 犪 狅 狔 犪 狀犔 犻，犣 犺 犲 狀 犼 犻 犪 狀 犵犣 犺 狌， 犢 狅 狀 犵 狇 犻 犪 狀 犵犎 犲 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲 犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 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狅 狉 狋 犺 犲犫 犻 狀 犱 犻 狀 犵狊 犻 狋 犲 狊狅 犳 狋 犺 犲犪 狀 狋 犻 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀 犪 狀 狋 犻 犫 狅 犱 狔犪 犱 狊 狅 狉 犫 犲 犱狋 狅狋 犺 犲狊 狅 犾 犻 犱狆 犺 犪 狊 犲 犃 犳 狋 犲 狉 狋 犺 犲狑 犪 狊 犺 犻 狀 犵狊 狋 犲 狆，犪 狀 狔狌 狀 犫 狅 狌 狀 犱犿 狅 犾 犲 犮 狌 犾 犲 犻 狊 狉 犲 犿 狅 狏 犲 犱 犜 犺 犲 犫 狅 狌 狀 犱犲 狀 狕 狔 犿 犲犪 犮 狋 犻 狏 犻 狋 狔 犻 狊犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犲 犱犫 狔犪 犱 犱 犻 狀 犵犪 狀犪 犿 狅 狌 狀 狋狅 犳 犮 犺 狉 狅 犿 狅 犵 犲 狀狊 狌 犫 狊 狋 狉 犪 狋 犲 犜 犺 犲犲 狀 狕 狔 犿 犲犮 狅 狀 狏 犲 狉 狋 狊 狋 犺 犲犮 狅 犾 狅 狉 犾 犲 狊 狊犮 犺 狉 狅 犿 狅 犵 犲 狀 犻 狀 狋 狅犪犮 狅 犾 狅 狉 犲 犱（犫 犾 狌 犲）狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 犜 犺 犲犪 犱 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 狅 狆狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 犾 犲 犪 犱 狊 狋 狅 犪犮 狅 犾 狅 狉犮 犺 犪 狀 犵 犲犳 狉 狅 犿犫 犾 狌 犲 狋 狅狔 犲 犾 犾 狅 狑 犜 犺 犲犪 犫 狊 狅 狉 犫 犪 狀 犮 犲，犿 犲 犪 狊 狌 狉 犲 犱犫 狔犪犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲狉 犲 犪 犱 犲 狉（ 狀 犿） ，犻 狊 犻 狀 狏 犲 狉 狊 犲 犾 狔狆 狉 狅 狆 狅 狉 狋 犻 狅 狀 犪 犾 狋 狅狋 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 狅 狉 狋 犻 犮 狅 狊 狋 犲 狉 狅 犻 犱 狊 犻 狀狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲 犚 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狊犪 狀 犱犿 犪 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狊 犝 狀 犾 犲 狊 狊狅 狋 犺 犲 狉 狑 犻 狊 犲狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 犱，犪 犾 犾 狋 犺 犲犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狊狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犃 犚 犵 狉 犪 犱 犲 狑 犪 狋 犲 狉 犻 狊狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋犵 狉 犪 犱 犲 犛 犖犜 狑 犪 犲 狉狆 狉 犲 狊 犮 狉 犻 犽 犲 犱 犻 狀犌 犅犜 犈 狀 狕 狔 犿 犲 犻 犿犿 狌 狀 狅 犪 狊 狊 犪 狔犽 犻 狋 犳 狅 狉 狋 犺 犲狇 狌 犪 狀 狋 犻 狋 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 