db13t1006-2009鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱-荧光检测法.pdf

I C S 1 3 C 5 3 DB1 3 河 北 省 地 方 标准 DB1 3 / T 1 0 0 6 -2 0 0 9 鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留 高效液相色谱一荧光检测法 2 0 0 9 - 0 3 - 0 9发布2 0 0 9 - 0 3 - 2 4实施 河 北 省 质 量: 技 术 监 督 局 发布 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 D B1 3 / T 1 0 0 6 -2 0 0 9 . 山. o I1吕 本标准由秦皇岛市质量技术监督局提出。 本标准起草单位:秦皇岛正大有限公司、秦皇岛市标准化协会。 本标准主要起草人: 刘俊华、丛思羞、 石丽敏、鹿翠珍。 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 D B1 3 / T 1 0 0 6 - 2 0 0 9 鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留 高效液相色谱一荧光检测法 范围 本标准规定了鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、 诺氟沙星、氧氟沙星残留量检测的原理、仪器、提取 和净化。 本标准适用于鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定;鸡肝脏、肾脏中 恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定也可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件， 其随后所有 的修改单 ( 不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 分 析实 验室 用水 规格 和试 验方 法 3原理 样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星用乙睛提取，用正己烷净化，用高效液相色谱- 荧光检测法测定，外标法定量。 4 试剂与材料 4 . ， 所用试剂除另有指定外， 均为色谱纯。 4 .2 试验用水应符合G B / T 6 6 8 2 中二级水的规定。 4 .3 乙睛。 4 .4 饱和正己烷:用乙睛饱和。 4 .5 正已烷。 4 . 6 无水硫酸钠: 分析纯， 经6 4 0 灼烧4 h 后， 贮于密闭容器中备用。 4 . 7 0 .0 1 m o U L 四T基澳化按溶液 ( p H = 3 .0 ) :称取3 . 2 2 g四丁基滨化按， 用1 0 0 0 m L 水稀释， 冰醋酸 调解p H 值到3 .0 0 4 .8 恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品:纯度)9 5 .0 % 0 4 .9 恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准储备溶液:分别称取恩诺沙星、环丙沙星、 诺氟 沙星、氧氟沙星标准品1 0 . 0 m g( 按实际含量折算) ， 用0 . 0 3 m o l/ L N a O H 溶液1 0 m L 溶解， 再用乙睛稀释 定容于1 0 0 m L 棕色容量瓶中， 此溶液浓度为1 0 0 5 g / m L 。各标准储备溶液置于2 C - 8 冰箱中冷藏保 存， 保存期为六个月。标准使用液用流动相稀释至 适当浓度， 使用时现配现用。 仪器 高效液相色谱仪。配有荧光检测器。 高速 组 织均质 器， 转 速1 0 0 0 0 r p m 以 上。 旋转蒸发器。 离心机。 涡旋混合器。 1 2 3 45 !“i 5 . 5. 5. 5 . 5. 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 DB 1 3 / T 1 0 0 6 - 2 0 0 9 5 . 6 5. 7 5 . 8 5 . 9 精密 分 析天 平 ( 感 量 0 .0 0 0 1 g ) ; 天 平 ( 感 量 0 .0 1 g ) 0 振荡器。 搅肉机。 尼龙微孔过滤膜: c 0 . 2 5 m0 6 色谱条件 6 . 1 6 . 2 6 . 3 6 . 4 6 . 5 6 . 6 色谱柱: Z O R B A X S B - A Q 4 .6 X 2 5 0 m m , 5 5 m 或相当 者。 流动相: 0 . 0 1 m o l/ L 四T基澳化钱 ( p H = 3 .0 )+ 乙睛=( 9 7 .5 + 2 .5 , V N) o 流速: 1 .0 m L / m i n o 检测波长: 激发波长2 8 0 n m ， 发射波长4 5 0 r a n , 柱温: 4 0 c C 进样量: 2 0 p L o 7 样 品 处理 7 . 