大孔树脂法纯化红花芸豆色素及初步鉴定.pdf

第 2 3卷 2 00 7正 第 6期 6月 农 业 工 程 学 报 Tr ans a c t i o ns o f t he CSAE Vo 1 2 3 No 6 J u n e 2 0 0 7 2 3 7 大孔树脂法纯化红花芸豆色素及初步鉴定 陈 阳 ，王军华 ，滕利荣。 ，苏彦斌 ，程瑛琨。 ( 1 山东 大学 威海分校海洋学院 ， 威海 2 6 4 2 0 9 ； 2 山东大学药学 院 ， 济南 2 5 0 0 1 2 ； 3 吉林大学生命科学学 院， 长春 1 3 0 0 1 2 ； 4 吉林 化工学院化学与制药工程学 院， 吉林 1 3 2 0 2 2 ) 摘要 ： 该文通过静态 吸附和解 吸实验 ， 选择 了合适 的大孔树脂 纯化红花芸豆色素 ， 优化 了吸附和解 吸条件 ， 并 应用纸色谱 法和紫外一可见光谱法对纯化后 的色素进行了初步 的分离鉴 定。结果表 明， HP D 4 0 0型大孔树 脂对 p H值为 1的红 花芸豆 色素酸提液吸附率为 8 8 3 8 ， p H值 2的 7 5 乙醇 可较好 的洗脱 色素 。 纯 化后 色素有 2个主要成分 ， 初步 鉴定 为天竺葵 定 一 3 一 葡萄糖苷和芍药定一 3 一 葡萄糖苷 。 关键词 ： 红花 芸豆；大孔树脂 ；结构鉴定 ； 花 色苷 中图分类号 ： Q9 4 6 8 3 +6 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1 0 0 2 6 8 1 9 ( 2 0 0 7 ) 6 - 0 2 3 7 0 5 陈阳 ， 王军 华， 滕利荣 ， 等 大孔树脂 法纯化红 花芸 豆色素及初步鉴定 J 农业 工程 学报 ， 2 0 0 7 ， 2 3 ( 6 ) ： 2 3 7 2 4 1 Ch e n Ya n g，W a n g J u n h u a，Te n g Li r o n g，e t a 1 I d e n t i f i c a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f p i g me n t s i n r e d s p e c k l e d k i d n e y b e a n( Ph a s e o l u s v u l g a r i s L )b y ma c r o p o r o u s r e s i n J Tr a n s a c t i o n s o f t h e C S AE，2 0 0 7 ， 2 3 ( 6 ) ： 2 3 7 2 4 1 ( i n C h i n e s e wi t h E n g l i s h a b s t r a c t ) 0 引 言 菜 豆 ( Ph a s e o l u s v u l g a r i s L ) 俗 称 芸 豆， 为 豆科 ( L e g u mi n o s a e ) 菜豆属( Ph a s e o l u s L ) 植物。各 品种菜 豆在种子的大小 、 形状 、 颜色等方面都存在差异 1 ， 其 中 种皮颜色在 品种间的差异尤为 明显 2 。 陈永久等通过光 谱分析推断菜豆色素为花色苷类化合物 3 。 郑明君等对 多种韩国产菜豆的花色苷成分进行 了鉴定 ， 结果显示不 同品种芸豆的花色苷成分及含量均有较大差异 4 。 花色 苷类物质对人体健康有益 ， 具有多种生物活性 ， 如抗氧 化及清除 自由基作用 、 抗突变活性、 抗癌活性 、 抗炎及抗 病毒效果 5 3 ， 具有广阔的应用前景 。中国的芸豆品种资 源较为丰富， 是芸豆的主要生产国， 2 0 0 3年芸豆成为 中 国的第 四大出 口农作物 ， 但我国芸豆产业产品加工技术 落后 ， 难以应对市场变化 ， 需要对芸豆进行深加工_ 6 J 。 红花芸豆是菜豆 的品种 之一 ， 种皮深红 色且有花 斑 ， 中国东北 ， 贵州等地 区广泛种植 。 从红花芸豆种皮 中 提取的色素具有 良好的光 、 热稳定性 。但 目前 国内尚无 对 中国各 品种芸豆 的花色苷成分进行 的纯化 、 鉴定研 究 。