犪 犾 狔 狊 犻 狊狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀狊 犲 犲犪 狀 狀 犲 狓犃 犎 犲 狆 狋 犪 狀 犲狊 狌 犾 犳 狅 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狊 狅 犱 犻 狌 犿 狊 犪 犾 狋犫 狌 犳 犳 犲 狉 狊：犠 犲 犻 犵 犺犎 犲 狆 狋 犪 狀 犲狊 狌 犾 犳 狅 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狊 狅 犱 犻 狌 犿 狊 犪 犾 狋犆 犎 （ 犆 犎）犛 犗犖 犪 犵犪 狀 犱犖 犪犘 犗 犎犗 犵，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狑 犻 狋 犺狑 犪 狋 犲 狉 狋 狅狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狅 犳 犔，犪 犱 犼 狌 狊 狋狆 犎狋 狅 狌 狊 犻 狀 犵犎犘 犗 犘 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉：犠犲 犻 犵 犺 犵犖 犪犎 犘 犗 犎犗，犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲 犻 狀犔狑 犪 狋 犲 狉，犪 犱 犼 狌 狊 狋狆 犎狋 狅 犎 犔 犅犮 狅 犾 狌 犿 狀 狊：犗 犪 狊 犻 狊，犿 犔（ 犿 犵） 犜 狔 犾 狅 狊 犻 狀狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱（犔 狔 狅 狆 犺 犻 犾 犻 狕 犲 犱） ：犘 狌 狉 犻 狋 狔 犜 犺 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀（ 犵 犿 犔） ： 狊 狋 狅 狉 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲犪 狋 犃 狆 狆 犪 狉 犪 狋 狌 狊犪 狀 犱犲 狇 狌 犻 狆 犿 犲 狀 狋 犈 犔 犐 犛 犃狉 犲 犪 犱 犲 狉犲 狇 狌 犻 狆 狆 犲 犱狑 犻 狋 犺犪 狀 犿犳 犻 犾 狋 犲 狉 犔 犔犿 狌 犾 狋 犻 犮 犺 犪 狀 狀 犲 犾犿 犻 犮 狉 狅 狆 犻 狆 犲 狋 狋 犲狑 犻 狋 犺狊 狌 犻 狋 犪 犫 犾 犲狋 犻 狆 狊 狏 犪 狉 犻 犪 犫 犾 犲狏 狅 犾 狌 犿 犲狆 狉 犲 犮 犻 狊 犻 狅 狀犿 犻 犮 狉 狅 狆 犻 狆 犲 狋 狋 犲狑 犻 狋 犺狊 狌 犻 狋 犪 犫 犾 犲 狋 犻 狆 狊： 犔 犔， 犔 犔犪 狀 犱 犿 犔 犿 犔 犛 犪 犽 犲 狉狏 狅 狋 犲 狓 犆 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲： 狉犿 犻 狀 犜 犲 狊 狋 狋 狌 犫 犲狑 犻 狋 犺狆 犾 狌 犵： 犿 犔 犈 犾 犲 犮 狋 狉 狅 狀 犻 犮犫 犪 犾 犪 狀 犮 犲： 犵 犵 狆 犎犿 犲 狋 犲 狉 犘 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狊 狋 狅 狉 犪 犵 犲狅 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲 犘 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犲狑 犺 狅 犾 犲狆 狉 犻 犿 犪 狉 狔狊 犪 犿 狆 犾 犲狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犿 狅 狉 犲 狋 犺 犪 狀 犵 犉 狅 狉 狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊：犇 犻 狏 犻 犱 犲 犻 狋 犻 狀 狋 狅 狋 狑 狅犲 狇 狌 犪 犾 狆 犪 狉 狋 狊犪 犳 狋 犲 狉犿 犻 狓狑 犲 犾 犾 犉 狅 狉狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔狆 