苦荞麦蛋白质对乳腺癌细胞的作用机制.pdf

第 3 O卷第 1期 2 0 1 1年 1月 食 品 与 生 物 技 术 学 报 J o u r na l of Fo o d S c i e n c e a n d Bi o t e c hn o l o g y Vo1 3 0 NO 1 j a n 2 01 1 文 章 编 号 ： 1 6 7 3 1 6 8 9 ( 2 0 1 1 ) O 1 0 0 5 5 0 5 苦荞麦蛋 白质对乳腺 癌细胞 的作 用机制 郭 晓期 ， ( 江南 大 学 食 品学 院 姚 惠 源 ，江苏 无锡 2 1 4 1 2 2 ) 摘 要 ： 研 究 了苦 荞 麦蛋 白质 TB WS P 3 1对 B c a p 3 7乳 腺 癌 细胞 的作 用机 制 。采 用流 式 细胞 仪 分 析测 定苦 荞麦蛋 白质 T B WS P 3 1对 B c a p 3 7细胞 作 用后 ， 对 细胞 周期 及 癌基 因和 抑癌 基 因蛋 白产 生 的影 响 。结果 表 明 ， TB W S P 3 1对 B c a p 3 7细胞 的 增 殖 抑 制 作 用 存 在 时 间 效 应 和 剂 量 效 应 。TB WS P 3 1作 用 于 B c a p 3 7细 胞后 ， G。 G 期 细胞 比例 增 加 ， DNA 合成 期一 S期 细胞 减 少 ， 说 明 细胞 受 阻 于 G。 G 期 ， 阻滞 G。 G 期 的细胞 向 S期 转化 ， 细胞 的 恶性 增 殖相 应 减慢 。TB W S P3 1可 以上调 抑 癌 基 因蛋 白 F a s的表 达 ， 下调 癌基 因蛋 白 b c l - 2的 表达 。 关键词 ：苦 荞麦 ；蛋 白质 ；乳 腺癌 细胞 ；作 用机 制 中图分 类 号 ： Q 2 6 文献 标识 码 ：A S t u d y o n t h e M e c h a ni s m o f Ta r t a r y Bu c kwhe a t Pr o t e i n o n Br e a s t Ca n c e r Ce l l s GU o Xi a o na (S c ho ol of Foo d Sc i e n ce a nd Te c hn ol ogy， YA 0 H ui y ua n J i a n g n a n Un i v e r s i t y ，W u x i 2 1 4 1 2 2 ，Ch i n a ) Ab s t r a c t ： Th e m e c ha n i s m of t a r t a r y bu c kwh e a t p r o t e i n on b r e a s t c a n c e r c e l l s wa s s t u d i e d b y Fl ow c y t o m e t r y ( FCM ) Th e i n hi bi t i on e f f e c t of TBW SP3 1 on t he p r ol i f e r a t i o n of Bc a p3 7 e e l l e xi s t e d i n do s e a nd t i m e d e pe nde nt m a n ne r s Af t e r t r e a t me nt wi t h TBW S P3 1。Bc a p3 7 e e l l r e s u l t e d i n t he a c c u mu l a t i o n o f t h e c e l l i n Go Gl ，a n d p r e v e n t e d t h e c e l l g r o wi n g f r o m G。 