冷冻干燥法制备莪术油脂质体.pdf

中国医药工业杂志 C h i n e s e J o u r n a l o f P h a r ma c e u t i c a l s 2 0 0 8 ， 3 9 ( 1 1 ) 一， I J i药物制剂 t - 冷冻干燥法制备莪术油脂质体 杨志文 ，杨木华 ，程齐来 ，卑 占宇 ，李青松 ( 1 赣南医学院药学院药剂教研室；2 江西天然药物研究与开发重点实验室，江西赣州 3 4 1 0 0 0 ) 8 27 摘要：采用叔丁醇 水共溶剂、冷冻干燥法制备莪术油脂质体，用单因素试验优化处方，并进行体外释放试验。结果表 明，莪术油脂质体呈球形，包封率为 ( 9 2 2 3 4 ) ，平均粒径为 ( 4 5 7 3 + 7 - 8 ) n m， 电位为一 2 3 6 mV，体外4 8 h 累积释放率 为9 4 1 。 关键词：莪术油；脂质体；冷冻干燥；叔丁醇 水共溶剂 中图分类号：R 9 4 4 9 文献标识码：A 文章编号：1 0 0 1 8 2 5 5 ( 2 0 0 8 ) 1 1 - 0 8 2 7 0 4 P r e p a r a t i o n o f Li p o s o me s Lo a d e d wi t h Ze d o a r y T u r me r i c Oi l b y F r e e z e Dr y i n g Y A NG Z h i w e n ， Y A NG Mu h u a ， C H E NG Qi l a i ， B E I Z h a n y u ， L I Q i n g s o n g ( ， D e p t o f P h a r m a c e u t i c s ， S c h o o l o f P h a r m a c y , G a n n a n Me d i c a l C o l l e g e ,“ 2 K e y L a b o f N a t u r a l Dr u g s D G a n z h o u 3 4 1 0 0 0 ) ABSTRACT：The s i n g l e f a c t o r t e s t wa s us e d t o o p t i mi z e t h e f o r mul a t i o n o f z e do a r y t ur me r i c oi l l i p o s o me s pr e p a r e d b y f r e e z e d r y i n g me t h od wi t h t e r t i a ry b u t y l a l c o h o l wa t e r c os o l v e n t s y s t e m T he i n v i t r o r e l e a s e o f t h e p r o d u c t s wa s i n v e s t i g a t e d T h e r e s u l t s s h o we d t h a t t h e l i p o s o me s we r e s p h e r i c a l wi t h me a n d i a me t e r o f( 4 5 7 3 + 7 8 ) n m a n d e n t r a p me n t e ffic i e n c y o f ( 9 2 2 士 3 4 ) T h e p o t e n t i a l wa s 一 2 3 6 m V a n d t h e 4 8 h a c c u mu l a t i v e r e l e a s e wa s 9 4 1 Ke y W o r ds ： z e d o a r y t u r me r i c o i l ； l i p o s o me ； f r e e z e d ryi n g ； t e rti a ry b u t y l a l c o h o l - wa t e r c o s o l v e n t s ys t e m 莪术油( z e d o a r y t u r me r i c o i l ，1 ) 是从姜科植物 莪术的干燥根茎提取出的挥发油 ，含有D 榄香烯、 莪术醇、莪术酮、吉玛酮 ( g e r ma c r o n e ，2 ) 等多种 有效成分，在抗肿瘤 、抗病毒临床治疗中具有应用 价值 。