狅 狑 犱 犲 狉狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊：犇 犻 狏 犻 犱 犲犻 狋 犻 狀 狋 狅狋 狑 狅犲 狇 狌 犪 犾狆 犪 狉 狋 狊犫 狔狇 狌 犪 狉 狋 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犲 狀犽 犲 犲 狆狋 犺 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犲 犱狊 犪 犿 狆 犾 犲 犻 狀 狋 狅狋 狑 狅狊 犪 犿 狆 犾 犲犫 狅 狋 狋 犾 犲 狊，狊 犲 犪 犾 犪 狀 犱 犾 犪 犫 犲 犾 犛 犖犜 犛 狋 狅 狉 犪 犵 犲狅 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲 犛 狋 狅 狉 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲犪 狋 犃 狀 犪 犾 狔 狊 犻 狊狆 狉 狅 犮 犲 犱 狌 狉 犲 犈 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犘 狉 狅 犮 犲 犱 狌 狉 犲 犠犲 犻 犵 犺 狋 犵狊 犪 犿 狆 犾 犲狅 犳 犺 狅 犿 狅 犵 犲 狀 犻 狕 犲 犱狋 犻 狊 狊 狌 犲 狋 狅 犿 犔狋 犲 狊 狋 狋 狌 犫 犲 犃 犱 犱犿 犔犎 犲 狆 狋 犪 狀 犲狊 狌 犾 犳 狅 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狊 狅 犱 犻 狌 犿狊 犪 犾 狋犫 狌 犳 犳 犲 狉 狊（ ） 犆 犲 狀 狋 狉 犻 犳 狌 犵 犲 狉犿 犻 狀犪 狋 犳 狅 狉 犿 犻 狀 犘 狌 狋 犿 犔狊 狌 狆 犲 狉 狀 犪 狋 犲 狀 狋 犻 狀 狋 狅犪 犮 犾 犲 犪 狀狋 狌 犫 犲，犪 犱 犱 犿 犔狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犲犫 狌 犳 犳 犲 狉（ ） ，犪 犳 狋 犲 狉 狏 狅 狉 狋 犲 狓 犻 狀 犵，犪 犱 犼 狌 狊 狋 狆 犎狋 狅 犪 狀 犱 犻 狋狊 狉 犲 犪 犱 狔 犳 狅 狉犈 犔 犐 犛 犃犪 狊 狊 犪 狔 犉 狅 狉 狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔狆 狅 狑 犱 犲 狉，犻 狋狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犱 犻 狆犻 狀狑 犪 狋 犲 狉（）犪 狋 犾 犲 犪 狊 狋犺，狋 犺 犲 狀狑 犲 犻 犵 犺 犵犳 狅 狉犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犪 犮 犮 狅 狉 犱 犻 狀 犵狋 狅狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犿 犲 狋 犺 狅 犱 犜 犲 狊 狋犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀 ） 犗 狆 犲 狉 犪 狋 犻 狅 狀犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀 ） 犜 犺 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狅 狀狊 狌 狆 狆 犾 狔 犻 狀 犵犺 犲 狉 犲 犻 狀犻 狊 犼 狌 狊 狋犳 狅 狉 狋 犺 犲犮 狅 狀 狏 犲 狀 犻 犲 狀 犮 犲狌 狊 犪 犵 犲犳 狅 狉 狋 犺 犲狌 狊 犲 狉 狊狅 犳狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狀 犱狀 狅 狋犳 狅 狉 狊 狅 犿 犲犮 犲 狉 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋狊犪 狌 狋 犺 狅 狉 犻 狕 