淡水养殖鱼类病原菌药敏实验.pdf

5 8 ( 总第 1 3 3期) 水 利 渔 业 2 0 0 4年第 2 4卷第 3期 淡水养殖鱼类病原菌药敏实验 林春友， 王云祥 ( 天津市水产研究所3 0 0 2 2 1 ) 摘要 ： 2 5 种抗菌药物对淡水鱼类 6种病原菌分别表现出敏感、 中度敏感和耐药 3 种结果。测定 1 4种抗 菌药物对淡水鱼类 6 种病原菌的最小抑菌浓度， 结果显示， 不 同药物对同一病原菌和 同一药物对不 同病原 菌 均具有不同的 MI C 。在淡水鱼类细 菌病防治过程中， 应选择药敏反应敏感或 MI C较低且吸收较好的抗 菌药 物， 并交替使用， 以防止耐药菌株的产生。 关键词 ： 淡水鱼 ； 病原菌 ； 药敏反应 ； 细菌病防治 中图分类号 ： $ 9 4 8 文献标识码 ： A 文章编号： 1 0 0 3 1 2 7 8 ( 2 0 0 4 ) 0 3 0 0 5 8 0 2 随着集约化程度 的提 高， 鱼类细 菌病的发生愈加频 繁， 严重制约 r 水 产养殖业 的发展。 由于缺乏基本 的药 理知识， 养殖单位存在滥用药物的现象， 这不仅会导致耐 药菌株的产生， 也将给 日后细 菌病的 防治带来更大 的困 难。因此， 我们进行 了抗 菌药物 对淡水鱼类病原 菌的药 敏 实验， 旨在为淡水鱼细菌病 防治提供依据。 1 材料 与方法 1 1 供试菌株 共 6 种。中科院水生所提供 5种 ： 柱状屈挠杆菌( 烂 鳃病病原菌) ， 代号 G 4 ； 嗜水产气单胞杆菌嗜水亚种( 打印 病病原菌) ， 代号 S T 7 8 3 3 ； 苏伯利产气单胞 菌( 烂尾 病病原菌) ， 代号 C R 7 9 1 1 ； 荧光假单胞菌( 赤皮病病 原菌) ， 代号 5 6 一l 2 1 0 ； 肠 型点状 产气单胞菌 ( 肠炎病 病原菌) ， 代号 5 8 2 0 9 。天津水 产研究所分离 1 种 ： 嗜 水产气单胞菌( 出血性 败血病病原菌) 代号 H L S 9 1 0 8 0 2 。 1 2 供试药物 药敏纸片由中国药品生物 制品检定所提供。该所还 提供 9种抗菌 药： 土霉素 ( O x y t e t r a c y d i n e ) 效 价 9 1 2 I U m g ， 四 环 素 ( T e r a c y c l i n e ) 效 价 9 7 1 I U m g ， 多 西 环 素 ( D o x y e y c l i n e ) 效价 8 6 4 I U m g ； ， 庆大霉 素( G e n t a r n i c i n ) 效 价 6 3 6 I U mg ， 卡那霉素( K a n a m y c in ) 效价 7 7 5 I U m g ， 链 霉 素 ( S t r e p t o m y c in) 效 价 7 4 1 I U mg ， 红 霉 素 ( E r y t h r o my c i n ) 效价 8 8 4 I U mg ， 麦 白霉素 ( Me l e u my c i n ) 效 价 8 4 9 I U m g ， 羟氨苄青霉 素( A mo x i c i l l i n ) 纯度 8 6 2 。诺 氟沙星( N o r fl o x a d n ) 纯度 9 8 5 ， 批号 9 8 0 6 0 1 ， 天津中央 制药厂生产 ； 氟苯 尼考 ( F l o r f e n i c o 1 ) 纯 度 9 8 5 ， 批号 0 2 1 2 0 0 6 ， 湖北 中牧安达药业有 限公司生产； 新诺 明( S u l f a m e t h o x a z o l e ) 纯度 9 9 ， 批号 9 9 0 4 2 5 江苏昆山制药总厂 生 产； 甲氧 苄 氨 嘧 啶 ( T r i m e c 1 o p r i m) 纯 度 9 9 ， 批 号 9 8 1 0 5 8 ， 寿光富康制药有限公司生产； 磺胺二 甲嘧啶( S 一 f a f u r a z o l u m) 纯度 9 9 ， 北京第二制药厂生产。 收稿日期： 2 0 0 3 1 0 2 8 收修改稿 日期： 2 0 0 4 0 4 0 2 作者简介： 林春友， 1 9 6 4 年生， 男， 天津蓟县人， 副研究员， 主 要从事 水生 动物 病害 防治工作 。 1 3 药物敏感实验 1 3 1 纸 片琼脂扩散法 采 用改 良的 K i r b y B a u e r ( K B ) 氏法。2 8 培养 2 4 h ， 观察抑菌圈的大小及敏感性。 