大孔树脂法被广泛用于天然产物的分离纯化 ， 具有 收稿 日期 ： 2 0 0 6 1 2 - 3 1 修订 日期 ： 2 0 0 7 0 4 2 5 基金项 目： 吉林大 学大 学生 创新基金 ( 2 0 0 6 1 1 0 2 ) 作者 简介 ： 陈 阳 ( 1 9 8 5 一) ， 男 ， 山东 青岛人 ， 主要从 事天然产 物应 用研究 。威海山东 大学威 海分校 海洋学 院， 2 6 4 2 0 9 通讯作者 ： 程瑛琨 ( 1 9 6 2 一) ， 女 ， 吉林长春人 ， 研究员 ， 主要从事天 然 产 物应 用 和生 物 制 药 研究 。长 春 吉 林 大 学 生命 科学 学 院 ， 1 3 0 0 1 2 。E ma i l ： c y k 5 5 5 s o h u c o m 吸 附容量 大、 吸 附速 度快 、 选 择性 好、 再生 简 便等 优 点 。 本文对红花芸豆色素在大孔树脂上的吸附和解吸 特性进行 了研究 ， 并对纯化的红花芸豆色素的组成和结 构进行 了初步鉴定 ， 结果可为芸豆色素的开发利用和工 业生产提供参考 。 1 材料和方法 1 1试 验材料 红花芸豆 ( P h a s e o l u s v u l g a r i s L ) ： 完全成熟 的红 花芸豆购 自长春某农 贸市场， 洗净剥皮 ， 种皮避光晾干 备用 。 1 2试 验仪器 Uv一 3 1 5 0型紫外一 可见一 近红外分光光谱仪( 日 本 岛 津 公司) ； B P 一 2 2 1 S型电子天平 ( 德 国赛 多利斯公 司) ； 5 8 1 0 R 型 大 容 量 冷 冻 离 心 机 ( 德 国 E p p e n d o r f f 公 司) ； Ui t r o s p e c 4 3 0 O p r o型 核 酸、 蛋 白 检 测 仪 ( 美 国 Ame r s h a n B i o s c i e n c e s公司) ； 8 2 8 3 A 型紫外检测仪 ( 上海沪 西分析仪器厂) 。 。 1 3试 验试 剂 大孔吸附树脂 ： AB 一 8型( 南开大学化工厂) 、 D 4 0 2 0 型 、 NKA一 9型 、 HP D1 0 0 A 型 、 HP D4 0 0型 ( 沧 州 宝 恩 化 工有 限公 司 ) 。 纸色谱展开剂 ： B AW( 正丁醇 ：冰醋酸 ： 蒸馏水 一 4：1：5 ， v v V) 、 B u HC 1 ( 正 丁 醇 ： 2 mo l L HC 1 ： 1： 1 ， v V) 、 3 HC 1 ( 浓盐酸 ： 蒸馏水 =3： 9 7 ， V V) 、 HAc HC 1 ( 冰 醋 酸 ：浓 盐 酸 ：蒸 馏水 一 1 5：3：8 2 ， v V V) ， 试剂均为分析纯 。 维普资讯 农业工程学报 1 4 试验 方法 1 4 1 红花芸豆色素的提取方法 精确称取红花芸豆种皮 1 g ， 于 p H值 2 5的稀盐 酸 中 5 0 水 浴 加 热 2 0 mi n ， 过 滤 ， 8 0 0 0 r mi n离 心 5 mi n ， 除去沉淀得色素提取液 。 1 4 2 红花芸豆色素吸收光谱 图及测定方法 用 UV一 3 1 5 0型紫外一 可见一 近红外分光光谱仪对红 花芸豆色素酸提液在波长 2 0 0 8 0 0 n m 范围， 以提取 剂为参 比， 测其吸收光谱 。以最大吸收波长处 的吸光度 值表示色素的浓度 。 1 4 3 大孔树脂纯化红花芸豆 色素 1 )树脂预处理 大孔树脂用去离子水洗净 ， 在烧杯内加入高于树脂 层 1 0 c m 的 9 5 乙醇浸 渍 2 4 h ， 装柱 ， 用 9 5 乙醇洗 至 流出液用水稀释不浑浊为止。 再用去离子水反复洗涤至 无乙醇气味， 备用 。 2 )红花芸豆色素在不 同大孔树脂上的吸附 准 确 称取 经 预 处 理 的 大孔 树 脂 AB 一 8 、 NKA一 9 、 D4 0 2 0 、 HP D1 0 0 A、 H P D 4 0 0各 1 0 g分别 置于 1 0 0 mL 锥形瓶 中， 再各 加入 5 0 mL p H值 2 5的色素酸提取 液 ， 1 0 0 r mi n振荡 2 4 h， 测定色素溶液吸光度 ， 计算 吸 附率 ， 吸附率按式( 1 ) 计算 D 一 ( 。一 A1 ) A。 1 0 0 ( 1 ) 式 中 D 吸附率 ， ；A 。 吸附前样品吸光度； A 吸附后样 品 吸光度 。 