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第2 7 卷第3 期 2 0 0 6 年 6 月 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) J o u r n a l o f X i a n J i a o t o n g U n i v e r s i t y ( Me d i c a l S c i e n c e s ) Vo l . 2 7 No . 3 J u n . 2 0 0 6 乌饭树树叶及其提取物对视网膜光损伤的保护作用 王 ( 1 .江南大学食品学院， 江苏无锡 立 ， 张雪形“ ， 妇 匕 惠源 2 1 4 0 3 6 ; 2 . 无锡第四人民医院眼科， 江苏无锡2 1 4 0 3 6 ) 摘要: Q的研究乌饭树树叶及其提取物对视网膜免受光损伤的保护功能。方法将 2 0只新西兰白兔分成 4 组: 正 常对照组和模型对照I, l l , in 组。正常对照组动物自由摄取饲料， 自由饮水; 模型对照工、 II . II I 组动物除自由摄取饲 料， 自由饮水外， 每天分别喂乌饭树新鲜树叶 5 0 g / ( k g “ d ) 、 乌饭树陈旧树叶 5 0 g / ( k g “ d ) 和乌饭树树叶提取物 5 0 m g / ( k g . d ) ， 连续4 周。 并且进行强光刺激， 同时利用视网膜电图( E R G ) 进行视网膜分析， 最后处死白兔测定视 网膜中丙二醛( MD A )的含量和总超氧化物岐化酶( T - S O D ) 的活力。A果E R G测定结果发现， 对照组 B波的潜伏 期时间延长而振幅降低， 模型组白兔 E R G的变化趋势正好相反。同时模型组视网膜中的 MD A含量要低于对照组 ( P 0 . 0 1 ) ， 而 S O D含量则高于对照组( P 0 . 0 1 ) . 4击服用乌饭树树叶及其提取物对眼睛视网膜具有明显的保 护作用。 关键词: 乌饭树; 提取物; 视网膜; 光损伤 中图分类号: R 7 7 4文献标识码: A文章编号: 1 6 7 1 - 8 2 5 9 ( 2 0 0 6 ) 0 3 - 0 2 8 4 - 0 4 T h e p r o t e c t i v e e f f e c t o f V a c c i n i u m B r a c t e a t u m a n d t h e e x t r a c t a g a i n s t l i g h ti n j u r y o f T h u n b l e a v e s r e t i n a Wa n g L i ， Z h a n g X u e t o n g 2 ， Y a o H u i y u a n ( 1 . S c h o o l o f F o o d S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y ， S o u t h e r n Y a n g t z e Un i v e r s i t y ， Wu x i 2 1 4 0 3 6 ; 2 . D e p a r t me n t o f O p h t h a l m o l o g y o f t h e Wu x i N o . 4 P e o p l e s Ho s p i t a l , Wu x i 2 1 4 0 3 6 ， C h i n a ) A B S T R A C T : O b j e c t iv e T o i n v e s t i g a t et h e p r o t e c t i v e Me t h o d s e f f e c t o f t h e e x t r a c t o f V a c c i n i u m B r a c t e a t u m T h u n b l e a v e s a g a i n s t l i g h t i n j u r y o f c o n t r o l g r o u p , m o d e l I g r o u p , r e t i n a .2 0 Ne wz e a l a n d m o d e l II g r o u p , a n d m o d e l m o d e l I g r o u p a t e a n d d r a n k f r e e l y b u t t o o k i n5 0 g / ( k g o l d VBT ll g r o u p d ) f r e s h r a b b i t s w e r e d i v i d e d i n t o 4 g r o u p s : t h e 。 