老鹰茶总黄酮降血糖作用的实验研究.pdf

中国中医药科技2 0 0 8 年3 月第1 5 卷第2 期M a r 2 0 0 8V d 1 5N o 2 1 1 9 老鹰茶总黄酮降血糖作用的实验研究* 吕雄文李俊邹宇宏金涌 程文明章秋黄艳张骏艳 ( 安徽医科大学药学院合肥2 3 0 0 3 2 ) 摘要目的：观察老鹰茶总黄酮( T F L C ) 的降血糖作用，并探讨其作用机制。方法：T F L C 连续5 天灌胃 正常小鼠。观察其降血糖作用。采用肾上腺素腹腔注射、四氧嘧啶尾静脉注射和链脲佐茵素腹腔注射制 备糖尿病小鼠和大鼠模型，观察T F L C 的降糖作用以及对血清胰岛素( I N S ) 和血脂的影响。结果：I J C 可 降低正常小鼠的血糖值；显著对抗由肾上腺素引起的小鼠血糖升高，明显降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖。 并升高血清I N S 水平，显著降低链脲佐菌素糖尿病大鼠模型的血糖和血清代、T G 、L D L C 含量，同时升 高血清H D L C 含量。结论：，I 下K 具有明显的降血糖作用，其机制与其促进I N S 分泌和调节脂质代谢紊 乱有关。 主题词糖尿病q , 医药疗法老鹰荼总黄酮治疗应用老鹰荼总黄酮药理学血糖药物作用大 鼠小鼠 老鹰茶( L t s 凸础啦) ，又称豹皮樟，属樟科、木姜子属， 俗称“白茶”，在安徽皖南山区资源丰富，民间饮用历史悠久。 其味芳香，性甘凉，具有清凉止渴、解毒消肿、醒神益智、明目 健胃、顺气解表、散瘀止痛等功效u o 】，但其有效部位在治疗 糖尿病方面的研究目前尚未见报道。为了认识和了解这一 野生植物资源，以便更好的开发利用，本实验主要观察了老 鹰茶总黄酮( t o t a lF l a v o n o i d s0 fG t u 硷C o m m a ，T F L C ) 对糖尿病 小鼠和大鼠模型的降血糖作用，并探讨其部分作用机制。 1 实验材料 1 1 “ I V L C 制备老鹰茶采自安徽省宁国县，阴干备用。用 1 2 倍量( v w ，溶剂体积，药材干重) 8 0 乙醇回流提取3 次， 每次2 小时，提取液浓缩、干燥，所得醇提物加适量水溶解， 调p n = 2 ，先用石油醚脱色，再用正丁醇萃取，正丁醇萃取部 分精制得黄酮部分( 1 ) ，余液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱 去除水溶性杂质，再用9 0 乙醇洗脱得黄酮部分( ) ，合并 两部分得到“ I F L E 。总黄酮得率在3 以上，纯度不低于 5 5 。 1 2 动物普通级昆明种小鼠，雌雄各半，体重1 8 一z 2 9 ；普 通级辄一D a w l a y ( S D ) 大鼠，雄性，体重2 0 0 2 2 0 9 ；均由安 徽医科大学实验动物中心提供。实验中未注明时均指实验 前禁食2 小时。 1 3 药物与试荆格列本脲：天津太平洋制药有限公司，批 号0 2 0 9 0 7 。苯乙双胍：南通制药总厂，批号0 1 1 0 1 7 。盐酸二 甲双胍片：中美上海施贵宝制药有限公司，批号0 3 0 3 0 7 8 。盐 酸肾上腺素注射液：上海禾丰制药有限公司，批号0 2 1 2 0 2 7 。四氧嘧啶( a o x a n ) ：S i g m a 公司产品，临用前用生理盐水 配制成1 溶液。链脲佐菌素( 船卿脚衄妇，s r z ) ：S i g m a 公 司，临用前用p H 4 5 的0 1m o l L 柠檬酸缓冲液配制成1 溶 * 安徽省教育厅自然科学研究项目2 0 0 4 k 9 9 5 安徽省高等学校青年教师科研资助计划自然科学项目N o 2 0 0 4 j q l 6 4 安徽医科大学博士科研经费资助计划项目N o X J 2 0 0 4 0 0 4 液。葡萄糖测定试剂盒：上海荣升生物技术有限公司产品。 胰岛素放射免疫分析测定盒：北京北方生物技术研究所。 T G 、T C 、L D L 、I - I D L 测定试剂盒：上海科华东菱诊断用品有限 公司产品。 1 4 仪器F A 2 0 0 4A 电子天平：上海精天天平厂制造。D L 一5 M 低速冷冻离心机：长沙湘仪离心机仪器有限公司产品。 7 2 2 紫外分光光度计：上海分析仪器厂制造。