o1 p h a s e t o S p h a s e The c e l l c y c l e wa s r e l a t e d t o G1 ph a s e， a n d t he l o ng e r G1 p ha s e c oul d s l ow t he s pe e d o f c e l l ma l i gn a nt pr o l i f e r at i o n Th e e xp r e s s i o n o f bc l 一 2 a nd Fa s we r e de t e c t e d q ua n t i t at i v e l y b y FCM Ba s e d o n t he a bo v e r e s u l t s，i t c a n b e c on c l u de d t ha t t he a n t i t u m o r me c ha ni s m wa s a s s oc i a t e d wi t h t h e i n c r e as i n g e xp r e s s i o n o f Fa s a nd t he d e e r e a s i n gd e xp r e s s i o n o f b e l 一 2 Ke y wo r ds ：t a r t a r y buc kwhe a t ，pr o t e i n，br e a s t c a n c e r c e l l s， m e c ha n i s m 为 了对 付癌 症 给 人 类 健康 所 造 成 的 巨大 威 胁 ， 人们 一 直 尝试 着 从 各 种 生 物 中寻 找 天 然 抗 肿 瘤 活 性 物质 。我 国有 着 丰 富 的天 然 生 物 资 源 ， 从 各 种 生 物 中 筛 选 安 全 、 高 效 、 低 毒 的天 然 抗 肿 瘤 活 性 成 分 成 为近年 来研 究 的热 点 。 众 多研究 表 明 ， 肿 瘤 的发 生 、 发 展 不 仅 与 肿 瘤 细胞 分化 异 常 、 细 胞 增 殖 过 度 有 关 ， 而 且 与 细 胞 凋 亡减 少 有 关 。 细胞 凋 亡 ( a p o p t o s i s ) 又 称 为 细 胞 的程 序性 死亡 ， 是 受 多 种 基 因调 控 的一 种 主 动性 细 胞 死 亡方 式嘲 。近 年来 ， 有 关 细 胞 凋 亡 的 分子 机 制 收 稿 日期 ： 2 0 1 0 0 1 2 2 基金项 目： 国家 自然科学基金项 目( 3 0 9 0 0 9 9 9 ) ； 高等学 校博士学科点 专项科研 基金项 目( 2 0 0 8 0 2 9 5 1 0 0 3 ) 。 作者简介 ： 郭 晓娜( 1 9 7 8 一) ， 女 ， 河南新 密人 ， 工学博 士 ， 副教授 ， 主要从 事功能性食 品研究 。 Ema i l ：g x n 1 9 7 8 h o t ma i l c o r n 5 6 食品 与 生 物技术 学 报 第 3 O卷 研 究 较 多 ， 已 发 现 多 种 蛋 白产 物 参 与 细胞 凋 亡 过 程 。如 t e d基 因 家 族 、 b c l 一 2基 因 家 族 、 p 5 3基 因 、 I C E基 因家族 、 F a s 基 因 、 my c基 因家 族 等 。细胞 凋 亡的调 节基 因大多 为肿 瘤 基 因 ， 如原 癌 基 因和 肿 瘤 抑 制基 因 ， 或为 病毒 基 因等 。它们 对 细胞 凋 亡 起 着 正或 负 的调 节 作 用 。前 期 研 究 采 用 体 外 细 胞 培 养 的方 法从 苦养 麦 水 溶 性 蛋 白组 分 中筛 选 得 到 了具 有抗肿 瘤活性 的有 效 组分 ， 作 者 用 流式 细 胞仪 分 析 测定细 胞周期 及癌 基 因 和抑 癌基 因蛋 白的表 达 ， 研 究 苦养麦 蛋 白对乳腺 癌细胞 的作 用机 制 。 