1 葡萄糖注射液作为抗病毒 药收载于中国 药典2 0 0 5 版，其临床应用时有刺激性、过敏性、溶 血性等不 良反应 3 j 。此外 ，1 局部注射油剂仅可用 于局部动脉栓塞，治疗肝癌、宫颈癌等H 。 国内报道用生物相容的脂质体为载体能有效减 轻或避免1 的刺激性、溶血性等不 良反应 。本研 究采用新型 的叔丁醇 水共溶剂、冷冻干燥法制备1 收稿日期：2 0 0 8 0 1 0 7 作者简介：杨志文 ( 1 9 7 5 ) ，男，讲师，硕士研究生，专业方向：靶 向制剂。 T b l ：07 9 7 5 8 6 3 5 61 E m a i l ：me n g h u a O 0 1 s i n a c o m 脂质体，初步探讨该工艺的可行性 。 。 。 1 仪器与试药 H P l 1 0 0 型高效液相色谱仪 ( 美lAg i l e n t ) ；3 0 0 0 H S 型 激光粒度测定仪 ( 英 国Ma l v e m公司) ：H 一 6 0 0 型透射 电镜 ( 日 本H i t a c h i ) ；P e r k i n E l me r 7系列热分析仪( 美国P e r k i n E l me r I n c ) ；G C 一 1 7 A气相色谱仪 ( 日本岛津) 。 大豆磷脂 ( 上海 太伟药业 ，注射级 ，含 量9 5 ) ；胆 固醇( 上海化学试剂厂， 生化试剂) ；1 ( 江西省吉水县药用植物 油厂，注射级， 2 含量为1 0 2 1 )：2 对照品( 中国药品生物 制品检定所，含量9 9 9，批号1 1 1 6 6 5 2 0 0 4 0 1 ) ；乙腈为色 谱纯； 甲醇为分析纯：海藻糖 ( 北京欣经科生物技术公司) 。 2 方法与结果 2 1 叔丁醇 水共溶剂、冷冻干燥法制备1 脂质体 按 比例称取l 一 大豆磷脂 一 胆固醇 ( 0 5： 4： l ， w w ) ，加叔丁醇5 ml 于6 0 溶解，然后加入5 海 藻糖水溶液1 0 0 ml ，保温搅拌1 h 后，用0 2 2 p m微孔 中国医药工业杂志 C h i n e s e J o u r n a l o f P h a r ma c e u t i c a l s 2 0 0 8 ， 3 9 ( 1 1 ) 滤膜过滤。滤液 以2 mi n 至一 4 5 冷冻8 h ，于 一 2 0 。 C 干燥4 8 h ，最后升至2 5 维持1 O h ，得疏松黄 色粉末状1 脂质体。I I伍 用前加水重建后 ，可分散成 均匀、带有淡黄色乳光的脂质体混悬液 。 2 2 包封率测定 采 用2 对 照品 ，用HP LC法 检 测 。色谱 条 件：色谱柱 H y p e r s i l ODS C l 8 柱 ( 4 6 mmx 2 0 0 mm， 5 u m) ；流动相 乙腈一 水 ( 8 0： 2 0 ) ；流速 1 O ml mi n ： 检测波长2 1 0 n m；柱温 室温；进样量2 0 p l 。 采 用离心法 测定脂质体 中1 包封 率。取 脂 质体1 ml ，用无水乙醇破膜后 ，离心 ( 1 0 0 0 0 r mi n ) 1 5 mi n ，取上清液进样测定。 2 - 3 单因素试验 2 3 1 大豆磷脂浓度 磷脂浓度直接影响l 脂质体包封率。照 “ 2 1 ” 项下方法制备大豆磷脂在叔丁醇一 水共溶剂中的浓 度分别为2 5 、5 0 、7 5 、1 O 0 、1 2 5 g L 的l 脂质体。照 “ 2 2 ”项下方法测得包封率分别为( 6 6 2 + 2 3 ) 、 ( 7 6 3 + 2 9 ) 、 ( 9 6 1 + 1 7 ) 、 ( 9 6 6 + 2 1 ) 和 ( 9 7 2 土 1 5 ) ( n = 3 ) 。结果显示，l 包封率随磷脂浓度增大 而增加，磷脂浓度大于7 5 g L ，1 脂质体包封率不再 明显增加。故本试验大豆磷脂浓度选用7 5 g L。 2 3 2 海藻糖浓度 海藻糖作为双糖支架剂 “ ，其浓度也直接影 响l 脂质体的质量。海藻糖与磷脂重量比分别为1： 2 、l： 1 、2： 1 、3： l 、4： 1 时所得l 脂质体的包封率 分别为( 8 6 7 + 3 7 ) 、( 8 9 3 4 - 1 9 ) 、( 9 2 6 4 - 2 1 ) 、 ( 9 7 5 4- 1 9 ) 和 ( 9 6 7 2 3 ) ( n = 3 ) 。