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犪 犾 狔 狊 犻 狊狆 狉 狅 犮 犲 犱 狌 狉 犲 犜 犺 犲狋 犲 狊 狋 犻 狀 犵狆 狉 狅 犮 犲 狊 狊狅 犳 犪 狀 狅 狋 犺 犲 狉犲 狇 狌 犪 犾 犽 犻 狋 狊犿 犪 狔 犫 犲犱 犻 犳 犳 犲 狉，狊 狅 犻 狋狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狌 狊 犲 犱犪 犳 狋 狋 犲 狊 狋 犻 狀 犵，犲 狏 犪 犾 狌 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱 狏 犲 狉 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 犃 犾 犾 狋 犺 犲狅 狆 犲 狉 犪 狋 犻 狅 狀狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犱 狅 狀 犲犪 狋 狉 狅 狅 犿狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲（ ） 犜 犺 犲狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狊狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犫 狉 狅 狌 犵 犺 犲 狌 狆狋 狅犪 犿 犫 犻 犲 狀 狋 狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲（ ）犫 犲 犳 狅 狉 犲狊 狋 犪 狉 狋 犻 狀 犵狋 犺 犲狋 犲 狊 狋 犜 犺 犲狑 狅 狉 犽犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳狑 犪 狊 犺犿 犪 犮 犺 犻 狀 犲 犕 犪 狀 狌 犪 犾狑 狅 狉 犽：犃 犾 犾 狋 犺 犲狑 犲 犾 犾 狊犿 狌 狊 狋犫 犲狑 犪 狊 犺 犲 犱犿 犪 狀 狌 犪 犾 犾 狔犿 狅 狉 犲狋 犺 犪 狀狋 犻 犿 犲 狊 犈 犪 犮 犺狋 犻 犿 犲犻 狀 犼 犲 犮 狋 犔 狑 犪 狊 犺狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狑 犻 狋 犺犿 狌 犾 狋 犻 犮 犺 犪 狀 狀 犲 犾犿 犻 犮 狉 狅 狆 犻 狆 犲 狋 狋 犲 犃 狌 狋 狅 犿 犪 狋 犻 狊 犿 狑 狅 狉 犽：犃 犾 犾 狋 犺 犲狑 犲 犾 犾 狊狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狑 犪 狊 犺 犲 犱 狋 犻 犿 犲 狊犫 狔狋 犺 犲狑 犪 狊 犺犿 犪 犮 犺 犻 狀 犲 犜 犺 犲狑 狅 狉 犽犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲狉 犲 犪 犱 犲 狉 犜 犺 犲犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲狉 犲 犪 犱 犲 狉狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狌 狊 犲 犱犪 狋犪 狀 犿犳 犻 犾 狋 犲 狉 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 犘 狉 犲 犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犲犪 狀犪 狊 狊 犪 狔犾 犪 狔 狅 狌 狋，狉 犲 犮 狅 狉 犱 犻 狀 犵犫 犾 犪 狀 犽，狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狀 犱狊 犪 犿 狆 犾 犲狆 狅 狊 犻 狋 犻 狅 狀 狊，狋 犪 犽 犻 狀 犵犻 狀 狋 狅 犪 犮 犮 狅 狌 狀 狋 狋 犺 犪 狋犪 犾 犾 犺 犪 狏 犲狋 狅犫 犲狉 狌 狀 犻 狀犱 狌 狆 犾 犻 犮 犪 狋 犲 犃 犱 犱 犔狅 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲犱 犻 犾 狌 狋 犻 狅 狀犫 狌 犳 犳 犲 狉 犻 狀 狋 狅狋 犺 犲犕 犪 狓 犻 犿 狌 犿 犅 犻 狀 犱 犻 狀 犵狑 犲 犾 犾 狊；犃 犱 犱 犔狅 犳犲 犪 犮 犺 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱（、 、 、 、 、 、 狀 犵犿 犔）犻 狀 狋 狅狋 犺 犲犪 狊 狊 犻 犵 狀 犲 犱狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犲 犾 犾 狊（犃 、犃 犎 、犎 ） ； 犃 犱 犱 犔狅 犳犲 犪 犮 犺狊 犪 犿 狆 犾 犲 犻 狀 狋 狅狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲狑 犲 犾 犾 狊 犛 犖犜 犃 犱 犱 犔狅 犳犮 狅 狀 犼 狌 犵 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犻 狀犪 犾 犾狑 犲 犾 犾 狊，狌 狊 犻 狀 犵狋 犺 犲犿 狌 犾 狋 犻 犮 犺 犪 狀 狀 犲 犾犿 犻 犮 狉 狅 狆 犻 狆 犲 狋 狋 犲 犛 犲 犪 犾 狋 犺 犲 犿 犻 犮 狉 狅 狋 犻 狋 狉 犲狆 犾 犪 狋 犲犪 狀 犱狊 犺 犪 犽 犲狋 犺 犲狆 犾 犪 狋 犲犵 犲 狀 狋 犾 狔狑 犻 狋 犺狉 狅 狋 犪 狋 犻 狀 犵犿 狅 狋 犻 狅 狀犳 狅 狉犳 犲 狑狊 犲 犮 狅 狀 犱 狊狅 狉狋 犪 狆狋 犺 犲狊 犻 犱 犲狅 犳 狋 犺 犲犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲犳 狉 犪 犿 犲狅 狉 狋 犻 犿 犲 狊 狋 狅犿 犻 狓 犐 狀 犮 狌 犫 犪 狋 犲 犿 犻 狀犪 狋 狉 狅 狅 犿狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲（ ） 犜 犪 狆 狆 犻 狀 犵狋 犺 犲狆 犾 犪 狋 犲狋 狅犿 犻 狓狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲狆 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犲 犱狋 狅狋 犻 犿 犲 狊狑 犻 狋 犺 犻 狀狋 犺 犲 犻 狀 犮 狌 犫 犪 狋 犻 狅 狀 犘 狅 狌 狉狋 犺 犲犾 犻 狇 狌 犻 犱狅 狌 狋狅 犳狋 犺 犲狑 犲 犾 犾 狊；狉 犲 犿 狅 狏 犲狋 犺 犲狉 犲 犿 犪 犻 狀 犻 狀 犵犱 狉 狅 狆 犾 犲 狋 狊犫 狔狋 犪 狆 狆 犻 狀 犵狋 犺 犲犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲 狌 狆 狊 犻 犱 犲犱 狅 狑 狀 狏 犻 犵 狅 狉 狅 狌 狊 犾 狔犪 犵 犪 犻 狀 狊 狋犪 犫 狊 狅 狉 犫 犲 狀 狋狆 犪 狆 犲 狉；狑 犪 狊 犺狋 犺 犲 犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狋 犺 犲犮 狅 狀 犱 犻 狋 犻 狅 狀 狅 犳 犝 狊 犻 狀 犵狋 犺 犲犿 狌 犾 狋 犻 犮 犺 犪 狀 狀 犲 犾犿 犻 犮 狉 狅 狆 犻 狆 犲 狋 狋 犲，犪 犱 犱 犔狅 犳 狊 狌 犫 狊 狋 狉 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 犻 狀 狋 狅犪 犾 犾狑 犲 犾 犾 狊犪 狀 犱犿 犻 狓 狋 犺 狅 狉 狅 狌 犵 犺 犾 狔狑 犻 狋 犺狉 狅 狋 犪 狋 犻 狀 犵犿 狅 狋 犻 狅 狀 犳 狅 狉 犳 犲 狑狊 犲 犮 狅 狀 犱 狊狅 狉 狋 犪 狆 狋 犺 犲狊 犻 犱 犲狅 犳 狋 犺 犲犿 犻 犮 狉 狅 狆 犾 犪 狋 犲 犳 狉 犪 犿 犲狅 狉 狋 犻 犿 犲 狊 狋 狅犿 犻 狓；犐 狀 犮 狌 犫 犪 狋 犲犳 狅 狉 犿 犻 狀犪 狋 狉 狅 狅 犿狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲（ ） 犃 犱 