1 3 2 常量稀释法 采用 N c c l s 及 I e s 推荐 的 Mu l 1 e r H i n t o n液体培养基。 抗菌药物溶液 的制备。将药物用适宜 的溶媒溶解 后， 用无菌蒸馏水 或其他溶 剂配置成 2 5 6 0旭 ( I U) n 药液备用。 配制药液所需药物( m g ) = 溶液体积( n ) 溶液浓 度( mL ) 药物活力( g m g ) 标准接种液的制备。用接种环取一待测菌种接种 到 2 I n L MH 肉汤培养基 中， 2 8 培养 6 h ， 用 MH肉汤校 正菌液浓度至 0 5麦 氏标 准浊度， 此浊 度含 菌量为 1 0 I n I J ， 再用肉汤按 1 ： 1 0 0 稀释 ( 含 菌量约为 1 0 n ) 备用。 校正好的菌液应尽快在 1 5 m i n内接种 。 各种药物对病原菌的MI c 。用 M I - -I 肉汤将药液依 次对倍稀释 至 2 5 6 、 1 2 8 、 6 4 0 2 4 、 0 1 2 、 0 0 6旭 ( 或 I U) I n I J 1 3 个 2 倍稀释浓度， 取每个浓度 的药液 1 n 分 装于 1 3 n l r n1 0 0 I n I n试管 内， 取校正好 的菌液 1 n 分 别加到各试管中， 使接种后每支试管的含菌量为 51 0 I n I J ， 此时各管药物浓 度为 1 2 8 、 6 4 、 3 2 、 0 1 2 、 0 0 6 、 0 0 3 ( I U) I n I J ； 同时设不含抗 菌药 物只含定量菌液 的 阳性对照管， 不 含抗菌药物和菌 液的阴性 对照管。2 8 培养 2 4 h ， 以肉眼观察无细 菌生长试管 中的最低药物浓 度 为 MI C 。 2 结果与分 析 2 1 改良 K B氏法检测 2 5种抗菌药物敏感性 结果见表 1 。荧光假单胞菌对 9 种药物反应敏感， 占 被测药物的 3 6 ； 对 3种药 物 中度敏 感。 占被测药 物 的 1 2 ； 对 1 3 种药物耐药， 占被测药 物的 5 2 。肠型点状 产气单胞菌对 1 6 种药物 反应敏 感。 占被测药物 的 6 4 ； 对 1 种药物 中度敏感， 占被测药物 的 8 ； 对 7种药物 耐 药， 占被测药物的 2 8 。嗜水气产单胞杆 菌嗜水亚种对 1 6 种药物反应敏感， 占被测药物的 6 4 ； 对 1 种药物中度 敏感， 占被测药物的 4 ； 对 8 种药物耐药， 占被测药物 的 3 2 。苏伯利产气单胞菌对 1 4种药物反 应敏感， 占被测 药物的 5 6 ； 对 3 种药物 中度敏感， 占被测药 物的 1 2 ； 维普资讯 2 0 0 4年第 2 4 卷第 3 期 水 利 渔 业 ( 总第 1 3 3期)5 9 对 8 种药物耐药， 占被测药物 的 3 2 。柱状屈挠杆菌 对 2 0种药物反应敏感， 占被测药物 的 8 0 ； 对 2种药物 中度敏感， 占被测药物 的 8 ； 对 3种药物耐药， 占被测药 测药物的 3 6 ； 对 2 种药物 中度敏感， 占被测药物的 8 ； 对 1 4种药物耐药， 占被测药物的 5 6 。 2 2 常量稀释法测定 1 4种药物药敏 实验结果 物 的 1 2 。嗜水产气 单胞菌对 9种药物反应敏感， 占被 药敏实验结果见表 2 。 表 1 淡水鱼类病原菌药敏 实验结果 * S 表示敏感， “ M” 表示 中度敏感， “ R ” 表示耐药 表 2 抗菌药物对淡水鱼类病 原菌 的 MI C值 z ( I U) m L *羟氨苄青霉紊设置的最高浓度为 6 4 u m L 其它抗生素 的 MI C单位为 I L n 合成抗菌药物的 MI C单位为 n 1 L 。 羟氨苄青霉素、 麦白霉素 、 磺胺二 甲基嘧啶对荧 光假 单胞菌、 肠型点状产气单胞菌、 嗜水产气单胞杆菌嗜水亚 种 、 苏伯利产气单胞 菌和嗜水产气单胞 菌未表 现出抗菌 作用。除此之外， 诺氟沙 星对荧 光假单胞菌、 肠型点状产 气单胞菌 、 嗜水 产气单 胞杆菌嗜水亚种 和苏伯利产气 单 胞菌的 MI C最低， 分别 为 0 1 2 5 、 0 0 3 、 0 0 6 、 0 0 3 r e mL ； 新诺明对上 述 4菌 的 MI C也 最高， 分别 为 1 2 8 、 6 4 、 1 2 8 、 1 6 r e mL ； 庆大霉素、 氟苯尼 考对嗜水产气单胞 菌的 MI C最低， 为 2 ( I u) n ； 甲氧苄氨嘧啶对嗜水产气单 胞菌的 MI C最高， 为 6 4 g mL 。 3 结