结果显示，1 脂质体包封率随海藻糖浓度增大而增加，重量 比为 3： 1 , D 4：1 时所得1 脂质体的包封率相近。因海藻 糖浓度增加会导致溶液黏度增加，不利于脂质体分 离。故重量 比选用3： 1 。 2 3 3 叔丁醇用量 有机溶剂用量对脂质体的质量有一定的影响。 照 “ 2 1 ”项下制备叔丁醇用量分别为1 、2 5 、5 、 7 5 、1 O ral 的1 脂质体。测得其包封率分别为 ( 9 3 2 士 3 2 ) 、 ( 9 1 3 4- 2 9 ) 、 ( 8 7 1 士 3 1 ) 、 ( 7 2 6 4- 3 5 ) 9 ， 6 和 ( 6 1 2 4- 5 1 ) ( n = 3 ) 。结果显示 ，1 脂质体包封率 随叔丁醇含量增大而减少 ，叔丁醇含量大于5 ml ， 包封率明显下降。叔丁醇用量大于1 O ral ，会破坏脂 质体。故本试验叔丁醇用量选用5 ml 。 2 4 优化处方验证 采用大豆磷脂浓度为7 5 g L 、海藻糖与磷脂重 量比为3： l 、叔丁醇用量5 ml ，照 “ 2 1 ”项下方法 制备3 批脂质体 。照 “ 2 2 ”项下方法测定，计算得 平均包封率为( 9 2 2 4 - 3 4 ) ，载药量为 ( 8 7 + 0 4 ) ( n = 9 ) ，表明处方重现性较好。 2 4 1 1 脂质体的形态、粒度分布、 电位 取1 冻干脂质体加水重建成2 mg ml T 悬液 ， 用透射 电镜观察形态 ，可见其呈球形、大小均匀 ( 图1 ) 。用激光粒度测定仪测得平均粒径为 ( 4 5 7 3 士 7 8 ) n m， 电位为一 2 3 6 mV。 图1透射电镜照片 ( 1 0 0 0 0 ) 2 4 2 体外释放度 精密量取2 mg ml 的1 脂质体混悬液4 ml ，共6 份 ，分别放入透析袋中 ( 截 留分子量 1 2 0 0 0 ) ，置含 1 2 吐温 8 0 的磷酸盐缓冲液 ( p H 7 4 ) 5 0 0 ml 中， 3 7 。 C、1 0 0 r mi n 下试验 。分别于0 5 、1 、2 、4 、6 、 8 、1 2 、2 4 、3 6 、4 8 H 6 0 h 取样2 ml ( 同时补充同温等 量空 白介质) ，过滤，取续滤液照 “ 2 2 ”项下色谱 条件测定样品中2 的含量 。体外释药结果见图2 。 t h 图2 1 脂质体的体外释药曲线 中国医药工业杂志 C h i n e s e J o u rna l o f P h a r ma c e u t i c a l s 2 0 0 8 ， 3 9 ( 1 1 ) 1 脂质体2 h 时累积释 放率为2 0 6，4 h 时为 3 9 5 ，8 h 后释放 曲线渐趋平稳，4 8 h 时基本释放 完全，累积释放率为9 4 1 。 2 4 3 1 脂质体的渗漏率 1 脂质体 混悬液分别于4 、2 5 放置3 个月， 取样后照 “ 2 2 ”项下方法测定渗漏率 ( 渗漏率= 储 存一定时间后渗漏到递质 中的药量 储存前包封药 量 1 O 0 ) ，结果见表 1 。 表 1 1 脂质体稳 定性 试验 ” ( X 士S ，n = 3 ) 注：” 括号内、外分别为制品于2 5 和4 放置的数据 由表1 可知，2 5 放置3 个月的渗漏率为1 4 9 ， 4 时放 置为3 8 ，提示 1 脂 质体 不宜在室 温保 存。 2 5 DS C 分析 取4 组样品，分别为：1 组 ( 叔丁醇和水 的混合 物) 、2 组 ( 含 1 脂质体 的叔丁醇一 水混合物) 、3 组 ( 5 海藻糖的叔 丁醇 水混合物) 、4 组 ( 5 海藻糖 和 1 脂质体 的叔丁醇一 水混合物) ，各组 中含叔丁 醇的浓度均为5 。测试时各取约1 0 mg置铝盘中， 以0 5 C mi n 从室温降至一 5 0 ，再照2 C mi n 升至 3 0 。所得DS C 图谱见图3 。 7 O 5 0 3 0 O t r c 由图3 可见，1 组和2 组的DS C图谱显示2 个峰， 提示冻干时叔丁醇 水共溶剂体系会出现共熔物 的 结晶，推测峰1 和共熔物融化峰有关，峰2 和冰的融 化峰有关u 。体系中加入脂质体 ( 2 组) ，这2 个峰 的位置和形状无明显变化。