3 )AB 一 8 、 HP D4 0 0吸附动力 学研 究 根据上述 5 种大孔树脂静态吸附实验结果 ， 选择饱 和吸附能力较高 的 AB 一 8 、 HP D4 0 0树脂进行吸附动力 学研究 ， 研究方法见参考文献E 8 。 称取经预处理的大孔 树脂 AB 一 8 、 HP D4 0 0各 1 0 g ， 分别置于 1 0 0 mL锥形瓶 中， 加入 2 5 mL的色素酸提取液， 于摇床 1 0 0 r mi n振 荡吸附， 于一定时间测定色素吸光度 。 4 )p H值对 H P D4 0 0吸附的影响 称 取 经预 处 理 的 HP D4 0 0大孑 L 树 脂 5份， 每份 0 5 g ， 色素提取液分别 调 p H值至 1 0 、 1 5 、 2 0 、 2 5 、 3 0 ， 分别加入 2 5 mL至锥形瓶中， 于摇床 1 0 0 r mi n吸 附 2 4 h ， 测定色素溶液在可见 光最大吸收波长处 的吸 光度 ， 按式( 1 ) 计算 吸附率 。 5 )乙醇浓度 对解 吸 的影 响 称取 0 5 g已于 p H值 2 0条件下吸附色素达到饱 和的 HP D 4 0 0 树脂 5 份 ， 分别加入到 p H值 2 0 ， 乙醇体 积分数为 0 、 2 5 、 5 0 、 7 5 、 9 5 的待测溶液 中， 1 0 0 r mi n振荡解 吸 2 4 h 。将解吸液乙醇体积分数调整为 2 5 ， p H值 2 0 ， 测定吸光度 ， 按式 ( 2 ) 折算成原体积吸 光度 ， 以排除溶剂差异对色素光谱性质造成的影响。 A 一 A 2 V1 V o ( 2 ) 式 中 原体积吸光度 ； A 调整 乙醇体积分 数 后 所 测 吸 光 度 ；V 调 整 后 样 品 体 积 ， mL； 。 调整前样品体积 ， mL。 6 )红花芸豆色素的大孔树脂柱层析 经预处理的树脂排水法装柱， 层析柱内径 2 c m， 树 脂高约 1 3 c m。根据静态试验结果 ， 对色素提取液进行 纯化 。上样量 5 mL， 吸附流速 8 mL h， p H 值为 1的 HC 1 水溶液洗柱 ， 洗柱流速 8 0 mL h ， 洗脱流速 2 4 mL h。由于色素在 2 7 8 n m 处有吸收峰 ， 用紫外检测仪监测 柱层析流出液 2 8 0 n m处 吸光度 ， 得该条件下的色素洗 脱 曲线。 1 4 4 红花芸豆 色素的纸 色谱分离 取新华 No 3号层析 纸 ( 2 0 c m1 8 c m) ， 距 长边 2 c m处画点样线 ， 用毛细管点样 ， 样 品为经大孔树脂纯 化浓缩 的红花芸豆色素。 晾干后室温于层析筒中上行展 开 ， 展 层剂 B AW ， 时 间 2 9 0 rai n 。 层 析纸 避光 晾干 ， 得到 的单独色带分别 剪下， 用含 0 0 1 HC 1 的甲醇溶解色 素 ， 1 0 0 0 0 r rai n离心 1 0 rai n ， 得分离后的色素组分。 1 4 5 红花芸豆色素的光谱法鉴定 光谱法鉴定参考文献E 9 。色素于 2 5 4 n m 紫外灯 下观察是否有荧光 1 。对色素组分于 2 O O 8 0 0 n m进 行 光谱扫描 ， 参 比为 0 0 1 HC 1 一 甲醇液。为确定最大 吸收峰在加入 A1 C 1 。 后有无红移现象 ， 在 比色皿中加入 2滴含 5 ( m V) A1 C 1 。 的 0 0 1 H C 1 一 甲醇液 ， 混合均 匀 ， 静置 5 rai n ， 于 2 0 0 8 0 0 n m 范围内进行光谱扫描 。 1 4 6 纸 色谱法鉴定红花芸豆色素 纸色谱法鉴定参考文献 E l 1 。 取新华 No 3 层析纸 ( 2 0 c m1 8 e ra) ， 距 纸 长边 2 c m 处 画点 样 线 ， 室温 下 将点有色素的层析纸于平衡过的层析筒内上行展开 ， 展 层剂分别为 B AW、 B u HC l 、 3 HC 1 、 HA c HC l 。 当展开前 沿达约 1 7 c m处 ， 取出纸筒 ， 晾干后按式( 3 ) 测量并计算 色素斑的 Rf值 ， 与文献E l e 中标准 R f值 比较 。 Rf L1 L。 ( 3 ) 式 中 R 厂 比移值 ； L 色素斑中心与点样线间 距离 ， c m； L。 展开剂前沿与点样线间距离 ， c m。 