1 样品制备 取待检胸肉 ( 或腿肉)样品，弃去筋、皮、骨和脂肪，切成小块后，用搅肉机搅碎。 7 . 2 提 取 准确称取绞碎鸡肉 样品5 g( 精确至0 .0 1 g )于5 0 m L 塑料离心管， 加人1 0 g 无水硫酸钠， 加2 5 m L 乙睛，用高速组织均质器于1 5 0 0 0 r p m 高速均质0 .8 m i n v 1 . 5 m i n 后， 3 5 0 0 r p m 离心1 0 m i n ， 移取上清 液转移到另一个5 0 m L 塑料离心管中，残渣用1 5 m L 乙睛重复提取一次，合并上清液。 7 .3 净化 在合并后的上清液中加入3 0 m L 饱和正己烷， 置振荡器上高速振荡5 m i n , 3 5 0 0 r p m 离心1 0 m i l l , 去除上层正己烷相，收集下层乙睛于蒸发浓缩瓶中，然后置4 0 水浴上减压蒸发浓缩至干，准确加人 2 .0 m L 流动相溶解残渣， 转移至离心管， 加人2 m L 正己烷， 置振荡器上高速振荡3 m i n ， 于4 0 0 0 r p m 离 心5 m i n .吸取下层液体用尼龙微孔过滤膜过滤，滤液待测。 8测定 8 .1 标准工作曲线的制作 配制恩诺沙星、 环丙沙星、 诺氟沙星、 氧氟沙星混合标准溶液， 使得溶液浓度为1 .0 5 岁 m L( 其中 氧氟沙星浓度为3 .0 5 g / m L ) ，分别移取1 .0 5 g / m L 的混合标准溶液2 5 L , 1 0 5 L , 2 0 5 L , 5 0 5 L , 1 0 0 5 L , 2 0 0 5 L 用流动相稀释成浓度分别为0 .0 0 2 5 空白样品和空白添加样品的测定按步骤7 操作。本试验用于计算试验的回收率R c ，试 验的回收率用于对阳性的 残留结果进行残留量的校正。回收率 R 滋公式 ( 1 )计算。 。式一。 ， ， 八 八 ， 八C= 入I 气 入 J 勿 A m ( 1 ) 式中: 凡 代表回收 率; A 一空白 添加样品中四 种氛喳诺酮 类药物残留 量测定 值， 5 吮 ; A o 空白样品中四 种氟咬诺酮类药物残留量测 定值， A g / g ; A m 空白 样品中添 加四 种氛唆 诺酮类药物含 I t , .g /m L ; 试样中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量 ( 待校正值)按公式 ( 2 )计算。 C = 望 二 生 塑 立丝X 1 0 0 0 A S x m ( 2 ) 式 中: c样品中氧 氛沙星、 诺氟沙星、环 丙沙星、 恩诺沙星 残留 量， W g /g ; A样品溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、 环丙沙星、恩诺沙星的峰面积 A o 一 一 一 空白实验被测物的色谱峰面积或峰高 标准工作溶翔 标准工作溶泊 样品定 容体积 准工作溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积 准 工作溶液中氧氟沙星、 诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星的浓度， 5 g / m L ; m L ; As CsV m样品的克重， g o 9 检验报告 结果报告值按公式 ( 3 )计算。 ( 3 ) 式中: C , 经过回收 校正的 样品中恩诺沙星、 环丙沙星、 诺氟沙星、 氧 氟沙星残留 量， N g l k g ; C 未校 正的 样品中 思诺沙星、 环 丙沙星、 诺氟沙星、 氧 氟沙星 残留 量， 5 g /k g ; R 一回收 率， % 。 9 . 1 线性范围 氧氟沙星在0 . 0 0 3 5 g / g -0 .6 p g / g 范围内呈良 好的线性关系， 诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星在 0 .0 0 1 5 g / g -0 .2 p g / g 范围内呈良 好的 线性关系， 相关系数均大于0 . 9 9 9 8 1 0 检测限 1 0 . 1 鸡肉 产品的检测限: 恩诺沙星为2 5 g / k g ， 环丙沙星为 2 5 g /k g ， 诺氟沙星为2 5 g / k g ,氧氟沙星为 6 ji g / k g . 1 0 .2 四种报哇诺酮类检测色谱图 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 D B1 3 / T 1 0 0 6 - 2 0 0 9 四种氟喳诺酮类检测色谱图见图1 0 一 6L!，。仁 ，J二，、 叮gp.尸2。0从人 /了 。;卜，.。户一 一 仍6N朽一。X曰0未 从 啊- 一 一一 U 切 J 韦 0 . 1 扣2 0 0走 的叹 田8 山1 以田1 之 的1 斌团1 压 的 鸳 2 0 . 加2 2 团2 4 . 0 0韶 . 田洲加旅 田左 . 的 3 4 . 山洲 的 图 1 4 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准网( w