腹泻病毒联合检测意义.ppt

腹泻病毒联合检测的临床意义,腹泻病概述和腹泻病毒检测意义 荧光免疫法及优势,Part1 腹泻病概述和腹泻病毒检测意义,腹泻病概述 腹泻病发病趋势 病毒等其他感染性腹泻现状 病毒性腹泻诊断临床意义,腹泻病概述,腹泻病为多种病原、多种因素引起的以大便次数增多和大便性状改变为特点的一组疾病，是儿童患病和死亡的主要原因，也是营养不良的重要原因1。 我国每年有8.36亿人次患腹泻，其中5岁以下小儿占3亿次。2005年中国小儿因急性腹泻死亡人数为160万1。,1儿童腹泻病诊治专家共识 中华医学会儿科分会消化学组、中华医学会儿科分会感染学组、中华儿科杂志 通讯作者：陈洁浙江大学医学院儿童医院（杭州310003）,腹泻病发病趋势,2全国法定传染病（腹泻类）发病数据（数据来源：卫计委网站）,病毒等其他感染性腹泻现状,病毒等其他感染性腹泻现状,2006年中国共报告其他感染性腹泻病例741809例，报告发病率为56.73/0万。既往调查农村地区人群腹泻发病率为1220/10万-3360/10万，就诊率为6.3%-50%，日本，2005年3046家儿科定点监测的感染性腹泻病例就达941572例，分析：中国其他感染性腹泻的报告病例数与实际发病水平相差甚大4。,4中国感染性腹泻监测策略的思考与建议 作者单位： 中国疾病预防控制中心疾控处应急办肠道传染病防制办 公室 ，作者： 张静， 副研究员， 主要从事传 染病监测与控制工作,病毒等其他感染性腹泻现状,结果2011年共报告其他感染性腹泻患者836591例，发病率为62.39/10万。病例发病年龄主要集中在0-5岁组，发病率为447.0610万（436098例），占总数的52.3（436098836591），报告病例发病有2个高峰，夏季（第23-35周），占34.33（287231/836591）；冬季（第43-52周），占23.54（196939836591）。 报告的30起疫情中，5起有明确病原学诊断结果，其中，4起为诺如病毒引起。2011年其他感染性腹泻确诊病例占报告病例数的716（59929836591），其中，病毒感染56687例，细菌感染3242例,52011年中国其他感染性腹泻监测现状分析中华预防医学杂志 CAS CSCD 2013年第4期 328-332页,共5页,病毒性腹泻诊断临床意义,目前最常见的腹泻病毒有4种，其中以轮状病毒、肠道腺病毒最为常见。病毒性腹泻中40%-60%由轮状病毒感染引起，其次是肠道腺病毒、诺如病毒、星状病毒感染6。,6病毒性腹泻的研究进展雷炳钧，华西医科大学 ；临床内科杂志1998年第4期；,病毒性腹泻诊断临床意义,腹泻病临床症状相仿，病毒性腹泻的治疗方案与细菌等引起的腹泻有很大不同。有报道发现双重病毒或多重病毒感染的腹泻，其症状更严重，病情进展快，导致的死亡率更高。 由于肠道传染病的临床表现和常用的辅助检查缺乏明显的特异性，因此存在着疾病早期病原体诊断不明确的危险因素，从而存在着疾病早期滥用抗生素、生病期延长而增加患者痛苦和经济负担的客观因素。 因此，针对轮状病毒、肠道腺病毒研制快速准确的诊断技术，对指导临床对症治疗和避免滥用抗生素有重要意义，特别是对婴幼儿腹泻诊断上更有意义。,6病毒性腹泻的研究进展雷炳钧，华西医科大学 ；临床内科杂志1998年第4期；,病毒性腹泻诊断临床意义,1、为疾病诊断和鉴别诊断、临床疗效观察和预后提供依据 符合循证医学原则，提升医疗诊治科学性。症状学诊治转变为病因学诊治 客观上降低抗生素滥用、缩短不必要的病程 减少不必要的病患痛苦、降低不必要的经济负担 不同的病因，不同的自然病史，不同的临床相，不同的预后转归判断,病毒性腹泻诊断临床意义,轮状病毒 最常见的致腹泻病毒，常温稳定，在环境表面存活数日，粪便中可存活数月，55摄氏度30分钟灭活 粪口途径传染， 秋冬季高发， 起病急，潜伏期12天，症状期38天， 发热呕吐腹痛，喷射性水样腹泻，易导致脱水 病程自限，多数预后良好，婴幼儿较重，少数脱水死亡 首次感染可减少再次感染几率，并减轻再次感染的严重性，各型无交叉免疫，可多次感染,病毒性腹泻诊断临床意义,轮状病毒 轮状病毒（Rotavirus，简称RV）是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科。它是婴儿与幼儿腹泻的单一主因，几乎世界上每个大约五岁的小孩都曾感染过轮状病毒至少一次。然而，每一次感染后人体免疫力会逐渐增强，后续感染的影响就会减轻，因而成人就很少受到其影响。轮状病毒总共有七个种，以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G。其中，A种是最为常见的一种，而人类轮状病毒感染超过90%的案例也都是该种造成的。,病毒性腹泻诊断临床意义,轮状病毒 轮状病毒是借由粪口途径传染的。它会感染与小肠连结的肠黏膜细胞（enterocyte）并且产生肠毒素（enterotoxin），肠毒素会引起肠胃炎，导致严重的腹泻，有时候甚至会因为脱水而导致死亡。虽然轮状病毒于1973年就被由澳洲的露丝毕夏普（Ruth Bishop）所发现，而且造成婴儿与幼儿总计超过50%以上因为严重腹泻而住院治疗的案例，但是在公共卫生社群中它仍然没有被广泛地重视，特别是在发展中国家更是如此。除了对人类健康的影响之外，轮状病毒也会感染动物，是家畜的病原体之一。