T h e n o r m a l c o n t r o l g r o u p a t e a n d d r a n k VB T l e a v e s d a i l y f o r 4 w e e k s . mo d e l II g r o u p a t e a n d d r a n k f r e e l y , b u t t o o k i n 5 0 g / ( k g d )l e a v e s d a i l y f o r 4 w e e k s . b u t t o o k i n 5 0 m g / ( k g d ) e x t r a c t o f V B T l e a v e s ( r e s o l v e d i n w a t e r ) d a i l y f o r 4 w e e k s . m o d e l 11 1 g r o u p Al l r a b b i t s we r e s t r o n g l i g h t , me a n w h i l e , t h e r e t i n a s w e r e a n a l y z e d b y e l e c t r o r e t i n o g r a m ( E R G) e v e r y w e e k w e r e k i l l e d a n d t h e c o n t e n t o f MD A a n d S O D i n t h e r e t i n a w e r e d e t e c t e d . R e s u l t s I n l a t e n c y t i me o f t h e B w a v e i n c r e a s e d a n d t h e a m p l i t u d e o f t h e B w a v e s h o r t e n e d , w h i l e i n . F i n a l l y , a l l t h e c o n t r o l a t e f r e e l y , e x p o s e d t o t h e r a b b i t s g r o u p, t h e mo d e l I， II a n d t h e I II g r o u p s , t h e c h a n g e s o f B w a v e j u s t o p p o s i t e . t h a n t h a t i nt h e c o n t r o l g r o u p ( P 0 . 0 1 ) t h e c o n t r o l g r o u p ( P 0 . 0 1 ) b u t T h e c o n t e n t o f MDA i n t h e mo d e l I， II，a n d t h e c o n t e n t o f S OD i n t h e mo d e l I，II，a n d g r o u p s g r o u p s p r o t e c t wa s l o we r w a s h i g h e r 班Ill t h a n t h a t i n.Co n c l u s i o n T h e l e a v e s o f VB T a n d t h e e x t r a c t c a n t h e r e t i n a a g a i n s t l i g h t i n j u r y . KE Y WO R D S :V a c c i n i u m B r a c t e a t u m T h u n b ( V B T ) ; e x t r a c t ; r e t i n a ; l i g h tinj u r y 乌饭树是杜鹃花科的一种植物， 我国南北各地均 产， 很多中药类书籍中都记载其对人体具有保健作 用L I - 2 。国外对乌饭树同种属植物的果实进行研究发 现， 其对多种眼科疾病均有很好的治疗效果， 目前很 多国家都已经把乌饭树紫黑浆果中提取出的色素类 收稿 日期 作者简 介 ; 2 0 0 5 - 0 9 - 2 7修回日期: 2 0 0 5 - 1 2 - 1 5 : 王立( 1 9 7 8 - ) ， 男( 汉族) ， 工学博士， 副教授.研究方向: 谷 物功能性食品. E - m a il ; w 1 0 5 1 9 )1 6 3 . c o in 物质用于眼科医疗领域。意大利、 法国、 西班牙、 韩 国、 美国以及新西兰等国家已经将其应用于夜盲症、 毛细管脆弱、 脑血管障碍、 胃溃疡的治疗 3 -4 。本研究 采用强光刺激损伤白兔视网膜， 同时喂食乌饭树树叶 或其提取物， 利用视网膜电图技术( e l e c t r o r e t i n o - g r a m, E R G ) 对白兔视网膜进行研究， 然后对视网膜 进行丙二醛( MD A ) 和超氧化物岐化酶( S O D ) 含量分 析， 最后对其保护机理进行了初步的探讨。 3 期 王立， 张雪彤， 姚惠源.乌饭树树叶及其提取物对视网膜光损伤的保护作用 1 材料与方法 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 实验动物新西兰大白兔 2 0 只， 购自江南实 验动物场， 体重( 2 . 