犱 犔狅 犳狊 狋 狅 狆狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狋 狅犲 犪 犮 犺狑 犲 犾 犾 犪 狀 犱犿 犻 狓狋 犺 狅 狉 狅 狌 犵 犺 犾 狔狑 犻 狋 犺狉 狅 狋 犪 狋 狅 狉 狔犿 狅 狋 犻 狅 狀犳 狅 狉 犳 犲 狑 狊 犲 犮 狅 狀 犱 狊；犿 犲 犪 狊 狌 狉 犲狋 犺 犲犪 犫 狊 狅 狉 犫 犪 狀 犮 犲犪 狋 狀 犿 犚 犲 犪 犱狑 犻 狋 犺 犻 狀 犿 犻 狀 狌 狋 犲 狊 犘 犪 狉 犪 犾 犾 犲 犾 狋 犲 狊 狋 犉 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狋 犺 犲犪 犫 狅 狏 犲狊 狋 犲 狆 狊，狋 犺 犲狊 犪 犿 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 狊犪 狀 犱狊 犪 犿 狆 犾 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀 狊犪 犾 狊 狅狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犿 犲 犪 狊 狌 狉 犲 犱犪 狋 狋 犺 犲 狊 犪 犿 犲狋 犻 犿 犲犳 狅 狉狆 犪 狉 犪 犾 犾 犲 犾 狋 犲 狊 狋 犅 犾 犪 狀 犽狋 犲 狊 狋 犜 犺 犲狋 犲 狊 狋狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犱 狅 狀 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狋 犺 犲犪 犫 狅 狏 犲狊 狋 犲 狆 狊犲 狓 犮 犲 狆 狋 犳 狅 狉犪 犱 犱 犻 狀 犵狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊 犘 狅 狊 犻 狋 犻 狏 犲犿 狅 狀 犻 狋 狅 狉 犻 狀 犵 犃 狀 犪 犾 狔 狕 犲犪狉 犲 犮 狅 狏 犲 狉 犻 犲 狊犳 狅 狉 狋 犻 犳 犻 犲 犱犪 狋犿 犪 狓 犻 犿 狌 犿狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 犾 犻 犿 犻 狋（犕 犚 犔）犾 犲 狏 犲 犾 狌 狊 犻 狀 犵犫 犾 犪 狀 犽狊 犪 犿 狆 犾 犲犲 犪 犮 犺狋 犲 狊 狋 犆 犪 犾 犮 狌 犾 犪 狋 犻 狀 犵狋 犺 犲狉 犲 狊 狌 犾 狋 犜 犺 犲犗 犇狏 犪 犾 狌 犲 狊狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 狊犪 狀 犱狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊（犿 犲 犪 狀狏 犪 犾 狌 犲 狊狅 犳 狋 犺 犲犱 狌 狆 犾 犻 犮 犪 狋 犲 狊）犪 狉 犲犱 犻 狏 犻 犱 犲 犱犫 狔狋 犺 犲 犿 犲 犪 狀犗 犇狏 犪 犾 狌 犲狅 犳 狋 犺 犲狕 犲 狉 狅狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱（狑 犲 犾 犾 狊犃 犪 狀 犱犃 ）犪 狀 犱犿 狌 犾 狋 犻 狆 犾 狔犫 狔 （犅犅） ；狋 犺 犲狕 犲 狉 狅狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊狋 犺 狌 狊犿 犪 犱 犲犲 狇 狌 犪 犾 狋 狅 （犿 犪 狓 犻 犿 犪 犾犪 犫 狊 狅 狉 犫 犪 狀 犮 犲）犪 狀 犱狋 犺 犲狅 狋 犺 犲 狉犗 犇 狏 犪 犾 狌 犲 狊犪 狉 犲狇 狌 狅 狋 犲 犱犻 狀狆 犲 狉 犮 犲 狀 狋 犪 犵 犲 狊狅 犳 狋 犺 犲犿 犪 狓 犻 犿 犪 犾 犪 犫 狊 狅 狉 犫 犪 狀 犮 犲 犈 狀 狋 犲 狉狋 犺 犲犅犅狏 犪 犾 狌 犲 狊犮 犪 犾 犮 狌 犾 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉犲 犪 犮 犺狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狀犪狊 