,病毒性腹泻诊断临床意义,肠道腺病毒 对温度敏感，对含氯剂和脂溶剂不敏感，抗紫外线，认真洗手 粪口途径传染 终年可发病，冬春多发， 病程长，多超过一周， 腹泻呕吐，可多器官受累，心肌炎，CNS 自限，预后良好，腺病毒是肠套叠的重要原因，40%的肠套叠与腺病毒有关 感染后可获得持久免疫力，很少二次感染,病毒性腹泻诊断临床意义,肠道腺病毒 腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为7090 nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为79 nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含35 000 bp，两端各有长约100 bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5端同相对分子质量为55X103Da的蛋白质分子共价结合，可以出现双链DNA的环状结构。,病毒性腹泻诊断临床意义,肠道腺病毒 腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病相关，但一种血清型可引起不同的临床疾患；相反，不同血清型也可引起同一种疾患。,病毒性腹泻诊断临床意义,肠道腺病毒 胃肠炎 许多腺病毒在肠道细胞中复制，随粪便排出，但大多血清型与胃肠道疾病无关。而40型和41型腺病毒可引起婴幼儿与年少（4岁以下）儿童的胃肠炎，致腹痛、腹泻。C组腺病毒能引起某些婴幼儿肠套叠。,病毒性腹泻诊断临床意义,肠道腺病毒 引起其他疾患 腺病毒11、12型能引起儿童急性出血性膀胱炎，尿中出现病毒。37型可引起女性宫颈炎和男性尿道炎，常由性传播感染。在免疫功能低下者可引起偶发或严重的病毒感染，尤其在器官移植病人中发生严重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多种血清型腺病毒，并能出现抗原性介于中间的杂合型毒株，而且常为致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的E1A蛋白可反式激活HIV的转录，加速HIV的复制。临床发现37%的艾滋病患者病毒性腹泻是由腺病毒所致。,病毒性腹泻诊断临床意义,肠道腺病毒 腺病毒感染后可获得对同型的持久免疫力 与绝大多数呼吸道感染的病原相比，机体对腺病毒的再感染能产生有效的免疫。起保护作用的是体内产生的循环中和抗体。正常的健康成人一般也具有多型的抗体。约40%60%的615岁的人具有1、2和5型中和抗体，但3、4和7型抗体很少。母亲的抗体能保护婴儿免除严重的腺病毒呼吸道感染。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 诺如病毒，又称诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。它是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 粪口途径传染，水源、食物污染易导致爆发流行 潜伏期12天，症状持续12天， 恶心呕吐腹部痉挛性腹泻，普遍感到病情严重，一日内多次剧烈呕吐 预后良好 抗体没有免疫作用，可反复感染,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 诺如病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻患者粪便中分离的病原。2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒，它与在日本发现的札幌样病毒，合称为人类杯状病毒。 诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻暴发中，60-90%是由诺如病毒引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右，血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 “诺如病毒”感染性腹泻属于自限性疾病，没有疫苗和特效药物，公众搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键，要养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开，避免交叉污染等健康生活习惯。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 诺如病毒遗传高度变异，在同一时期和同一社区内可能存在遗传特性不同的毒株流行。诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。 诺如病毒有许多共同特征：直径约为2635nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.361.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 诺如病毒基因组全长约7.7kb，包含3个开放阅读框（Open readding frames，ORFs）。ORF1编码非结构蛋白，包括RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）；ORF2和ORF3分别编码主要（VP1）和次要（VP2）衣壳蛋白。VP1蛋白结构上可分为S和P区两个相邻的区域，其中S区形成内壳，构成VP1的底座；P区形成拱样结构突出于内壳外。