5 士0 . 5 ) k g o 1 . 1 . 2 药品与试剂 乌饭树树叶， 购自 于江苏漂阳; 乌饭树树叶提取物， 实验室自制; 美多丽眼液， 参天制 药株氏会社( 日) ; 倍诺喜眼液， 参天制药株氏会社 旧 ) ; 总蛋白含量测试盒， 购自于南京建成生物研究 所; MD A含量测定试剂盒， 购自于南京建成生物研 究所; S O D活力测定试剂盒， 购自于南京建成生物 研究所; P B S ( 磷酸盐缓冲液) : 8 0 0 m L蒸馏水中溶解 8 g 氯化钠， 0 . 2 g 氯化钾， 1 . 4 4 g 磷酸氢二钠和。 . 2 4 g 磷酸二氢钾， 用盐酸调节p H至7 . 4 ， 加水定容至1 L , 在1 . 0 3 4 X 1 0 5 P a 高压下杀菌2 0 m i n ， 保存于室温。 1 . 1 . 3 主要仪器全视野闪光刺激器， 重庆医用电 子仪器厂; 视觉电生理检查与诊断系统 V E T S - I I I B , 重庆医用电子仪器厂。 1 . 2 方法2 0 只新西兰大白兔适应性喂养 1 周， 自 由摄取饲料， 自由饮水。然后用 1 0 0 0 W 强光照射， 刺激眼睛视网膜产生光损伤， 同时按照不同的组别进 行喂养食物， 每周进行 E R G的测量。具体分组如 下: 正常对照组: 自由摄取饲料， 自由饮水。模型对照 工 组: 自由摄取饲料， 自由饮水， 另外每天喂乌饭树新 鲜树叶， 按照5 0 g / ( k g d ) 剂量喂养， 连续 4 周。模 型对照n组: 自由摄取资料， 自由饮水， 另外每天喂乌 饭树陈树叶， 按照5 0 g / ( k g d ) 剂量喂养， 连续4 周。 模型对照m组: 自由摄取饲料， 另外每天喂乌饭树树 叶提取物( 溶解于饮水中) ， 按照5 0 m g / ( k g “ d ) 剂量 喂养， 连续 4 周。 1 . 2 . 1 E R G的刚量记录电极为角膜式接触电极， 参考电极和接地电极为普通电极。预先用剪刀剪去 白兔额部毛， 再用剃须刀刮干净。进行 E R G测量操 作前先用美多丽眼液对 白兔进行扩 瞳， 暗适应 3 0 m i n ， 眼角膜用倍诺喜进行麻醉。分别利用蓝光、 白光和红光对白兔视网膜进行刺激( 在白光刺激后明 适应3 0 m i n 再进行红光刺激测定) 。记录电极置于兔 子眼角膜表面， 参考电极置于靠近兔子额部， 用胶布 固定， 接地电极置于兔子耳朵上， 用胶布固定。测量 时， 兔子头部置于刺激球中央， 对单只眼睛视网膜进 行刺激。刺激条件: 高频 8 5 H z ， 低频0 . 1 H z ， 刺激光 亮度1 . 5 L o g ， 单次刺激。记录仪进行同步记录， 经过 仪器分析得到 B波的延滞时间( 以m s 为单位) 和振 幅( 以 I V为单位) ， 进行分析。 1 . 2 . 2 视网膜匀装的制备于实验 3 0 d 后将白兔 处死， 摘除眼球， 仔细去除眼内容物， 剥离视网膜， 置 于冰冷的玻璃匀浆器中， 冰浴下碾磨 5 m i n ， 制成匀 浆， 1 0 0 0 0 r / m i n 高速离心1 5 m i n ， 取上清液待用。 1 . 2 . 3总蛋白含量的测定蛋白质上的氨基 ( -N H , + ) 与考马斯亮兰染料上的阴离子结合， 能够 使溶液从棕红色变为蓝色， 通过测定吸光度值可以计 算出其中的 蛋白 质含量。 取组织匀浆5 0 u L ， 按照试 剂盒配制试剂， 并且进行测量。 1 . 2 . 4 MD A的侧定过氧化脂质的分解产物一 M D A与硫代巴比妥酸作用后形成红色物质， 利用分 光光度计测定吸光度， 可以计算出其中的丙二醛含 量。按照试剂盒配制试剂， 并且进行测量。 1 . 2 . 5 总超氧化物咬化酶( T - S O D ) 活力的测定 通过黄嚓吟以及黄嚓吟氧化酶反应体系产生超氧阴 离子自由基 O Z “ 1 氧化经胺形成亚硝酸盐， 在显色 剂的作用下呈现紫红色， 当样品体系中含有 S O D时， 则对 O Z 有专一性的抑制作用， 使形成的亚硝酸 盐减少， 比色时测定管的吸光度值要低于对照管的吸 光度， 通过计算可以得出视网膜中 S O D的活力。按 照试剂盒配制试剂并且测量。 2 结果 2 . 1 E R G测定结果E R G分别由 Pi PH和 P II 三个导程构成， B波是 E R G中属予其中的 PII导程 部分， 紧随A波后的一个正相波。它起源于光感受 器与神经节细胞之间的神经通路中的一种光兴奋活 动， 可能来自双极细胞或 Mo l l e r 细胞。它反映视网 膜内核层区域细胞的电活动， 并且反应非常迅速， 受 外界因素的影响较为明显， 如缺氧、 温度变化以及不 同的光刺激等， 因此 B波作为评价视网膜功能可靠 而灵敏的客观指标之一， 近年来越来越受到重视。在 本研究中测定白兔在受强光刺激后暗视 E R G、 暗反 应最大波和明视 E R G中B波的变化。在实验中采 用三种光( 蓝光、 白光、 红光) 对白兔视网膜进行刺激， 其中蓝光测定值代表的是暗视 E R G， 白光测定值代 表的是暗反应最大波， 而红光测定值代表的是明视 E R G。具体结果见表 1 一3 , 2 . 