M u h i s k a nM K 3 酶标仪：上海雷勃分析仪器有限公司产品。G C 一9 1 1 T 放射 免疫计数器：中科大科技实业总公司中加光电仪器公司产 品。 2 实验方法 2 1 正常小鼠的分组及给药 正常小鼠5 0 只随机分为对 照组、T F L C 给药组( 1 0 0 、3 0 0 、9 0 0 m # k g d 。1 ) 及格列本脲给药 组( 5 0 n v C k g d 一) 。对照组给予等体积生理盐水( 2 0 m V k g d 。) ，均为灌胃给药，每天1 次，连续5 天，于末次给药后3 小时取血测血糖含量。 2 2 肾上腺素高血糖模型的建立、分组及给药正常小鼠 6 0 只随机分为正常对照组、高血糖模型组、T F L C 给药组 ( 1 0 0 、3 0 0 、9 0 0m g k g d “) 及格列本脲给药组( 5 0 m g k g d 。) 。 正常对照组及高血糖模型组给予等量生理盐水，均为灌胃给 药，每天1 次，连续5 天。于末次给药后1 小时，正常对照组 腹腔注射等体积生理盐水，其余5 组均腹腔注射肾上腺素 3 0 0 t , g l 【g ，诱导肾上腺素性高血糖模型，于注射后3 0 分钟 取血测血糖含量。 2 3 四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的建立、分组及给药正常 小鼠6 0 只，除1 0 只正常对照组外，其余均尾静脉注射1 四 氧嘧啶生理盐水( 1 0 0 m g k g ) 制备糖尿病模型，7 2 小时后( 禁 食1 2 小时) 尾静脉采血测定空腹血糖值，血糖值高于1 6 7 n a n o l L 者纳入实验，根据血糖水平将高血糖小鼠分为5 组， 灌胃给药( T F L C1 0 0 、3 0 0 、9 0 0 m e k g d ，苯乙双胍1 0 0 m g k g d “) 或等体积生理盐水，每天1 次，连续5 天，于末次给药前 万方数据 1 2 0 中国中医药科技2 0 0 8 年3 月第1 5 卷第2 期M a r 2 0 0 8V 0 1 1 5N o 2 禁食1 6 小时，末次给药后1 小时取血测血糖及血清胰岛素 含量。 2 ，4 链脲佐茵素糖尿病大鼠模型的建立、分组及给药 S D 大鼠禁食1 2 小时后腹腔注射链脲佐菌素4 0 , W k g ，7 2 小时 后( 禁食1 2 小时) 尾静脉采血测定空腹血糖值，血糖值高于 1 6 7 r e t o o l L 1 者纳入实验，根据血糖水平将高血糖大鼠分为 糖尿病模型组、T F I J C 给药组( 1 0 0 、2 0 0 、4 0 0 I I l g l 【g d “) 及二甲 双胍给药组( 孤l q g d - 1 ) ，每组1 0 只。另取l O 只同批次 正常大鼠作为正常对照组。正常对照组及糖尿病模型组给 予等体积生理盐水，均为灌胃给药，每天1 次，连续1 4 天。于 末次给药后3 0 分钟，取血测定血糖及血脂。 2 5 测定方法血糖测定：采用葡萄糖氧化酶法。血清 T C 、T G 测定：采用氧化酶法。血清L D L C 、H D L C 测定：采 用直接清除法。血清胰岛素测定：采用放射免疫法。 2 6 统计学处理数据用均数标准差( 茗J ) 表示，采用 S W a S l l 0 进行s t u d e n t t 检验。 3 实验结果 3 1T F L C 对正常小鼠血糖的影响见表l 。 表1m C 对正常t l , f l I 血糖的影响( 二j ) 与空白组比较* P 0 0 5 。* * P ( 0 0 1 3 2 r F L C 对肾上腺素性高血糖小鼠血糖的影响 见表2 。 表2T F L C 对肾上腺素性高血糖小鼠血糖的影响( i s ) 与正常组比较P 0 0 5 ，P 0 ，O l ；与模型组比较* P 0 ，0 5 I K , * P 0 0 1 3 3T F I J C 对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖及血清胰岛素水平 的影响见表3 。 