但当体系中含有海藻糖 时 ( 3 组 、4 组) ，峰 1 的高度明显变小，提示海藻糖 可抑制共熔物的生成。 2 6 升华 曲线的绘制 照 “ 2 1 ”项下方法分别制备不含叔丁醇和叔 丁醇浓度 为5 的l 脂质体 。在冻干2 、4 、6 、8 、 1 0 、1 2 、1 4 h 后取 出，精密称定，计算样品的质量 损失情况。结果表明，含叔丁醇组l 脂质体在7 个时 间点质量残留率 ( 即冻干后与冻干前样品的重量比) 分别为9 2 3 、7 9 1 、6 9 8 、5 4 9 、4 4 7 、 3 2 6 、2 4 9 ，不含叔丁醇组分别为9 2 3 、 8 2 4 、7 5 5 、 6 1 9、 5 3 4 、4 0 7 、 3 1 6 。 提示两组l 脂质体具有不同的升华 曲线 ，添加少量 叔丁醇可稍提高溶媒升华速度 ，缩短冷冻干燥 时 间，节省能源。 2 7 叔丁醇的残留量 叔 丁醇 毒性 较 小 ，与 乙醇 相近 ，其凝 固 点高 ( 2 4 ) ，在冻干机 中可完全冻结；蒸汽压高 ( 3 5 8 k P a ，0 ) ，冻干过程中能快速升华 ，残留量 低n H 。采用气相色谱法 测得1 脂质体冻干品中 叔丁醇的残留量小于0 3 7 ( n = 6 ) 。 参考文献： 1 梁广， 黄志锋， 李校堑， 等 莪术油的药理学及临床应用 研究进展 J 中国医院药学杂志， 2 0 0 6 ， 2 6 ( 1 2 ) ： 1 5 4 l 一 1 5 4 3 2 赵文峰，汪建生 莪术油葡萄糖注射液的溶血性试验 J 中国药事， 2 0 0 0 ，1 4 ( 4 ) ： 2 8 0 3 梁莉， 乔华， 王婷， 等 莪术油注射液的不良反应 J 中国药事， 2 0 0 6 ， 2 0 ( 1 2 ) ： 7 7 0 7 7 1 4 周红， 王沁， 江志生 莪术油的药理作用研究进展 J 世界肿瘤杂志， 2 0 0 3 ， 2 ( 4 ) ： 3 2 6 3 2 8 5 宋利琼， 张 昌菊 莪术油联合干扰素对小 鼠宫颈癌端粒 酶活性和细胞凋亡的影响 J 上海中医药杂志，2 0 0 6 ， 4 0 ( 7 ) ： 6 8 6 9 6 张小宁， 张 郁， 姬海红， 等 微射流法制备莪术油纳米脂 质体的研究 J _ 中国药学杂志， 2 0 0 4 ， 3 9 ( 5 ) ： 3 5 6 3 5 8 7 王志宣， 邓英杰， 张晓鹏， 等 尼莫地平 前体脂质体的制 备及其质量评价 J 沈阳药科大学学报， 2 0 0 6 ， 2 3( 1 1 ) ： 如 O O 舶 谱 加 图 一 C S D O 3 3 图 8 3 0 中国医药工业杂志 C h i n e s e J o u r n a l o f P h a r ma c e u t i c a l s 2 0 0 8 ， 3 9 ( 1 1 ) 喷雾干燥法制备神经毒素 I = j 冗 聚糖鼻腔给药微球 蔡鑫君，柳 琳，程巧鸳，李范珠 ( 浙江中医药大学药学院，浙江杭州 3 1 0 0 5 3 ) 摘要：采用喷雾干燥法制备神经毒素一 I 壳聚糖微球，利用正交设计优化微球处方，所得微球平均载药量为 ( 1 9 2 3 0 4 2 ) 、 收率为 ( 9 2 1 + 2 1 ) 。体外释药数据用H i g u c h i 模型拟合得方程Q 1 1 4 2 t 1 2 - 5 8 9 ( 0 9 9 2 0 ) ，表明该微球具有缓释作用。 关键词：喷雾干燥法；神经毒素 I；壳聚糖微球：体外释放 中图分类号：R 9 4 4 9 文献标识码：A 文章编号：1 0 0 1 8 2 5 5 ( 2 0 0 8 ) 1 1 - 0 8 3 0 0 4 P r e p a r a t i o n o f Ch i t o s a n M i c r o s p h e r e s Lo a d e d wi t h Ne u r o t o x i n I f o r Na s a l De l i v e r y b y S p r a y Dry i ng T e c h n i q ue C AI Xi n - j u n ， L I U L i n ， C H E N G Q i a o y u a n ， L I F a n z h u ( C o l l e g e o f P h a r m a c e u t ic