2 白兔眼睛视网膜抗氧化指标的检测结果实验 3 0 d 后， 将白兔的视网膜取出， 进行适当的处理， 测定 其中的MD A和 T - S O D含量， 前者可以反映视网膜 脂质过氧化的程度， 而后者则反映其中抗氧化酶体系 活力的变化。具体结果见表 4 0 2 8 6 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 )第 2 7 卷 表 1 白兔暗适应 E R G -B波的潜伏期及振幅的变化 T a b l e 1 T h e c h a n g e o f t h e l a t e n c y t i m e a n d t h e a m p l i t u d e o f t h e B w a v e o f t h e d a r k a d a p t a t i o n E R G o f t h e r a b b i t s ( x 士s ) G r o u p L a t e n c y t i me ( ms ) Co n t r o l Mo d e l j Mo d e l II Mo d e l II I A m p l i t u d e ( p V ) Co n t r o l Mo d e l I Mo d e l II Mo d e l I I I B e g i n n i n g 1 we e k2 we e k3 we e k4 we e k 3 9 . 5 士0 . 5 4 4 . 0 士4 . 0 4 4 . 5 士3 . 0 4 2 . 5 士3 . 0 4 0 . 0 士0 . 5 4 2 . 5 士3 . 0 “ 4 2 . 0 士 1 . 0 . 番 3 9 . 5 士 2 . 0 “ 4 0 . 5 士1 . 0 4 0 . 0 士1 . 5 “ . 4 0 . 5 士1 . 0 “ . 3 8 . 5 士1 . 5 4 2 . 0 士1 . 5 3 8 . 0 士0 . 5 “ 3 8 . 0 士2 . 0 “ 3 7 . 0 士2 . 0 “ . 4 3 . 5 士1 . 0 3 6 . 0 士 1 . 0 二 3 6 . 5 士 1 . 5 “ 3 5 . 5 士 1 . 0 1 6 4 . 0 士2 1 . 4 1 5 3 . 0 士 1 7 . 9 1 2 3 . 1 土1 8 . 4 1 4 8 . 3 士4 5 . 1 1 6 5 . 0 士2 0 . 7 1 6 2 . 7 士3 5 . 8 1 4 5 . 9 士2 8 . 4 1 6 0 . 4 士4 8 . 3 1 5 7 . 6 士2 6 . 1 1 7 7 . 6 士4 5 . 3 1 6 8 . 4 士2 1 . 2 1 8 0 . 5 士4 7 . 9 “ “ 1 4 9 . 4 士3 3 . 3 1 9 6 . 1 士2 9 . 2 “ 1 9 6 . 1 士4 2 . 5 2 0 0 . 8 士3 9 . 5 . 1 2 8 . 9 士9 . 4 2 1 4 . 5 士3 6 . 4 2 1 1 . 6 士3 2 . 3 2 1 8 . 8 士3 7 . 6 . 苦 Mo d e l I : f e d w i t h f r e s h l e a v e s ; Mo d e l I ( : f e d w i t h l e a v e s s t o r e d f o r o n e y e a r ; Mo d e l I d: f e d w i t h t h e e x t r a c t s f r o m l e a v e s “ P GO . 0 5 ，肠 “ P GO . 0 1 v s . c o n t r o l g r o u p 表2 白兔暗反应最大波B波的潜伏期及振幅的变化 T a b l e 2 T h e c h a n g e o f t h e l a t e n c y t i m e a n d t h e a m p l i t u d e o f t h e B w a v e o f t h e s c o t o p i c t h r e s h o l d r e s p o n s e o f t h e r a b b i t s ( X 士s ) G r o u p L a t e n c y t i me ( ms ) C o n t r o l Mo d e l 1 Mo d e l II Mo d e l II I A m p l i t u d e ( IN) C o n t r o l Mo d e l 1 Mo d e l I I Mo d e l I I I B e g i n n i n g l we e k2 we e k3 we e k4 we e k 4 0 . 0 士0 . 5 4 5 . 0 士5 . 0 4 3 . 5 士4 . 0 4 1 . 0 士3 . 5 3 8 . 0 士2 . 0 4 0 . 5 士4 . 0 4 1 . 5 士4 . 0 3 8 . 5 士 1 . 0 3 8 . 5 士2 . 0 3 8 . 