2结果与分析 2 1 不同大孔树脂对红花芸豆色素吸附 表 1 列 出了吸附前吸光度为 0 5 6 6 0的色素提取液 经五种大孔树脂吸附饱和后的吸光度 ， 并计算 吸附率。 由表 1可看出 ， A B 一 8和 HP D4 0 0两种弱极性树脂 对色素的吸附率高， 非极性树脂 HP D1 O O A和 D4 0 2 0吸 附率稍低 ， 而极性树脂 NKA一 9的吸附率最低。 维普资讯 第 6期 陈阳等 ： 大孔树脂法纯 化红花芸豆色素及初步鉴定 2 3 9 表 1 不同大孔树脂对芸豆色素的静态吸 附能 力 Ta b l e 1 S t a t i c a ds or p t i o n c a p abi l i t i e s of v a r i ou s ma c r o p o r o u s r e s i n s f o r k i d n e y b e a n p i g me n t s 2 2 AB 一 8 、 HP D 4 0 0对 红花 芸豆 色素 吸 附动 力学研 究 由图 1可 知 ， AB 一 8及 HP D 4 0 0吸附 能 力 差异 不 明 显。但由于 HP D4 0 0前处理消耗乙醇少， 且两树脂价格 相近， 因此选择 HP D4 0 0作为纯化红花芸 豆色素的吸 附树脂 。 糌 莲 孽 0 1 0 0 2 0 0 3 0 0 4 0 0 5 0 0 6 0 0 吸附时阃 rai n 图 1 AB 一 8 ， H P D 4 0 0对红花 芸豆色素吸 附动力学 曲线 Fi g 1 Ads or pt i on d yna mi c s c ur v es of ma c r op or o us r e s i ns AB一 8 a nd HPD40 0 f or ki d ne y b e an pi gme nt s 2 3 p H 值对 HP D4 0 0吸 附红花 芸豆 色素 的影 响 红花芸豆色素 p H 值超过 3时不稳定 ， 故研究 p H 值在 1 3范围内树脂对色素的吸附 。 由表 2可见， 树脂 在 p H值 1时对色素吸附率较高 ， 而 p H值 2 0时吸附 率较低， 因此 p H值 2 0利于色素解 吸 ， 定 为洗脱 p H 值 。 表 2不同 p H 值条件下 H P D 4 0 0对 色素的吸附 Tab l e 2 Ads or p t i o n o f HPD40 0 r e s i n t O ki dn e y b e a n p i g me n t s a t v a r i o u s p H v a l u e s 吸附前吸-光度值O D 1 2 7 6 1 1 2 8 5 5 1 1 9 3 8 0 9 8 0 4 0 6 8 5 9 吸附后 吸光度值 OD 0 1 4 8 3 0 2 1 3 6 0 2 4 4 l 0 1 8 7 2 0 1 2 5 6 吸附率 8 8 3 8 8 3 3 8 7 9 5 5 8 O 9 1 8 1 6 9 2 4 乙醇 浓度对 解 吸的 影 响 洗脱剂具有使大孔树脂溶胀 ，减弱被 吸附物质与 树脂之间的吸附力的作用 ， 并可溶解被吸附物质 。常用 的洗脱剂是低级醇 、 酮或其水溶 液， 如甲醇 、 乙醇 、 丙醇 和丙酮 ， 考虑到食 品生产安全性等方面的要求 ， 本试验 使用乙醇作为洗脱剂_ 8 。 由图 2可知， 在 p H值为 2时 ， 乙醇浓度增大， 色素 洗脱量也增大 ， 但 由于 9 5 乙醇 比 7 5 乙醇洗脱效率 仅高 4 3 2 ， 从降低成本 的角度确定洗脱剂乙醇浓度 为 7 5 。 O _ 7 O 6 O 5 世0 4 喜o s O 2 O 1 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 乙醇浓度 图 2 乙醇浓度 对解吸的影响 Fi g2 Ef f e c t s o f va r i o us c o nc e nt r a t i o ns o f e t h a n o l o n p i g me n t d e s o r p t i o n 2 5 红 花芸豆 色 素的大 孔 树脂柱 层 析 由图 3可看出， 如以吸光度作为溶液色素含量的表 征， 则洗脱高峰的约 2 0 mL洗脱液洗脱 了占总洗脱量 7 5 4 的色素 ， 说 明 7 5 9 5 的酸性 乙醇溶液可 以较好地 解吸被 HP D4 0 0吸附的红花芸豆色素 。 