1 材料与方法 1 1苦荞 麦抗肿 瘤蛋 白的 制备 采 用硫 酸铵分 级沉 淀 、 D E AE S e p h a r o s e F F离 子 交换 色谱 、 S e p h a d e x G - 1 0 0凝 胶 过滤 色 谱对 苦 荞 麦水 溶性 蛋 白质 逐 步 分 离 纯 化 ， 并 结 合 细 胞 实 验 ， 筛选 出苦养 麦抗 肿瘤 蛋 白 T B WS P 3 1 。 1 2细胞培 养 R P MI 1 6 4 0培 养 液 用 1 mo l L HC 1 或 Na OH 调 p H值至 7 0 7 2 ， 过滤除菌， 用前加入质量分 数 1 O 小 牛血清 ( F C S ) ， 质量 分数 1 2 0 0 mmo l L 谷 氨酰胺 ， 1 0 0 U mL 的青 霉 素 和 1 0 0 U mL链 霉 素 ， 配制成 完全 培养 液 。肿瘤 细 胞 生 长在 上 述 完 全 培养基中， 于 3 7， 体积分数 5 C O 。 ， 饱和湿度条 件下 培养 ， 传 代至 旺盛生 长 。 1 3 流 式细胞 仪测 定细胞 周期 流式 细胞 术 ( F l o w C y t o me t r y ， F C M) 是将 流 体 喷射技术 、 激 光光学技术、 电子技术和计算机技术 集为一体的一种新技术 ， 可以对单个细胞或其它生 物粒子进行定量分析和分选。它能高速分析上万 个细 胞 ， 并 能 同时 测量 细胞 的物 理 或 化 学 性 质 ， 如 粒子 的大 小 、 体积 、 内部 结构 、 DNA、 RNA、 蛋 白质 、 抗 原等 ， 进行 多信息 分析_ 4 。 1 )细胞 培养 取 对 数 生 长期 的 B c a p 3 7细胞 ， 接种 于 细胞 培 养 瓶 中， 细胞 浓 度 为 41 0 个 mL， 2 4 h后加 入 T B WS P 3 1溶 液 ， 空 白对 照 不 加 样 品 ， 于 3 7 ， 体 积分数 5 C O 。 及 饱 和湿 度 条件 下 培养 2 4 h、 48 h。 2 )单 细胞悬 液 制备 将 不 同培 养 时 间 的细 胞 用 胰 蛋 白酶 消 化 ， 收 集 于 离 心 管 内 ( 8 0 0 r mi n ， 5 mi n ) ， 沉 淀用 P B S洗 涤 2次 ( 8 0 0 r mi n ， 5 mi n ) ， 弃 去上 清 液 ， 将 细 胞 沉 淀 重新 悬 起 ， 缓 慢 滴加 体 积 分 数 7 O 乙醇 ( P B S配 制 ， 2 O 预 冷 ) ， 同 时混 匀 ， 置冰箱 内固定 2 4 h以上 。测定 前离心 弃去 固定 液 ， 用 P B S漂洗 2次 ， 然后 离 心去 除 上 清 液 ， 细 胞 加 1 mL P I 染 液 ( O 0 1 mo l L、 p H7 2 ， P B S配 制 ， 含 1 0 0 g mL P I ， 1 0 0 g mL R Na s e A) ， 吹 打 分 散 ， 4 暗染 3 0 mi n ， 2 0 0目滤 网过滤 ， 上机 检测 。 3 )细 胞 周 期 分 析 数 据 处 理 采 用 B D 公 司 C e l l fi t 软 件 ， 每 个 样 品 分 析 8 0 0 0 1 0 0 0 0个 细 胞 。 1 4流式细 胞仪 测定 基 因蛋 白的表达 取对 数 生 长 期 的 B c a p 3 7细 胞 ， 接 种 于 细 胞 培 养瓶 中 ， 细 胞 浓 度 为 5 1 0 个 mL， 2 4 h后 加 入 T B WS P 3 1 溶 液 ， 空 白对 照不加 样 品 ， 于 3 7 ， 体 积 分数 5 C O 及 饱 和湿度 条件下 培养 。4 8 h后用 胰 蛋 白酶消化 收集 细 胞 ， P B S洗 涤 两 次 ( 8 0 0 r rai n ， 5 ra i n)。 