0 士2 . 5 3 8 . 5 士1 . 0 “ 3 8 . 0 士0 . 5 4 0 . 0 士2 . 5 3 6 . 5 士1 . 0 3 6 . 5 士1 . 0 3 6 . 5 士 1 . 0 4 2 . 5 士3 . 0 3 5 . 0 士3 . 0 “ . 3 4 . 5 士2 . 5 “ 3 4 . 5 士 1 . 0 “ . 1 4 7 . 0 士6 . 8 1 5 1 . 9 士2 7 . 9 1 3 0 . 3 士1 8 . 7 1 4 0 . 4 士3 1 . 3 1 7 6 . 7 士2 3 . 6 1 6 8 . 6 士2 3 . 9 1 5 0 . 8 士1 8 . 5 “ 1 6 8 . 4 士3 0 . 6 1 6 8 . 2 0 1 . 1 7 4 . 1 8 2 . 3 士1 5 . 8 5 士3 1 . 6 . 3 士2 4 . 2 “ “ 0 士3 8 . 8 1 5 5 . 9 士2 8 . 4 2 1 3 . 1 士3 5 . 8 1 9 5 . 5 士3 3 . 0 . 1 9 3 . 4 士4 9 . 7 “ 1 5 0 . 8 士2 5 . 5 2 4 3 . 4 士2 7 . 6 二 2 0 6 . 5 士4 0 . 6 “ 2 1 2 . 4 士4 5 . 0 “ Mo d e l I : f e d w i t h f r e s h l e a v e s; Mo d e l II : f e d w i t h l e a v e s s t o r e d f o r o n e y e a r ; Mo d e l I II , f e d w i t h t h e e x t r a c t s f r o m l e a v e s . P 0 . 0 5 , “ P 0 . 0 1v s . c o n t r o g r o u p 表 3 白兔明视 E R G -B波的潜伏期及振幅的变化 T a b l e 3 T h e c h a n g e o f t h e l a t e n c y t i m e a n d t h e a m p l i t u d e o f t h e B w a v e o f t h e p h o t o p i c E R G o f t h e r a b b i t s ( X士s ) Gr o u p L a t e n c y t i me ( ms ) Co n t r o l Mo d e l I Mo d e l II Mo d e l I I A m p l i t u d e ( p t V ) Co n t r o l Mo d e l I Mo d e l II Mo d e l I I I B e g i n n i n g I we e k2 we e k3 we e k4 we e k 4 2 . 5 士3 . 0 5 3 . 5 士4 . 0 5 2 . 0 士2 . 5 5 0 . 5 士 5 . 0 3 8 . 5 士2 . o 4 9 . 0 士4 . 5 . 哥 4 7 . 5 土4 . 0 * 4 5 . 5 士3 . 0 4 5 . 5 士4 . 0 4 6 . 0 士5 . 5 * ， 4 5 . 5 士4 . 0 “ 4 4 . 0 士2 . 5 * 4 9 . 5 士1 . 0 4 2 . 5 士4 . 0 . 4 1 . 5 士4 . 5 “ * 4 2 . 5 士3 . 0 * . 5 1 . 5 士o . 5 3 8 . 5 士2 . 5 * “ 4 0 . 0 士3 . 5 “ 4 0 . 5 士6 . 0 * * 1 8 8 . 6 士4 6 . 9 1 6 4 . 7 士1 3 . 1 1 3 9 . 4 士1 3 . 0 1 3 9 . 7 士5 5 . 3 2 1 8 . 5 士2 5 . 0 1 7 9 . 6 士8 . 2 * 1 6 2 . 1 士2 8 . 3 1 6 7 . 0 士1 7 . 2 1 7 6 . 8 士8 . 9 1 9 8 . 3 士2 4 . 0 * * 1 8 5 . 1 士2 4 . 1 . 1 8 9 . 2 士1 4 . 4 . 1 6 1 . 0 士9 . 9 2 1 5 . 9 士2 2 . 3 * * 2 0 2 . 7 士3 2 . 8 * * 2 1 2 . 2 士3 7 . 0 1 4 4 . 9 士2 2 2 3 8 . 6 士3 5 . 6 * * 2 2 7 . 6 士4 9 . 8 * * 2 2 1 . 8 士3 0 . 2 * . Mo d e l I: f e d w i t h f r e s h l e a v e s ; Mo d e l j ; f e d w i t h l e a v e s s t o r e d f o r o n e y e a r ; Mo d e l U 1 : f e d w i t h t h e e x t r a c t s f r o m l e a v e s ， P O . 0 5 ， * P O . 