龙头鱼中脂肪酸的GCMS分析.pdf

2 0 1 O年 5月 第 2 期 吉林师范大学学报 ( 自然科学版) J o u r n a l o f J i l i n N o r m a l U n i v e r s i t y( N a t u r a l S c i e n c e E d i t i o n ) N o 2 Ma y 2 0 1 0 龙头鱼 中脂肪 酸的 G C MS分 析 孙丽阳， 刁全平 ， 陶 静 ( 鞍 山师范学院 化学系， 辽 宁 鞍山 1 1 4 0 0 5 ) 摘 要 ： 采用 B J i g h D y e r 法和氢氧化钾 甲醇法对龙头鱼的脂肪酸成分进行提取和甲酯化后， 利用气相色谱一 质 谱对其中的脂肪酸成分进行了分析测定 结果表明： B 1 i g h - D y e r 法具有较高的提取效率； 在检出的 1 5 种脂肪酸中， 不饱和脂肪酸占多数， 其中的4 ， 7 ， 1 0 ， 1 3 ， 1 6 ， 1 9 。 二十二碳六烯酸甲酯和 5 ， 8 ， 1 1 ， 1 4 ， 1 7 二十碳五烯酸甲酯的相对 含量分别达到 9 3 7 和 5 5 5 关键词 ： 龙头鱼； 脂肪酸； G C M S 中图分类号 ： 0 6 5 7 6 3 ； Q 9 4 9 7 8 3 5 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1 6 7 4 3 8 7 3 一 ( 2 O L O ) O 2 0 0 9 9 0 3 龙头鱼学名 H a r p o d o n n e h e r e u s ， 系我国名贵鱼类 ， 分布于印度北部的河 口， 为我国沿海常见食用鱼类 体长达 4 1 c m， 色暗 ， 淡灰色或褐色 ， 具黑色细点 口大， 尾鳍叉形 ， 胸鳍及腹鳍大 龙头鱼水分多， 骨刺松软 ， 味美 ， 可鲜食或干制 多不饱和脂肪酸能使胆 固醇酯化 ， 降低血液 中胆固醇和甘油三酯 ， 提高脑细胞的活 性， 增强记忆力和思维能力 海洋生物体内通常含有丰富的多不饱和脂肪酸_ 1 之 J ， 因此对龙头鱼脂肪酸的研 究具有很高的医用价值 目前 ， 关于辽宁龙头鱼中脂肪酸成分和含量仍未见报道 本文采用 B l i g h D y e r 提取法_ 3 J 对龙头鱼中的 脂肪酸成分进行提取 ， 然后进行氢氧化钾一 甲醇法进行 甲酯化处理 ， 以气相色谱一 质谱联用仪对其进行分析 测定 4 - 5 ， 分离鉴定其中的脂肪酸成分 ， 为海产品脂肪酸的深加工提供一定 的参考依据 1 材料与方法 1 1 主要材料与试剂 原料 ： 龙头鱼 ， 购 自鞍山水产品市场 ， 将样 品洗净 ， 去皮取鱼肉， 将其剁切碎 ， 备用 主要试剂 ： 甲醇 、 氯仿 、 正 己烷 、 无水硫酸钠均为分析纯( 天津市光复精细化工研究所) ； 氢氧化钾( 分析 纯 ， 沈阳新兴试剂厂 ) ； 水为二次蒸馏水 1 2 主要仪 器 美国惠普公司 H P 6 8 9 0 H P 5 9 7 3 G C M S气相色谱 质谱联用仪 ； R E 5 2 C旋转蒸发器 ( 上海亚荣生化仪 器厂 ) ； 8 5 1 型恒温磁力搅拌器( 常州国华电器有限公司) 1 3 方 法 1 3 1 龙 头鱼 中的 脂肪 酸提 取 采用 B l i g h D y e r 提取法对龙头鱼中的脂肪油进行提取 称取 2 0 1 8 g 龙头鱼的鱼 肉于 5 0 0 m L锥形瓶 中， 加入 1 0 0 m L甲醇， 5 0 m L氯仿 ， 4 0 m L二次蒸馏水 ， 磁力搅拌器搅拌 2 0 h后再加入 5 0 m L氯仿， 5 0 m L 水 ， 抽滤后分液 取下层有机相 ， 旋转蒸发仪旋干溶剂 ， 得黄色油状物质 ， 出油率为 1 0 0 6 1 3 2 氢氧化钾 甲醇酯化法 取 0 5 m L脂肪酸置于 1 0 m L容量瓶中， 依次加入 8 m L正己烷和 2 m L氢氧化钾( 0 5 m o l L ) 一 甲醇溶 液 ， 水浴 7 0 c I = 下 回流 2 0 m i n ， 然后加入 1 2 m L蒸馏水 ， 超声提取 5 m i n 最后以 3 0 0 0 