1 )调整 细 胞 浓 度 为 1 x 1 0 。 mL， 用 体 积 分 数 4 多 聚 甲醛 ( P B S 配 制 ) 室 温 固定 1 5 mi n ( 8 0 0 r mi n ， 5 rai n ) ， 然后 P B S洗 涤 细 胞 1 次 ( 8 0 0 r rai n ， 5 ra i n)。 2 )用 体 积 分 数 0 2 的 Tr i t o n( P B S配 制 ) 2 mI 重悬 细胞 ， 4放 置 2 O rai n ( 8 0 O r mi n ， 5 mi n ) ， 然后 P B S洗 涤 细胞 1 次 ( 8 O O r rai n ， 5 rai n ) ， 进 行免 疫荧 光染 色 。 3 )分别 加 入 b c l 一 2和 F a s鼠抗 人 单 克 隆抗 体 ( 使用 前 1：4 0稀 释 ) 1 0 0 L， 3 7 水 浴 3 0 mi n ， P B S洗涤细胞 2 次 以除去多余 的一抗 ， 加 1 0 0 L荧 光 标记 的 山羊 抗 小 鼠 F I TC I g G( 使 用 前 1：2 0稀 释 ) ， 4避 光放 置 3 0 mi n ， P B S洗涤 细胞 2次 以除 去多余 的二 抗 ， 加 1 mL P B S分 散 ， 筛 网 过滤 ， 用 流 式细胞 仪 进 行 测 定 ， 光 源 为氩 离 子 激 光 器 ， 激 发 波 长为 4 8 8 n m。F I TC发 出的 绿色 荧 光 以 5 2 0 r i m 的 带通滤片进行荧光信号的检测 ， 用相应的数据软件 进 行数 据处 理 ， 得 出 各 基 因蛋 白的 阳性 细 胞 比率 ， 每个 样 品分析 8 0 0 0 1 0 0 0 0 个细 胞 6 。 2结 果 与 讨 论 2 1 T B WS P 3 1对 Bc a p 3 7细胞周 期 的影 响 DNA是染 色 体 的 主 要 构 成 物 质 ， 是 基 因 的 主 要 化学 成 分 ， 细 胞 的 分 裂增 殖 实 质 上 是 DN A 的 复 制 。肿瘤 细 胞 由于 调 节 与 生 长 控 制 障碍 而 获 得 无 限制 恶性 增殖 的能 力 ， 其 细胞 需 要 大量 合 成 核 酸 以 满足 迅 速增 长 的需 要 ， 因此 细 胞 DNA 含 量 的变 化 是一项 直 接 反 映 肿 瘤 细 胞 增 殖 能 力 的重 要 生 物 学 指 标 。 用 F C M 检测 细胞 周 期 与 D NA 含 量 的样 品 制 备方 法有 两种 ： 一种 是 活细胞 直接用 去 污剂 ( 1 0 T r i t o n X 一 1 0 0) 打孔 ， 然后 用相 应 的荧光 染料染 色后 第 1期 郭 晓娜 等 ： 苦 荞 麦蛋 白质 对 乳腺癌 细 胞 的作 用机 制 5 7 上 机检 测 。这 种方 法 制 备 的标 本 细 胞 碎 片 较 多 ， 细 胞 保存 时 问短 ， 而 活细 胞 又 必 须及 时处 理 和上 机 分 析 ， 否 则会 影 响样 品测 定 结 果 ， 因此 ， 应 用 上 受 到 很 大 的 限制 。另 一种 方 法 是用 固定 剂 固定 细 胞 ， 检 测 时 洗去 固 定 液 ， 用 荧 光 染 料 染 色 后 上 机 检 测 。 目 前 ， 以 F C M 测定 细胞 周 期和 DNA 含量 使用 的荧 光 染 料 为碘 化 丙 啶 ( P I ) 。该 染 料 为 插 入 性 核 酸 荧 光 染 料 ， 可定 量地 插 入核 酸 ( DNA、 R NA) 双 链 螺 旋 的 碱 基对 中并 与 之 结 合 ， 但 不 能 穿 过 完 整 的细 胞 膜 。 因此 ， 用 该 染料 染 色 的细 胞 必 须 经 打孔 剂 打 孔 或 固 定 剂 固定 ， 使细 胞膜 皱 缩 ， 以利 于 染 料 进 入 细 胞 内 。 