0 1 v s . c o n t r o l g r o u p 3 期 王立， 张雪彤， 姚惠源. 乌饭树树叶及其提取物对视网膜光损伤的保护作用 表 4 Ta b l e 不同实验组别白兔眼睛视网膜抗权化酶体系的检测结果 4 Th e c o n t e n t s o f t h e MDA a n d S OD i n d i f f e r e n t g r o u p s t h e r e t i n a o f ( x士s ) Gr o u p Co n t r o l Mo d e l I Mo d e l II Mo d e l I II MD A ( n m o l / m g P r o t e i n ) T - S O D ( N U / m g P r o t e i n ) 5 . 0 6 士 1 . 3 5 1 . 2 2 士0 . 6 1 “ “ 1 . 3 8 士0 . 4 4 二 1 . 3 1 士0 . 5 2 二 4 . 5 5 士0 . 3 2 8 . 3 7 士1 . 2 2 7 . 8 1 士0 . 4 1 “ 8 . 0 9 士0 . 3 3 . Mo d e l I: f e d w i t h f r e s h l e a v e s ; Mo d e l II: f e d w i t h l e a v e s s t o r e d f o r o n e y e a r ; Mo d e l fl : f e d w i t h t h e e x t r a c t s f r o m l e a v e s . P 0 . 0 5 ,“ . P 0 . 0 1 v s . c o n t r o l g r o u p 3 讨论 从表 1 -3中可以看出， 随着实验时间的延长， 对 照组 B波的潜伏期逐渐延长， 而模型组( I一M) 则 都在一定程度上有所降低， 而 B波振幅的变化趋势 正好相反。 由于视杆细胞对蓝光敏感， 因此暗视蓝光 E R G 主要反映的是眼睛视网膜中视杆细胞的变化。从表 1 中的变化趋势可以看出， 乌饭树树叶和其提取物对 视杆细胞具有明显的改善作用。 视锥细胞对红光敏感， 所以明视 E R G主要反映 的是眼睛视网膜中视锥细胞的变化。从表 2中的变 化趋势可以看出， 乌饭树树叶和其提取物对视锥细胞 同样具有明显的改善作用。 暗反应最大波是视网膜明视系统和暗视系统的 混合反映， 其中的 B波是视杆细胞兴奋后产生的电 位变化， 可能起源于 Mu l l e r 细胞或双极细胞。其反 映视网膜内核层区域细胞的电活动， 取决于视网膜内 信号传递过程的完整性1 5 1 。从表3 可以看出， 乌饭树 树叶和其提取物对于视网膜的视觉系统有很强的维 护作用。 从表 1 -3 还可以看出新鲜树叶和陈树叶对于视 网膜的保护作用基本一致， 说明在新鲜树叶储藏期间 没有功能性物质的损失， 或者是损失很少， 这样也就 可以为原料的储藏提供了一些依据。 MD A是脂质过氧化的产物， 通常被用来衡量脂 质过氧化的程度。视网膜的视细胞外节主要是盘膜 结构， 内含丰富的长链多不饱和脂肪酸， 在受到光的 作用后， 易从位于两个双键之间的亚甲基上脱去氢原 子， 形成质子自由基， 然后发生双键和未配对电子位 置的转移， 形成较稳定的共扼双键， 再与氧反应， 形成 质子自由基和质子过氧化物。这些自由基再攻击其 他不饱和脂肪酸， 引起连锁反应， 从而使盘膜以及线 粒体膜和内质网膜的脂类受到损害。 环境光的损伤被认为是一种光化学损伤。感光 器外段富含长链不饱和脂肪酸， 内段富含线粒体， 对 氧的需求大， 当光子被视紫红质吸收后可产生一系列 的自由基， 它们与感光器和视网膜色素上皮( R P E ) 中 的不饱和脂肪酸发生反应， 发生脂质过氧化反应， 引 起眼睛组织破坏。从表4中可以看出， 对照组的白兔 眼睛视网膜中 MD A的量大大超过正常白兔眼睛视 网膜中的量E 6 1 ， 说明实验中的强光刺激对白兔眼睛有 了很严重的损伤; 而模型组工 一班的白兔视网膜中的 MD A含量接近于正常白兔眼睛视网膜中的量， 说明 白兔食用乌饭树树叶或树叶提取物后， 视网膜内部的 脂质过氧化得到了有效的抑制。其主要原因应该是 由于乌饭树树叶含有丰富的黄酮类物质 4 ， 黄酮类物 质具有很强的清除自由基能力， 而视网膜光化学损伤 的主要发病机制是脂质体过氧化川， 所以在实验中服 用乌饭树树叶或其提取物的白兔视网膜受到很好的 保护。 视细胞中含有大量的线粒体， 其中的呼吸链在进 行电子传递时可产生自由基， 如辅酶 Q是醒类化合 物， 通过氧化还原可生成半醒自由基。视细胞中的视 黄醛或视黄醇受可见光照时也可产生自由基。许多 研究表明， 视网膜的光损伤是光照激发产生自由基， 引起组织发生过氧化的结果。在正常情况下， 机体内 自由基的产生与清除过程处于动态平衡， 在遭受各种 外界因素的影响时， 平衡被破坏， 机体受损。视网膜 本身具有一定的抗氧化能力， 在一定程度上可以预防 光化学损伤。它各层均存在清除自由基的天然保护 系统， 包括抗过氧化物酶和自 然抗氧化剂 8 1 ， 它们可 以通过各种化学反应而终止自由基链反应， 达到清除 有害自由基， 防止组织破坏的目的。 . 从表4 可以看 出， 对照组白兔眼睛视网膜中S O D要远低于其他 3 个模型组， 说明乌饭树树叶以及其提取物能够有效地 保护视网膜中的 S O D， 使其能够保持活性。视网膜 抗氧化能力下降时， 容易受到光的损伤， 反之在受到 光的刺激损伤后， 视网膜中的抗氧化酶体系必定发生 变化。从表 4 可以看出， 对照组的白兔眼睛视网膜中 S O D的量大大低于正常白兔眼睛视网膜中的量 6 1 有实验表明， 光照可以使细胞内S O D水平下降1 9 1 ， 而 S O D是生物体内自由基清除剂之一， 可以促进超氧 化物阴离子自由基的岐化反应。在本研究中可能的 机理是乌饭树树叶及其提取物能够将超氧阴离子自 由基 0 2 - 转变为 0 , 和 H Z O， 清除其毒性作用， 减 轻和防止过氧化， 从而达到保护视网膜的作用。同 时， 从表4 可以得出结论， 新鲜树叶和陈树叶可以达 到基本一致的效果。 ( 下转第 3 0 3页) 2 期 赵利娜， 陶 佳， 赵运胜， 等. 分析谷胧甘肚- S - 转硫酶的产物抑制反应过程测定还原型谷胧甘肤 3 0 3 1 9 8 3 ，5 2 : 7 1 1 - 7 6 0 . 2 A n d e r s o n ME . D e t e r m i n a t i o n o f g l u t a t h i o n e a n d g l u t a t h i o n e d i - s u l f i d e i n b i o l o g i c a l s a m p l e s J . Me t h o d s E n z y m o l , 1 9 8 5 , 1 1 3 : 5 4 8 - 5 5 5 . 3 N e w t o n G L , D o r i a n R , F a h e y R C . A n a l y s i s o f b i o l o g i c a l t h i - o l s : d e r i v a t i z a t i o n w i t h m o n o b r o m o b i m a n e a n d s e p a r a t i o n b y r e v e r s e - p h a s e h i g h - p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y J An a l B i o c h e m, 1 9 8 1 ，1 1 4 ( 2 ) : 3 8 3 - 3 8 7 . 4 S a x e n a M, S i n g h a l S S , A w a s t h i Y C . A s p e c i f i c , s e n s i t i v e , a n d r a p i d m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f g l u t a t h i o n e a n d i t s a p p l i c a t i o n i n o c u la r t i s s u e s J . E x p E y e R e s , 1 9 9 2 , 5 5 ( 3 ) : 4 6 1 - 4 6 8 . 5 L i a o F , L i u WL , Z h o u Q X, e t a l . A s s a y o f s e r u m a r y l e s t e r a s e a c t i v i t y b y f i t t i n g t o t h e r e a c t i o n c u r v e w i t h a n i n t e g r a t e d r a t e e q u a t i o n仁 J . C l i n C h i m A c t a , 2 0 0 1 ， 3 1 4 ( 1 - 2 ) : 6 7 - 7 6 . 6 L i a o F , T i a n K C , Y a n g X, e t a l . K i n e t i c s u b s t r a t e q u a n t i f i c a - t i o n b y f i t t i n g t h e e n z y m e r e a c t i o n c u r v e t o t h e i n t e g r a t e d Mi c h a e l i s - M e n t e n e q u a t i o n J . A n a l B i o a n a l C h e m, 2 0 0 3 , 3 7 5 ( 6 ) :7 5 6 - 7 6 2 . 7 L i a o F , L i J C , K a n g G F , e t a l . M e a s u r e m e n t o f m o u s e l i v e r g l u t a t h i o n e S - t r a n s f e r a s e a c t i v i t y b y t h e i n t e g r a t e d m e t h o d J . J Me d Co l l P L A, 2 0 0 3 , 1 8 ( 5 ) : 2 9 5 - 3 0 0 . 