世 O 7 0 6 0 5 0 4 0 3 O 2 O 1 0 2 0 4 0 6 O 8 O 1 0 0 1 2 O 洗脱体积 m L 图 3 大孔树脂柱层析洗脱 红花 芸豆色素曲线 Fi g3 El ut i o n c u r ve o f ma c r o por o us r e s i n c ol umn c hr o ma t og r a phy f or i s o l a t i n g p i g m e n t s f r o m ki d ne y be a n 2 6 红 花芸豆 色 素的 纸色 谱分 离 对大孔树脂纯化后的色素提取液进行纸层析 ， 展层 剂 为 B AW 。得到两条分离的色素带 ， 据 Rf 值 由大到小 编 为 1号 和 2号 ， 1号 为 红 色 ， R f 一 0 4 4 ， 2号 为紫 红 色 ， R 厂 一 0 4 2 。 2 7 红 花芸 豆 色素 的光谱 鉴定 根据 Ha r b o n J B 的理论 ， 不同类型和结构的色素 化合物表现出的紫外一可见光谱图有很大差异。 根据结 构的不 同， 在可见光 区最大吸收峰的位置有差异； 花色 苷在 3 0 0 3 3 0 n m 间若没有 吸收峰 ， 则说 明花色苷分 子内没有酰基 ； 在紫外光下有荧光表明该花色苷在 5 位 有取代基 ； 色素 与 A1 C 1 。 甲醇液反应 ， 最大吸收峰有红 移则色素 j3 环上有邻位酚羟基 ， 反之则无邻位酚羟基。 1号 和 2号色素的光谱鉴定结果及对照文献值见 蚰 加 册 蚰 m O 维普资讯 2 4 0 农业工程学报 表 3 。 表 3 1 号和 2号色素光谱鉴定 Ta b l e 3 Spe c t r a l i de nt i f i c a t i on of p i gme nt s No1，No 2 注 ： 为紫外光区最大 吸收波长 ，；k a x - v i 为可见光 区最大吸收波长。 食品中主要的 6种红色素衍生物 ， 颜色从桔红到紫 红排 列为 P g( 天竺葵素) ， C y ( 矢车 菊素) ， P n ( 芍药 色 素 ) ， Mv( 锦 葵 色素 ) ， P t ( 牵 牛 花 素) 和 D p( 飞 燕 草 素) 1 。 由于 1号和 2号色素均对 A1 C 1 。 产生阴性反应 ， 即可排除 环有邻位酚羟基的 C y ， P t ， D p 。1号和 2号 色素均于 3 o 0 3 3 0 a m处无吸收且紫外光下荧光反应 呈阴性 ， 说明两种色素的分子内无酰基且在 5 位无取代 基。根据两色素于盐酸一 甲醇液中的吸收峰值对照文献 1 2 3 ， 与 1号各光谱性质最相符 的是天竺葵定一 3 一 葡萄 糖苷( X m U V 2 7 0 ， 5 0 6 ) 与 2号各光谱性质最相符的 是芍药定一 3 一 葡萄糖苷( 2 8 0 ， 5 2 8 ) 。 2 8 纸 色谱法 鉴定 红 花芸 豆色素 色 素 经 B AW 、 B u HC l 、 3 HC 1 、 HAc HC l纸 层 析 后 ， 得到 1号和 2 号色素的 R 值 ， 与文献 1 2 值对照 ， 结果见表 4 。 表 4 1 号和 2号色素迁移率及文献 中标准值 Ta bl e 4 M ob i l i t i e s o f pi gme n t s No1，No 2 a nd t h e i r s t a n d a r d v a l u e s a c c o r d i n g t o d o c u me n t E 1 2 注 ： *为文献E l 2 中的数据。 由表 3和表 4可初步鉴定大孑 L 树脂纯化后的色素 酸提液中的 1号色素为天竺葵定一 3 一 葡萄糖苷 ， 2 号色素 为芍药定一 3 一 葡萄糖苷 。 3 结 论 1 )HP D4 0 0型大孑 L 树脂可较好地吸附和解吸红花 芸豆色素。HP D4 0 0和 AB 一 8两种弱极性树脂对红花芸 豆色素的吸附能力明显强于极性与非极性树脂 ， 说明弱 极性大孑 L 树脂更适于纯化芸豆中的花色苷类物质。 