大豆ω-3脂肪酸脱氢酶基因GmFAD3C在酿酒酵母中的表达.pdf

! 卷 “ 期 !#$ 年 “ 月 生物工程学报 !“#$%1. 3? / + B.+,9 C.+9?*(%9%$/ (- !*(? 8$#9+, +$7 A(),/*2 (- 6“+$7($1 A*(#$0%，# $+$ !6#“#，!“#$+ ! !(,%1% (- ;#-% 60#%$0%/ 0=LGJ0 C.3,+,9 4129/ GJ0，+,5 91, 2-9-.15 3, J （.+L）3a-35 D153-D 39 1_/ B+? 2.1 3, 23,+,9 ?9.+3,，91 2/ 2/ =9D8EM! 2+, ?8123C32+/ 2+9+/1 “K 2+.;?9.+91 / 9+A3,B 1 C-39( :03 ;)/51 !L3,(-3+31$+%() !“ #$%6，93,“） ， 单倍体， 由山 东农业大学郑成超惠赠； J6A 酵母游离型穿梭表达 载体， KL. 组 成 型 启 动 子， 5M56 终 止 子， 5LNAO /PQI 复制起点， 酵母中筛选标记为 RP/“， 大肠杆 菌中筛选标记为 /0， 5; （R-$!） 培养基参照 分子克隆实验指南（第三版） 68； 其他常规试剂均 为分析纯。 !“%引物合成 根据网上已登录的 $+!“#“/ 核苷酸序列 （/M8F?68） 设计引物如下 Q*2+* J-(W4PI X !“#$%)?!“#!A $%41D.1 E=F GGG （=FGGG， =GGGG， HFGG， FGGG， BFGG， =GGG） ；F： )(* “196I20 9: J*%- 营养丰富的培养基中， 酵母大约 KG;+5 增殖一代， 所 以 B#L 大约传了 =F 世代， 从 M) 平板上用牙签挑取 =GG 个单克隆到 (N 筛选培养基平板上， ! 个重复 (N 平板上出现的菌斑数量分别为 O=， HF， !， 质粒 平均丢失率为 BHP。 !“#!“#$%$SU 载体上的约 =GG 和 Q“#$%409,14“L+2 45478/+/ 9: 09047 7+“+6 :4008 42+6/ +5 “%(“)+0+2 42+6； =： =： “47;+097.+2 42+6； =O： G：/0.41+2 42+6； =O： =：97.+2 42+6；=O： B ：7+597.+2 42+6；=O： !：“S7+597.5+2 42+6- 表 % 转基因菌株脂肪酸组成 （450/ ).12.50 9: 09047 :4008 42+6/ (=： G(=： =(=O： G(=O： =(=O： B(=O： !J0L.1/ Q“#=!TB!TKFT#=KT=BBTGW!T# Q“#$%?A? 等 $+$ 年将 绿藻 4B :7+)0 /; *,71),1 +)9 81,-)/4/=CK H，,TS +4Q 91!9TC JK=V 9 UT=T J=W:KKSTU9!% V9WWX 9J=V ASTU9!% V9WWX 9J ?-027/4，#NN%， )-!： 2“- Y 2-“ 7 L:E：4O4 ):T，#N-7 “ S9K RSTU9! % V9WWX!9J=W: XT9= KKT=?:JT 9W WAT V9= KJ? XT9= Kc; KKT=K9W= 9=C JA9:9JWT:V 9 CTKW9!7 V9WWX 9JS49T=:A9C ?%,% (8 5-*+!.， !YYY，#!$：“ H !F !O5$.+) DK，S+1Q+) RP，/$;Q1,.+ 9$7+.%71) B $? ?188B 1.B7 ;+ .)B:8$)+($.+9( ;+ (, )#*+#,-./*!0 *!,!10#!4 5-*+!.0“,/，“， %： !YG H !YOG !I=$Q+77$ M*，K+; DJ4 3%,.8($,17 +E:)+(17 9,#3+ ;+ +8+)$7$%+,8(?(.18(