犲 犿 犻 犾 狅 犵 犪 狉 犻 狋 犺 犿 犻 犮狊 狔 狊 狋 犲 犿 狅 犳犮 狅 狅 狉 犱 犻 狀 犪 狋 犲 狊 犪 犵 犪 犻 狀 狊 狋狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀；犱 狉 犪 狑狋 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犮 狌 狉 狏 犲；犐 狀 狋 犲 狉 狆 狅 犾 犪 狋 犲狋 犺 犲犮 狅 狉 狉 犲 狊 狆 狅 狀 犱 犻 狀 犵 犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀犳 狉 狅 犿狋 犺 犲犮 犪 犾 犻 犫 狉 犪 狋 犻 狅 狀犮 狌 狉 狏 犲；犆 犪 犾 犮 狌 犾 犪 狋 犲狋 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀犻 狀狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊犪 犮 犮 狅 狉 犱 犻 狀 犵狋 狅犳 狅 狉 犿 狌 犾 犪（） ： 犡犮犞 犿 （） 犛 犖犜 狑 犺 犲 狉 犲 犡狋 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀 犻 狀狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊狌 狀 犻 狋 犻 狀 犵 犽 犵 ； 犮狋 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 狊犵 狅 狋 狋 犲 狀犳 狉 狅 犿狋 犺 犲狊 犲 犿 犻 犾 狅 犵 犪 狉 犻 狋 犺 犿 犻 犮狊 狔 狊 狋 犲 犿狅 犳犮 狅 狅 狉 犱 犻 狀 犪 狋 犲 狊狌 狀 犻 狋 犻 狀狀 犵犿 犔； 犞狋 犺 犲犳 犻 狀 犪 犾 狏 狅 犾 狌 犿 犲狅 犳 狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狌 狀 犻 狋 犻 狀犿 犔； 犿狋 犺 犲犳 犻 狀 犪 犾 狊 犪 犿 狆 犾 犲狑 犲 犻 犵 犺 狋狅 犳 狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀狌 狀 犻 狋 犻 狀犵 犗 狋 犺 犲 狉犱 犪 狋 犪狆 狉 狅 犮 犲 狊 狊 犻 狀 犵狊 狅 犳 狋 狑 犪 狉 犲犮 犪 狀犪 犾 狊 狅犫 犲狌 狊 犲 犱狋 狅犮 犪 犾 犮 狌 犾 犪 狋 犲狋 犺 犲犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀 犜 犺 犲狉 犲 狊 狌 犾 狋 狊 犻 狀 犱 犻 犮 犪 狋 犲狋 狅狅 狀 犲犱 犲 犮 犻 犿 犪 犾 犆 狅 狀 犳 犻 狉 犿 犪 狋 狅 狉 狔犜 犲 狊 狋 犐 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲狉 犲 狊 狌 犾 狋狅 狏 犲 狉犕 犚 犔，犻 狋狊 犺 狅 狌 犾 犱犫 犲犮 狅 狀 犳 犻 狉 犿 犲 犱狑 犻 狋 犺犮 狅 狀 犳 犻 狉 犿 犪 狋 犻 狅 狀犿 犲 狋 犺 狅 犱 犔 犻 犿 犻 狋狅 犳犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狉 犲 犮 狅 狏 犲 狉 狔 犔 犻 犿 犻 狋狅 犳犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犲 犾 犻 犿 犻 狋狅 犳犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀 犻 狊 犵 犽 犵 狉 犲 犮 狅 狏 犲 狉 狔 犜 犺 犲犲 狓 狆 犲 狉 犻 犿 犲 狀 狋 犪 犾 犱 犪 狋 犪狅 犳 狋 犺 犻 狊 犳 狅 狉 狋 犻 犳 狔 犻 狀 犵犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 狔 犾 狅 狊 犻 狀犪 狀 犱狉 犲 犮