乙醇是 目前 流式 细 胞 术 中最 常用 的 固定 剂 ， 固定 时 间 至少 要 2 4 h以上 j 。 B c a p 3 7细胞 经 不 同浓 度 的 T B WS P 3 1作 用 不 同时 问后 ， 胰 蛋 白酶 消化 收 集 细胞 ， 固定 ， 染 色 后 采 用 流式 细胞 仪进 行 细胞 周期 分 析 ， 见 表 1 。 表 1 TB WS P 3 1对 B c a p 3 7细 胞 周 期 影 响 Tab 1 Ef f e c t o f TBW S P31 t r e a t men t O N t he Bc a p3 7 c e l l c y - 从 表 1可 以看 到 ，B c a p 3 7细 胞 经 5 g mI 和 1 0# g mL的 TB WS P 3 1作 用 2 4 h后 ， G 。 g 期 细 胞所 占 比例 由空 白对 照组 的 5 3 6 增加 为 5 7 3 、 6 8 4 ， S期 细胞 所 占 比例 由空 白对 照 组 的 3 3 5 减少 为 3 1 4 、 2 8 9 ， G： M 期 细 胞 所 占 比 例 明 显降 低 ， 分别 为 1 2 9 、 1 1 3 和 2 7 。5 g mL 和 1 0 g mL的 T B WS P 3 1继续 作 用 至 4 8 h ， G。 G 期细 胞 所 占 比例 分 别 上 升 为 7 0 9 、 7 7 6 ， S期 分别 降低 为 2 8 5 、 2 1 8 ， G M 期 分 别 减 少 至 0 6 、 0 7 。从 细胞 周期 分布 可知 ， TB WS P 3 1对 B c a p 3 7细胞 的增 殖 抑 制 作 用 存 在 时 间 效 应 和 剂 量 效应 。 通 过 细 胞 周 期 分 析 发 现 ， TB WS P 3 1作 用 于 B c a p 3 7细 胞后 ， G 。 G 期 细胞 比例 增 加 ， DNA 合 成 期 即 S期 和 G M 期 细胞 比例 减 少 ， 说 明细 胞 受 阻 于 G。 g 期 ， 可 阻滞 G。 O 期 的 细 胞 向 S期 转 化 。 细胞 周 期 的 长 短 主 要 决 定 于 G 期 ， G 期 阻 滞 使 Bc a p 3 7细胞 周 期延 长 ， 细胞 的恶 性 增殖 相应 减 慢 。 2 2流 式 细 胞 仪 测 定 Bc a p 3 7细 胞 中 基 因蛋 白 的 表达 2 2 1 流 式 细 胞 仪 测 定 B c a p 3 7细 胞 中 b c l 一 2基 因 蛋 白的 表达b c l 一 2基 因 是 最初 从 小 鼠 B淋 巴瘤 中 分离 得 到 的原 癌 基 因 ， 定位 于染 色体 1 8 q 2 1 ， 含 有 3 个外 显 子 ， 2个 开放 阅读 框架 ， 编码 相对 分 子 质 量为 2 5 0 0 0 ， 由 2 3 9 个 氨 基 酸 组 成 的 蛋 白质 。免 疫 组 化 及 电子 显微镜 观 察 表 明 ， b c l 一 2蛋 白位 于 核 膜 、 内质 网及 线粒 体膜 上 。b c l 一 2蛋 白能 够延 长细 胞 寿命 ， 有 阻止 细胞 凋 亡 的能力 。 B c a p 3 7细胞 经不 同浓 度 的 TB W S P 3 1作 用 4 8 h后 ， 胰 蛋 白 酶 消 化 收 集 细 胞 ， 固 定 ， 经 b c l 一 2和 F I TC I g G 标记 后 ， 流 式 细 胞 仪 检 测 阳性 细 胞 数 和 平均 荧光 强度 ， 见 图 2 。