8 L i a o F , Z h u X Y, Wa n g Y M, e t a l . T h e c o m p a r i s o n o f t h e e s t i - m a t i o n o f e n z y m e k i n e t i c p a r a m e t e r s b y f i t t i n g r e a c t i o n c u r v e t o t h e i n t e g r a t e d Mi c h a e l i s - Me n t e n r a t e e q u a t i o n s o f d i f f e r e n t p r e - d i c t o r v a r i a b l e s J . J B i o c h e m B i o p h y s M e t h o d s , 2 0 0 5 ， 6 2 ( 1 ) : 1 3 - 2 4. 9 廖飞. 通过预测本底进行酶法分析测定体液尿酸含量的方法 P . Z L 0 3 1 3 5 6 4 9 . 4 , 2 0 0 5 - 0 8 - 3 1 . 1 0 S c h r a m m V L , Mc C l u s k e y R, E m i g F A, e t a l . K i n e t i c s t u d i e s a n d a c t i v e s i t e - b i n d i n g p r o p e r t i e s o f g l u t a t h i o n e - S - t r a n s f e r a s e u s i n g s p i n - l a b e l e d g l u t a t h i o n e , a p r o d u c t a n a l o g u e J . J B i o l Ch e m, 1 9 8 4 ，2 5 9 ( 2 ) : 7 1 4 - 7 2 2 . 1 1 H a b i g WH , P a b s t M J , J a k o b y W B . G l u t a t h i o n e S - t r a n s f e r a s e s . T h e f i r s t e n z y m a t i c s t e p i n m e r c a p t u r i c a c i d f o r m a t i o n J . J B i o l Ch e m, 1 9 7 4 , 2 4 9 ( 2 2 ) : 7 1 3 0 - 7 1 3 9 . 1 2 P a b s t M J , H a b i g WH, J a k o b y WB . G l u t a t h i o n e - S - t r a n s f e r a s e A. A n o v e l k i n e t i c m e c h a n i s m i n w h i c h t h e ma j o r r e a c t i o n p a t h - w a y d e p e n d s o n s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n J . J B i o l C h e m , 1 9 7 4 , 2 4 9 ( 2 2 ) : 7 1 4 0 - 7 1 4 7 . 1 3 邹国林， 朱汝蟠. 酶学 M . 武汉: 武汉大学出版社， 1 9 9 7 : 1 5 3 . 1 4 L e e S H, L e e S M. S u p p r e s s i o n o f h e p a t i c c y t o c h r o m e P 4 5 0 - m e - d i a t e d d r u g m e t a b o l i s m d u r i n g t h e l a t e s t a g e o f s e p s i s i n r a t s 仁 J . S h o c k , 2 0 0 5 ， 2 3 ( 2 ) : 1 4 4 - 1 4 9 . ( 编辑邱芬) ( 上接第 2 8 3 页) 参考文献: 1 L a n e n s t e i n T C , S c h n e e m a n n H, V o g t F M, e t a l . O p t i m i z a t i o n o f o r a l c o n t r a s t a g e n t f o r M R i m a g i n g o f t h e s m a l l b o w e l J . R a d i o l o g y , 2 0 0 3 , 2 2 8 ( 1 ) : 2 7 9 - 2 8 3 . 仁 2 B