啤酒酵母AS2.1416海藻糖合成酶基因tps1的cDNA克隆及序列分析.pdf

! “卷#期 $ % % %年 ) ? ( A . : - B ( = . ) 0 ! 0 !，! 0 C 0 ) ? ( A . : - 0 B ( = ;） 是一种非还原性二糖， 广泛存在于藻类、 细菌、 昆虫、 无 脊椎动物及酵母等许多生物体内。海藻糖除了作为一种储 存性碳源外， 业已被证明在许多逆境， 诸如高温、 高盐、 干旱、 重金属离子污染、 冷冻、 辐射等情况下， 可以有效地保护生物 的细胞膜、 蛋白质及核酸 ! “ “ 。 海藻糖合成酶为一多酶体系。在酵母细胞中， 其合成分 为两步进行。第一步， 在“ 0磷酸海藻糖合成酶 （9 A = !） 的作用 下， 由D C 4 0葡萄糖和葡萄糖0 “ 0磷酸合成海藻糖0 “ 0磷酸； 第 二步， 在海藻糖磷酸酯酶 （9 A = $） 的催化下， 海藻糖0 “ 0磷酸脱 去磷酸生成海藻糖。此两基因已于! / / $年和! / / #年分别 由荷兰、 瑞士及芬兰学者从啤酒酵母中分离得到 2 “ / ， 最近 又有多种不同来源的海藻糖合成酶基因被克隆， 对其分子生 物学及酶学性质等作了进一步的研究 ! % “ ! / 。 高等植物缺乏海藻糖合成的相关酶基因， 通过转基因技 术， 可望使某些高等植物中合成一定量的海藻糖， 从而提高 它们在逆境下的生存能力。 本文 以 国 内 筛 选 出 的 海 藻 糖 高 产 菌 株 啤 酒 酵 母 8 E $ F ! 1 ! “为材料， 构建 C + 8文库， 从中成功克隆到“ 0磷酸 海藻糖合成酶基因， 并对其序列进行了分析。 % 材料 % $ % 菌株与质粒 啤酒酵母 （3 + 0 0 “ + * ( 4 2 0 % “ C + 8E . B L -公司； 4 5 6反应引物由微生物所技术室合成。 % $ # 主要生化试剂 C + 8限 制 酶、9 1 C + 8连 接 酶、 低 熔 点 琼 脂 糖 购 自 4 : ( I ; -公司；9 - PC + 8多聚酶为高真度聚合酶。C + 8测序 试剂盒购自4 : ( I ; -公司。 # 方法 # $ % 啤酒酵母( ) * !文库的构建 将在# % Q培养的生长旺盛的啤酒酵母迅速转移到1 % Q 培养$。与所报道的相比， 其核苷酸序列同源性大于C C )， 其中第2 2 ?、 ; = 2、G ? C、 G 2存在?个差异， 推测其所编码的蛋白质 的氨基酸序列亦有?个不同， 氨基酸序列同源性为C C )。 ( 讨论 在正常生长条件下， 啤酒酵母海藻糖含量极少， 其 图2! “ #$基因重组子的酶切鉴定 $ * $ ( 3 4 . . 5 ,；2 * + 3 4 H I J . = $ “ = ; ? 董志扬， 方宣钧， 林敏*核农学研究进展*北京： 中国农业科技出版社， $ C C G，$ $ + / + / $ 2 ; CA / 1 J ND， Y 4 3 J T 5 TK，U - T . 5 H ( - , - / L XE4 ! ( 26) : 0 ;+ / ，# $ )： ? C “ G $ $ = - 3 V L 4 T LY， : - , 3 4 0 X 5 ,#，D - - H4 ! ( 26; 期 董志扬等： 啤酒酵母F Q 2 % $ ? $ G海藻糖合成酶基因! “ #$的0 9 K F克隆及序列分析 ! “# $ % $ $ 0 0 * ; (#，, $ ) $ - $.! “ # $% $ 2 1 6 . ; 5 7 2? 2 . 2 8 : - ! “ # # $ % + ! ! , 1 ( 8? * ! / * ! )， 7 $ S * 8 7 C = C T * 8 T $ 0 7 8 9 : 0 $ 8 7 M 7 : 7“ 4 )!U $ 8 $ T S ( V ( 7 - V ; * 9 7 $ 8 0?%* ! 5 ! A ) # !O R “ H ! 6 ! = G I , O S ( / ; $ ; 9 / 9T * S 9 7 ; $ 8 7 G $ ( : ; 7 $ G 0 ( * : H . ( 8 ! H 2) / V ; $ M 7 : 0U $ 8 G S * : 7 - ( : 0 *B ) “Q $ : - $ : - 0 7 8 7 W 6 1 2$ ( : *$ G ( -$ : - 8 $ ; 7 -$ 8 7 W * ?%* ! 5 ! A ) # !R “ 4 4 A H E 2 6F - : G 7 . ; 7 $ S * 8 7，0 ; 7 $ S * 8 7 C = C T * 8 T $ 0 7 8 9 : 0 $ 8 7， ! Y A Z （上接T H 5 1 2） 4 H 生物工程学报 的内容涵盖哪些方面？我公司想在贵刊刊登广告， 请问有何手续？费用如何？ 答：生物工程学报 是由中国科学院微生物研究所和中国微生物学会主办的综合性的学术刊物。主要报道我国生物技 术领域科学和技术的新进展和新成果， 刊登的内容包括： 基因工程、 细胞工程、 酶工程、 生化工程、 生物反应器等各个方面， 涉 及工业、 农业和医学等诸多领域。刊载的文章有= 3 X以上是获 “4 = 5” 高技术、 国家自然科学基金资助或属 “八五” 、“九五” 攻关 及省部级重大项目的研究论文， 为国内从事生物技术的科研人员必读的刊物。 过去的几年， 本刊以严谨的态度、 诚实的信誉， 赢得了厂商和读者的信赖， 与许多公司建立了良好的长期合作关系。 生物工程学报 设有广告专版， 真诚欢迎国内外厂商来此发布产品、 技术和服务信息， 刊登仪器、 设备、 试剂等方面的广 告。我刊除彩色四封外， 还有精美彩色、 黑白插页供选择。 需要刊登广告的客户， 可电话告知您的F $ B， 我们会立即将报价单传真给您，