对 照组 表达 b c l 一 2蛋 白的 阳 性细 胞 比率 为 7 1 5 ， 加样 组 ( 5 , g mL ) 表 达 b c l 一 2 蛋 白 的 阳 性 细 胞 比 率 为 4 6 7 ， 加 样 组 ( 1 0 t t g mL ) 表 达 b e l 一 2蛋 白 的 阳性 细 胞 比率 为 3 2 3 ， 说 明 B c a p 3 7细 胞 经 T B WS P 3 1作 用 后 ， b c l 一 2蛋 白表 达水 平 降低 ， 即 b c l 一 2蛋 自 阻止 细胞 凋 亡 的能 力 下 降 ， 并 且 存 在 剂 量 依 赖 性 。另 外 ， 从 图 中 也 可 以看 到 ， 加 样 组 的荧光 吸 收左 移 ， 平 均荧 光 强度变 小 。 盈 恳 恳 相 对 荧 光 强度 ( a )对 照 相 对 荧 光 强度 ( b )样 品质 量 浓 度 5 ug mL 5 8 食品 与 生 物技术 学 报 第 3 O卷 籁 碧 相对 荧 光 强度 ( c )样 品质 量 浓度 1 O| I g mL 图 1流式细胞 仪测定 B c a p 3 7细胞 中 b c l - 2基 因蛋白 的表达 Fi g 1 Th e e xp r e s s i o n o f b c l 。 2 p r o t e i n o f Bc a p3 7 c e l l wi t h Fl o w Cy t o me t r y 2 2 2流 式 细胞 仪 测定 B c a p 3 7细 胞 中 F a s基 因 蛋 白的表达 F a s 蛋 白属 于肿瘤坏 死 因子 ( TNF ) 和 神经生 长 因子( NGF ) 受 体家 族 的 细胞 表 面分 子 ， 是 一 种细胞凋亡信号受体。F a s 分子主要分布于活化 的 T、 B淋巴细胞等免疫细胞的表面 ， 在人体各个组 织 器官 以及多种 肿瘤 细胞表 面都 有表 达 。它 和 F a s 配体结合后 ， 其胞质经特殊胞 内蛋 白介导 ， 直接激 活凋 亡基 因产 物 ， 诱 导 F a s蛋 白所 在 细胞 的 凋 亡 。 有研究 表 明 8 ， 在 人 类 乳 腺 、 前 列 腺 、 结 肠 、 食 管 等 部 位 的恶 性 肿瘤 中 F a s的转 录 水 平 下 调 ， 从 而 使 F a s 抗原表 达下 降 。 B c a p 3 7细胞经不 同浓度的 TB WS P 3 作用 4 8 h后 ， 胰 蛋 白 酶 消 化 收 集 细 胞 ， 固 定 ， 经 F a s和 F I T C I g G标记后 ， 流 式 细 胞 仪 检 测 阳 性 细 胞 数 和 平均荧 光强 度 ， 见 图 3 。 辐 舞 聂 相 对 荧光 强 度 ( a )对 照 籁 兽 暴 籁 翟 最 相 对 荧光 强度 ( b )样 品质 量 浓度 5 l l g mL 相 对 荧光 强度 ( c )样品质量浓度 l O u g m L 图 2流式细胞 仪测定 B c a p 3 7细胞 中 F a s 基 因蛋 白的 表 达 Fi g 2 Th e e x pr e s s i o n of Fa s pr o t e i n o f Bc a p 37 c e l l wi t h Fl ow Cy t o m e t r y 对 照 组 表 达 F a s蛋 白 的 阳 性 细 胞 比率 为 2 8 3 ， 加 样组 ( 5 b L g mL) 表 达 F a s 蛋 白 的阳 性 细 胞 比率为 1 3 3 ， 加 样 组 ( 1 0 g mL ) 表 达 F a s蛋 白的阳性 细胞 比率为 2 7 0 。另 外 ， 从 图 中也 可 以 看 到 ， 加样 组 的 荧 光 吸 收 明 显 右 移 ， 平 均 荧 光 强 度 增 大 。这 说 明 B c a p 3 7细 胞 经 TB WS P 3 1作 用 后 ， F a s 蛋 白表 达水 平 显 著 增 加 ， 促 进 细 胞凋 亡 的能 力 增强 ， 并且 存 在剂量 效应 。 