表3 I F I J C 对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖及 血清胰岛素水平的影响( s ) 竺：；兰；墨：鐾 正常组1 0 7 3 5 1 5 4签2 7 4 国 模埠J 姐 1 0 2 6 7 1 - * 3 “ 1 0 1 6 + 3 鲫“ 苯乙双胍 1 0蝴1 9 3 4 6 2 2 * 1 0 8 0 3 趣 T F L C 低剂量组1 0如2 3 9 8 5 1 41 1 9 0 3 8 3 1 下I 中剂量组 1 03 0 02 1 毋4 9 6 1 3 5 3 + 4 复 1 下1 高荆茸组 1 09 0 D 2 1 5 2 1 1 3 7 4 3 1 5 。 O c 1 5 与正常组比较P O 0 5 ，P O 0 1 ；与模型组比较K - P 3 4T F L C 对链脲佐茵素糖尿病大鼠血糖、血脂的影响 见 表4 。 表4T F L C 对链脲佐菌素糖尿病大鼠血糖及血脂的影响( j s ) 删 - 。曼。二。二。二。二。二 正常组1 0 7 + 1 2 81 2 6 t 0 I 0 9 7 0 1 8l 腰tO 1 90 位0 2 9 摸塑组1 01 1 4 膳“2 3 4 0 2 ，41 8 4 1 0 筠40 8 7 O 】D “0 9 3 o r r “ 二_ 双Il O 勰1 9 4 0 4 笛。1 辫O 1 6 1 2 8 0 1 9 。1 墙0 1 8 。0 6 0 0 2 9 。 l c 低科量组1 0m9 3 5 5 1 。1 粥O 1 0 。1 8 l O 笱1 0 7 0 2 D 。0 7 3 0 2 5 I c 中荆量组1 0狮 1 9 醴5 3 。1 硒O 1 9 1 7 5 0 巧 1 1 3 0 2 9 。O 醴0 2 7 I c 高 f I 鼍组1 0 枷1 8 1 9 4 1 7 。1 8 0 02 4 1 3 0 0 1 9 。1 ，2 9 0 2 3 。0 6 3 0 3 0 。 与正常对照组比较P 0 0 5 ，z x z x p 0 0 1 ；与模型组比较* P 0 0 5 4 讨论 老鹰茶含有黄酮、苷类、有机酸、香豆素和鞣质等成分， 其中黄酮类是老鹰茶的主要成分，主要有山柰酚、山柰酚一3 0 一p D 一葡萄糖菅及槲皮素一3 0 一p D 一葡萄糖 苷【2 】。本实验初步研究了T F L C 的降血糖作用及部分机理， 研究结果表明T F L C 能降低正常小鼠的血糖含量，提示其可 通过刺激胰岛1 3 细胞分泌胰岛素产生降糖作用。 肾上腺素通过分解肝糖原使血糖升高D 】，而T F I E 降低 肾上腺素性高血糖小鼠的血糖值，说明其可能具有抑制肾上 腺素引起的肝糖原分解和促进肝糖原合成的作用，从而可减 少血糖的来源，增加血糖的去路，明显降低代谢异常导致的 血糖升高。 四氧嘧啶和链脲佐菌素均为胰岛B 细胞杀伤剂，可选择 性地损伤胰岛B 细胞，引起实验性糖尿病【 。在糖尿病小鼠 和大鼠模型中，T F I _ E 具有显著的降糖作用，同时对四氧嘧啶 糖尿病小鼠血清中胰岛素的释放也具有促进作用。提示其 主要通过保护胰岛p 细胞或促进受损口细胞的修复以及促 进胰岛素分泌、增加血清胰岛素含量而达到降低血糖的目 的。 糖尿病是一种常见多发的代谢疾病，常伴有血脂的升 高，而糖、脂代谢紊乱与糖尿病慢性并发症的发生发展密切 相关瞪6 J 。因此降低血脂对于阻止或延缓并发症、改善糖尿 病患者的预后具有重大意义。本实验采用小剂量链脲佐菌 素制备糖尿病大鼠模型，成模2 周已出现明显的脂代谢紊 乱，模型组的T C 、T C 、L D L 均明显高于正常对照组，而H I ) L 水 平显著降低。与有关报道一致【7 】，经T F L C 治疗后T C 、T G 、 L D L 均显著降低，H D L 水平也显著升高，说明1 下L c 对糖尿病 大鼠血脂紊乱具有一定的调节作用。 综上所述，T F L C 具有良好的降血糖活性，与阳性对照药 磺酰脲类和双胍类均具有相似性。可能是通过直接刺激胰 岛p 细胞释放胰岛素、保护胰岛p 细胞或促进受损p 细胞修 复、抑制过多内源性肝葡萄糖生成和调节脂质代谢紊乱等多 种途径发挥作用，其他可能有关的作用机制如增加胰岛素敏 感性、改善胰岛素抵抗以及对2 型糖尿病的降糖凋脂作用等 有待进一步研究。 糖尿病治疗的最终目标不仅是使血糖水平正常化，而且 是从根本上纠正代谢紊乱，才能避免并发症的发生，故迫切 万方数据 中国中医药科技2 0 0 8 年3 月第1 5 卷第2 期M a r 2 0 0 8V 0 1 1 5N o 2 需要对糖尿病及高脂血症等均有防治作用的药物。