a l S c i e n c e ， Z h i a n g C h i n e s e Me d i c a l U n i v e r s i ty , H a n g z h o u 3 1 0 0 5 3 ) ABS TRACT： Ch i t o s a n mi c r o s p h e r e s l o a d e d wi t h n e u r o t o x i n - 1 we r e p r e p a r e d b y s p r a y d r y i n g t e c h n i q u e T h e p r e p a r a t i o n w a s o p t i mi z e d b y o r t h o g o n a l d e s i g n T h e d r u g l o a d i n g w a s( 1 9 2 3 + 0 4 2 ) a n d y i e l d w a s( 9 2 1 + 2 1 ) T h e i n v i t r o r e l e a s e o f n e u r o t o x i n - I f r o m mi c r o s p h e r e s fi t t e d t o H i g u c h i e q u a t i o n Q = 1 1 4 2 t m - 5 8 9 ( r = 0 9 9 2 0 ) ， w h i c h i n d i c a t e d t h e mi c r o s p h e r e s h a d s u s t a i n e d r e l e a s e e f f e c t Ke y Wo r d ： s p r a y d r y i n g t e c h n i q u e ； n e u r o t o x i n -I ； c h i t o s a n mi c r o s p h e r e s ； i n v i t r o r e l e a s e 神经毒素 I( n e u r o t o x i n I，1 ) 是从云南眼镜 蛇毒液中分离得到的一类短链神经毒素的主要成分 收稿日期：2 0 0 8 - 0 3 - 2 4 基金项目：国家自然科学基金资助项目( 3 0 3 7 1 7 8 1 ，3 0 7 7 2 7 9 3 ) ，浙 江省新苗人才计划( 2 0 0 7 R 4 0 G 2 1 2 0 0 4 4 ) 作者简介：蔡鑫君( 1 9 8 5 ) ，男，硕士研究生，专业方向：中药新剂 型新技术。 T e l ： 0 5 7 1 8 6 61 3 7 2 6 E - ma i l ：z j t c mc x j 1 6 3 c o m 通讯联系人：李范珠 ( 1 9 6 4 ) ，男，教授，博士生导师，从事药物新 技术与新剂型研究。 1 l ： 0 5 7 1 8 6 6 3 3 0 3 0 之一，具有中枢镇痛作用 ，无耐受性和依赖性，安 全性高 ，主要以肌注方式用于控制各种疼痛及戒 毒 ，起效较慢 ( 约3 5 h ) ，难 以满足临床需求。 鼻腔给药是 目前研究较多的适合多肽蛋白质类药物 的新型给药系统，药物吸收迅速 ，可避免肝首过作 用、消化道黏膜的代谢和降解 ，给药方便，患者依 从性好。研究表明，鼻腔给药对相对分子质量 ( ) 小于1 0 0 0 的脂溶性药物吸收较好 I 3 j 。并且采用鼻 腔给药可使药物通过鼻脑通路直接入脑发挥药效。 E - m a i l ： L i f a n z h u z j t c m n e t 由于1 的 较大 ( 6 7 0 0 ) ，易溶于水，直接鼻腔 婚婚 皤 68 l 一 68 5 8 李春雷， 邓英杰 叔丁醇 水共溶剂体系冻干脂质体 J 沈 阳药科大学学报， 2 0 0 5 ， 2 2 ( 4 ) ： 2 4 1 - 2 4 4 9 杨凯亮， 陈大为， 王书典， 等 莪术油纳米脂质载体给药 系统的制备及其评价 J 中国药学杂志， 2 0 0 6 ， 4 1 ( 2 4 ) ： l 8 8 1 1 8 8 4 1 O 吴正红， 平其能， 赖家明， 等 小鼠口服多糖包覆胰岛素脂 质体的降血糖作用 J 药学学报， 2 0 0 3 ， 3 8 ( 2 ) ： 1 3 8 1 4 2 1 1 吴燕，