3 结 语 采用流 式 细 胞 仪 分 析 测 定 细 胞 周 期 及 癌 基 因 和抑 癌基 因 蛋 白 的 表 达 ， 研 究 苦 养 麦 蛋 白 质 T B - WS P 3 1 对 B c a p 3 7细胞 的作用 机制 ： 1 )采 用 流 式 细 胞 仪 P I单 染 色 法 检 测 TB - WS P 3 1 对 B c a p 3 7细 胞 周期 的影 响 ， 结 果 发 现 TB WS P 3 1 对 B c a p 3 7 细 胞 的增 殖抑 制作 用存在 时 间效 应 和剂量效 应 。T B WS P 3 1作 用 于 B c a p 3 7细 胞后 ， 第 1期 郭晓 娜等 ： 苦 荞麦 蛋 白质 对乳腺 癌 细胞 的作 用机 制 5 9 G 。 G 期 细胞 比例 增 加 ， D NA 合 成 期一 S期 细 胞 减 少 ， 说 明细胞 受 阻于 G 。 G 期 ， 可 阻滞 G 。 G 期 的细 胞 向 S期 转 化 。细胞 周期 的长短 主要 决定 于 G 期 ， G 期 阻滞 使 B c a p 3 7细胞 周 期 延 长 ， 细胞 的恶 性 增 殖 相应 减慢 。 参考 文献 ( Re f e r e n c e s ) ： 2 )采 用 流 式 细 胞 仪 F I TC - I g G 标 记 法 检 测 TB W S P 3 1对 B c a p 3 7细胞 作 用 后 癌 基 因 和抑 癌 基 因的变 化 ， 结果 发 现 T B WS P 3 1可 以上 调 抑 癌 基 因 蛋 白 F a s的表 达 ， 下调癌 基 因蛋 白 b c l 一 2的表 达 。 1 涂水平细胞凋亡 与胃肠疾 病I- J 内镜 ， 1 9 9 7 ， 3( 1 ) ： 6 1 6 4 T u S h u i p i n g C e l l a p o p t o s i s a n d g a s t r a l d i s e a s e J I n n e r mi r r o r ，1 9 9 7 ， 3( 1 ) ： 6 1 6 4 2 姜泊 细胞凋亡基础 与临床 M 北京 ： 人 民军医 出版社 ， 1 9 9 8 ， 2 5 5 E 3 孙震 ， 姚惠源玉米蛋 白粉 中玉米 黄素对人 口腔鳞癌 细胞株 KB增殖的抑制 J 食 品与生物技术学报 ， 2 0 0 5 ，6 ： 3 4 _ 3 7 S UN Z h e n ，YAO H u i y u a n I n h i b i t o r y e f f e c t s o f z e a x a n t h i n f r o m c o r n g l u t e n me a l o n h u ma n o r a l s q u a mo u r c e l l c a r c i n o ma J J o u r n a l o f F o o d S c i e n c e a n d B i o t e c h n o l o g y ，2 0 0 5 ， 6 ： 3 4 3 7 ( i n C h i n e s e ) 4 张艺流式细胞仪构成与工 作原理_ J 中国医疗 设备 ， 2 0 0 5 ，2 0( 8 ) ： 2 5 2 6 Z HA NG Y i Th e i n t r o d u c t i o n t o t h e f l o w c y t o me t e r - J C h i n a Me d i c a l E q u i p m e n t ，2 0 0 5 ， 2 O( 8 ) ： 2 5 2 6 ( i n C h i n e s e ) 5 Ni c o l e t t i I ， Mi g l i o r a t i G， P a g l i a c c i M C A r a p i d a n d s i mp l e me t h o d f o r me