P区可进一步分为P1和P2两个亚区，后者位于VP1的最外层，高度变异，目前认为是免疫识别和受体结合的关键部位。ORF1/ORF2的重组及P2区的变异大大丰富了NV的遗传多样性。根据VP1序列的同源性，诺如病毒可分为GIGV五个基因群（Genogroup），其中引起人类感染的主要是GI和GII群，基因群可进一步分为不同的基因型（Genotype）。自19951996年诺如病毒首次导致世界性大流行以来，GII群中的第4基因型GII.4，一直在世界范围内的流行中占据主导地位，且几乎每隔两、三年，GII.4便会引发一次大范围流行，同时出现一种新的变异株。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 传播途径 诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。疾控专家称，病程为自限性，一般23天即可恢复。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 感染者粪便和呕吐物中可以发现诺如病毒，可以通过几种方式感染诺如病毒： 1、食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料； 因为病毒很小，而且摄入不到100个病毒就能使人发病。接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口。 2、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同的餐具也可引起传播。直接接触到感染者(如照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。 3、食物可以被污染的手、呕吐物或粪便污染的物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，但是一旦存在食品或水中，就能引起疾病。5 4、有些食品在送至饭店或商店前可能被污染。一些暴发是由于食用从污染的水中捕获的牡蛎。其它产品如色拉和冰冻水果也可能在来源地被污染。,病毒性腹泻诊断临床意义,诺如病毒 “诺如病毒”感染性腹泻是一种急性肠道传染病，由“诺如病毒”引发，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，症状多表现为呕吐、腹泻。 潜伏期多在2448h，最短12h，最长72h。感染者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻48次，粪便为稀水便或水样便，无黏液脓血。大便常规镜检WBC15，未见RBC。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。此外，也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。,病毒性腹泻诊断临床意义,病毒性腹泻诊断临床意义,病毒性腹泻诊断临床意义,星状病毒 人星状病毒于1975年从腹泻婴儿粪便中分离得到，球形，直径28-35nm，无包膜，电镜下表面结构呈星形，有56个角。核酸为单正链RNA，7.0kb，两端为非编码区，中间有三个重叠的开放读码框架,病毒性腹泻诊断临床意义,星状病毒 该病毒呈世界性分布，粪-口传播，是引起婴幼儿、老年人及免疫功能低下者急性病毒性肠炎的重要病原之一，其致病性已日益受到重视，人类感染腺病毒主要症状是严重腹泻，伴随发热、恶心、呕吐。本病为自愈性疾病，大部分患者在出现症状2-3天时，症状会逐渐减轻，但也有极少数症状加重，造成脱水。,病毒性腹泻诊断临床意义,预防 目前使用的疫苗仅有用于预防鸡星状病毒疾病，为灭活苗。人类星状病毒疾病的疫苗至今没有研制成功。但加强锻炼有利于抵抗该类疾病。,病毒性腹泻诊断临床意义,星状病毒 冬季多发 潜伏期34天，症状期35天 症状轻，少见脱水 与迁延性腹泻有关,病毒性腹泻诊断临床意义,为流行病学监测积累资料 在人群中的传播规律， 为临床医生提供相对可靠的病原体感染谱，为经验性诊断和治疗提供科学依据 制定针对性的公共卫生应对策略： 隔离传染源： 切断传播途径：环境卫生，个人卫生，认真洗手等等 保护易感人群：疫苗 明确病因学诊断可以消除不必要的恐慌：尤其是暴发疫情,病毒性腹泻诊断临床意义,为科学研究提供可靠数据 科研需要大量的基础数据的支持， 临床和流行病学资料的积累，促进研究工作的深入开展 为提高医疗单位、相关科室的科研水平提供工具、方法学保证,Part2 荧光免疫法及优势,临床常见的病原学检测方法,免疫学方法，因检测准确、速度快、应用面广得到临床门诊青睐！,临床常见的病原学检测方法,免疫学方法分很多种，包括：酶联免疫检测、胶体金法、 荧光免疫法。,临床常见的病原学检测方法,临床常见的病原学检测方法,酶联免疫检测方法 技术特点 技术特点是用酶来标记特定的抗体，在检测过程中，如果样本中有相应的病毒，带有酶标记的抗体就会与其结合，利用酶的催化作用，就可以检测出病毒。 优缺点 酶联免疫检测方法具有非常好的优点，灵敏度高，检测准确；缺点是操作相对复杂，一种试剂只能检测一种病毒，检测时间较长；尤其是对腹泻病毒的检测具有很大的缺点，因为，酶联免疫检测试剂一般一个检测板上有96个试剂位，而这96个试剂位不能独立使用，医院为了降低检测成本，一般都会积累样本到一定数量才进行项目检测，而对于腹泻病人来说，需