T F L C 由 于对糖尿病、脂质代谢紊乱均具有较好的疗效，因而具有开 发成降血糖新药的前景。本文的研究结果为开发和利用皖 南山区老鹰茶提供了一定的科学依据。 参考文献 1 郁建平，叶辉老鹰茶( 豹皮樟) 天然食用色索的初步研究食品 科学，2 0 0 2 ，2 3 ( 2 ) ：4 0 2 郁建平，古练权贵州老鹰茶的化学成分植物资源与环境学报， 2 0 0 1 ，1 0 ( 3 ) ：6 1 3 孙红，宋波，于德伟，等消渴欣胶囊降血糖作用研究中药药理与 脑床，2 0 0 5 ，2 l ( 1 ) ：3 7 4S , & u d e l s k iT T h em e d a m l i 目mda l l o x ma n d 踺m p t 呻i na c t i o ni np 1 1 5o f t h er a tp a n c r e a s e h y 菌o lR ，2 0 0 1 ，5 0 ( 6 ) ：5 3 7 5F 缸两M ，L uH I , ，C i a n f l o n eK I ) t e u b e t e s ，l i p i d sa n da d i p o e y t e 竞嘣 一 g o g u e s B i o c h e mC e l lB i d ，2 0 0 4 ，8 2 ( 1 ) ：1 7 0 6 郝贤，付雪艳益气养阴活血方对2 型糖尿病胰岛索抵抗及血脂 的影响中国中医药科技，2 0 0 6 ，1 3 ( 2 ) ：7 4 7 刘莹。朱东屏，徐向进。等灵菊七提取物对糖尿病大鼠治疗作用 的实验研究解放军药学学报，2 0 0 6 ，2 2 ( 4 ) ：2 8 7 ( 收稿：2 0 昕一0 4 1 2 ) H P L C 法测定宫瘤消胶囊中丹皮酚的含量 陈大中宗鸣王智1张瑞1 ( 黑龙江中医药大学中医药研究院哈尔滨1 5 0 0 4 01 黑龙江中医药大学第二附属医院哈尔滨1 5 0 0 0 1 ) 1 材料与试药 高效液相色谱仪( 美国w 毗商0 0 E 一2 4 8 7 ) ，M i ：t l e m i m u 色谱工作 站( 美国W a t e T a ) ，丹皮酚( 中国生物制品检定所提供，编号：c r 7 8 0 9 7 0 4 ) 。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。宫瘤消胶 囊( 牡丹皮、牡蛎、制香附、三棱、莪术等) ：黑龙江中医药大学中医药 研究院制备提供。 2 方法与结果 2 1 色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，日本 岛津S H I M P A C K 色谱柱( 4 6 m m x 2 5 ( h a m ，5 岬) 。流动相：甲醇一水 ( 4 5 5 5 ) ；流速：1 O r a l r a i n ；柱温：3 0 ；检测波长：2 7 4 n m 。 2 2 对照品溶液的削备精密称取对照品丹皮酚4 7 6 m g ，加甲醇适 量使溶解，并转移至5 0 r a l 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。 2 3 供试品溶液制备取本品1 0 粒，倾出内容物，研细，称取粉末 1 9 ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5 0 m l ，密塞，摇匀，称定 重量，超声处理( 3 0 0 w ，频率5 0 阢) 3 0 分钟放冷。再称定重量，用甲 醇补足减失重量，摇匀，滤过。精密量续滤液5 m 1 置1 0 r n l 容量瓶中。 加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2 4 标准曲线绘辛4 分别精密吸取上述浓度的丹皮酚对照品溶液 0 2 5 051 O 、1 5 、2 0 、2 5 m l 转移至1 0 m l 容量瓶中，用甲醇稀释至刻 度。分别精密吸取不同浓度的丹皮酚对照品溶液各2 0 u l ，注入液相 色谱仪，测定峰面积，计算标准曲线，得回归方程：Y = 一2 5 1 2 9 + 2 0 1 6 7 3 7 3 3 X ( r = 0 9 9 9 7 ) ，结果表明，丹皮酚在0 0 4 7 6 0 4 7 6 p , g 之间