进一 步的研究将对 吸附及洗脱条件 的影响进行显著水平统 计分析并进行动态实验 ， 以期获得更好 的色素纯化效果 并解决色素洗脱存在的拖尾现象 。 2 )经大孑 L 树脂纯化后 的红花芸豆色素有两种主要 成分 ， 天竺葵定一 3 一 葡萄糖苷和芍药定一 3 一 葡萄糖苷。此 结果与郑明君等鉴定 的韩 国产芸豆的两种大量色素天 竺葵定一 3 一 葡萄糖苷和翠雀定一 3 一 葡萄糖苷 7 有区别。更 准确的鉴定结果有待于水 解色素进一 步分析 ， 并 应用 HP L C、 质谱 、 核磁共振等手段对色素进行更加深入 的 研究 。 已有的研究显示 ， 天竺葵定一 3 一 葡萄糖苷具有强抗 氧化活性口 ， 其花色苷元天竺葵色素 ( p e l a r g o n i d i n ) 具 有抑制细胞增殖活性 1 ； 从黑米中提取 的芍药定一 3 一 葡 萄糖苷具有显著的抗癌细胞转移和入侵 活性 1 。对红 花芸豆色 素的进一步研究将进行分离后色素的提取及 纯度验证 ， 及其生物活性研究。 参 考 文 献 1 T s u d a T， Oh s h i ma K， Ka w a k i s h i S ，e t a 1 An t i o x i d a t i v e p i g me nt s i s ol a t e d f r o m t h e s e e ds o f Ph as e o l us Vul gar i s L E J J Ag r i c F o o d C h e m， 1 9 9 4 ， 4 2 ： 2 4 8 2 5 1 2 Ma z z a G， Mi n i a t i E L e g u me s i n An t h o c y a n i n s i n F r u i t s ， Ve g e t a b l e s ，a n d G r a i n s M B o c a R a t o n ，F L：C R C Pr e s s，1 99 3： 2 49 251 3 陈永久 ， 熊绿芸 ， 何 照范 芸 豆色素的光谱分 析及结构初探 J 贵州农 学院学报 ， 1 9 9 5 ， 1 4 ( 4 ) ： 7 O 一7 2 4 My o u n g Gu n C h o u n g ，B y o u n g Ro u r l C h o i ，Y o u n g Na m An， e t a1 Ant ho c ya n i n pr of i l e o f Ko r e a n c u l t i va t e d k i d n e y b e a n( P h a s e o l u s v u l g a r i s L ) J J Ag r i c F o o d Ch e m ，2 0 0 3， 5 1 ( 2 4 ) ： 7 0 4 0 7 0 4 3 5 徐 渊金 ， 杜琪珍 花 色苷分离 鉴定方 法及其 生物 活性 J 食 品与发酵工业 ， 2 0 0 6 ， 3 2 ( 3 ) ： 6 7 7 2 6 冯 佰利 ， 鱼欢 ， 高 小丽 ， 等 中国芸豆品牌 发展 战略研究 J 中国农学 通报 ， 2 0 0 5 ， 2 1 ( 6 ) ： 4 5 4 4 5 7 7 李 春美 ， 钟朝辉 ， 窦宏 亮 ， 等 大孔树脂 分离纯 化柚皮 黄酮 的研究 J 农业工程学报 ， 2 0 0 6 ， 2 2 ( 3 ) ： 1 5 3 1 5 7 E s 朱洪 梅 ， 韩 永斌 ， 顾振新 ， 等 大 孔树脂 对紫甘 薯色素 的吸 附与解吸特性研究 J 农业工程学报， 2 0 0 6 ， 2 2 ( 5 ) ： 1 5 3 1 56 1- 9 姜平平 ， 吕晓玲 ， 朱惠丽 花色苷类 物质分离 鉴定方法 J 中国食 品添加剂 ， 2 0 0 3 ， ( 4 ) ： 1 0 8 一I I 1 1 O 徐杰 ， 林 正眉贵州黑糯 米稻米 种皮成分 的分离纯化 与 结构鉴定 J 中国粮 油学报 ， 2 0 0 3 ， 1 8 ( 2 ) ： 9 1 3 1- 1 1 石冬 梅 ， 林友文 ， 李柱来 地蓉果实 红色素的分离及 组成初 步鉴定 J 天然产物研究与 开发 ， 2 0 0 3 ， 1 5 ( 3 ) ： 2 3 5 2 3 8 1 2 马 自超 ， 庞业珍 天然食用 色素化学及 生产工 艺学 M 北 京 ： 中国林业 出版社 ， 1 9 9 4 ： 6 1 7 6 1 3 成漠 ， 李华 ， 任 玉林 ， 等 黑 加仑色 素的 分离及组 成初 步鉴定 J 吉林 大学 自然科学学报 ， 1 9 9 8 ， ( 4 ) ： 9 1 9 3 r 1 4 Ta k a n o r i Ts u d a ，Ka o r u S h i g a ，Ka t s u mi Oh s h i ma，e t a 1 I nhi bi t i on o f l i pi d p e r o xi da t i o n a nd t he a c t i v e ox yg e n r a di c a l s c a v e ngi ng e f f e c t of a nt ho c ya ni n pi gme nt s i s ol a t e d 维普资讯 第 6 期 陈 阳等 ： 大孔树脂法纯化 红花芸豆色素及初步鉴定 2 4 1 1 5 f r o m Ph a s e o l u s v u l g a r i s L E J B i o c h e mi c a l P h a r ma c o l o gY， 19 9 6， 52： 1 0 33 1 03 9 Ya n j u n Z h a n g ， S h a i j u K Va r e e d ，Mu r a l e e d h a r a n G Na i r Hu ma n t u mo r c e l l g r o wt h i n h i b i t i o n b y n o n t o x i c a n t h o c y a n i d i n s ， t h e p i g me n t s i n f r u i t s a n d v e g e t a b l e s E J 1 6 L| f e Sc i e nc e s，2 00 5， 76： 146 5 1 4 72 Pe i Ni Che n，W u Hs i e n Kuo，Chui Li a n g Chi a n g，e t a 1 B l a c k r i c e a n t h o c y a n i n s i n h i b i t c a n c e r c e l l s i n v a s i o n v i a r e p r e s s i o n s o f MMP s a n d u P A e x p r e s s i o n E J C h e mi c o Bi o l og i c a l I nt e r a c t i on s，20 06， 1 6 3： 2 1 8 2 29 I d e nt i f i c a t i o n a nd pu r i f i c a t i o n o f p i g me n t s i n r e d s p e c kl e d k i d n e y b e a n( Ph a s e o l u s v u l g a r i s L )b y ma c r o p o r o u s r e s i n Ch e n Yan g W an g J u nh u a。 。Ten g Li r o n g。 ，Su Yan bi n ，Ch e n g Yi n gk u n 。 ( 1 r C D ， S h 以 d o g U i e r s i t y a t We i h a i ， We i h a i 2 6 4 2 0 9 ， C h i n a ； 2 S c h o o l o f Ph a r m a c y， S h a n d o n g Un i v e r s i t y J i 口 2 5 0 0 1 2 ， C h i a ； 3 C o l l e g e of L i f e S c i e n c e ， J i l i n U n i v e r s i t y， C h a n g c h u n 1 3 0 0 1 2 ， C h i n a ； 4 C o e g e o f C h e r n i s t r y a n d P h a r ma c y En g i n e e r i n g， J i l i n I n