r m i n离心 1 0 m i n ， 取上 层有机相用无水硫酸钠过夜干燥 ， 做 G C MS 分析 1 3 3 G C M S条件 气相色谱条件 ： 色谱柱为 H P 5弹性石英毛细管柱 ( 2 5 i n 0 2 0 m ll l 0 3 3 t a n ) ； 载气为 H e 气 ； 载气流 收稿 日期 ： 2 0 1 0 0 4 - 0 1 第一作者简介 ： 孙丽阳( 1 9 7 6 一 ) ， 女 ， 辽 宁省鞍 山市人 ， 现为鞍山师范学 院化学 系实验师 研究方向 ： 天然产物分析 99 量为 1 m L m i n ； 进样 口温度为 3 0 0 o C； 分流 比为 1 0 0： 1 ； 程序升温条件 ： 1 0 0 C - 2 0 0( 升温速率 1 0 C m i n ) ， 2 0 0 C - 2 8 0( 升温速率 5 C m i n ) ， 2 8 0保持 5 m i n 进样量为 O 4 ， 溶剂延迟 3 m i n 质谱条件 ： 离子源为 E I 源 ， 离子源温度为 2 3 0 o c； 接 口温度为 2 3 0 o C； 倍增器电压为 1 9 8 8 V； 发射电流 强度为 3 4 6 ； 扫描范围 2 05 0 0 A in u ； 电离电压为 7 0 e V 2 结果与讨论 用气相色谱 质谱联用仪分别对酯化后 的样 品进行分析分析 ， 通过 G 1 7 0 1 B A化学站检索 N I S T 9 8 谱图 库， 并且与美国 E P A N I H质谱 图进行对照 ， 确认各样品中的化学成分 龙头鱼中脂肪酸 甲酯的总离子流图 见图 1 表 1 给出了龙头鱼提取物酯化后得到的脂肪酸甲酯组成和相对百分含量 由表 1可以看 出， 采用 B l i g h D y e r 提取方法共检 出脂肪酸 1 5种 ， 其 中饱和脂肪酸 7种， 单不饱和脂肪酸 4种 ， 多不饱 和脂肪酸 4 种 不饱和脂肪酸 甲酯的相对百分含量为 5 0 2 4 ， 其 中多不饱和脂肪酸 甲酯为 1 8 0 4 主要的不饱和脂 肪酸甲酯成分为 9 一 十八碳烯酸 甲酯 ， 含量达到 1 6 1 9 ； 其次 为 9 十六碳烯 酸甲酯 ， 含量分别达到了 1 3 4 8 多不饱和脂肪酸甲酯中 4 ， 7 ， 1 0 ， 1 3 ， 1 6 ， 1 9 一 二十二碳六烯酸甲酯含量最高 ， 含量为 9 3 7 ， 其次为 5 ， 8 ， 1 1 ， 1 4 ， 1 7 二十碳五烯酸甲酯， 含量为5 5 5 4 ， 7 ， 1 0 ， 1 3 ， 1 6 ， 1 9 二十二碳六烯酸别名 D H A ， 对人体， 尤其 对脑部有保健作用 ， 俗称“ 脑黄金 ” 5 ， 8 ， 1 1 ， 1 4 ， 1 7 二十碳五烯酸别名 E P A， 其性质与 D H A相似 此两种物 质对血液有抗凝作用， 可 以降低血小板粘度 ， 改善血清质量 ， 降低血液总粘度 ， 降低血糖 ， 降低肝脏 中的脂 肪， 保护脑血管， 也有抗过敏及抗癌作用 ， 也可提高记忆力和视力 由于有上述功能 ， 大量用作保健食品及 营养食品， 添加在孕妇和婴儿奶粉 中， 也用作医药 ， 治疗动脉硬化及血栓l 6 j 9 ， 1 2 十八碳二烯酸甲酯含 量 为 1 2 8 ， 9 ， 1 2 十八碳二烯酸别名亚油酸 ， 亚油酸在人体内可被转化成 一 亚麻酸， D H 7 亚麻酸和花生四 烯酸， 也可作为能量使用或贮存 亚油酸的主要生理功能是 ： 作为某些生理调节物质 ( 如前列腺素) 的前体 物质； 亚油酸可使胆固醇脂化， 从而降低血清和肝脏中的胆固醇水平， 对糖尿病也有预防作用L 7 ； 亚油酸能 1 3 e + 0 7 1 2 o + 0 7 1 1 o + 0 7 1 + 0 7 90 0 0 0 0 0 童 7 0 0 0 0 0 0 5 0 0 O o 0 O 3 0 0 0 0 0 0 l 0 0 0 0 0 0 4 O 0 8 0 0 1 2 0 0 1 6 0 0 2 0 0 0 2 4 0 0 2 8 0 0 T i mo mi n 图 1 龙头鱼脂肪酸 甲酯总离子流色谱图 表 1 龙头鱼 中脂肪酸甲酯组成及相对含量 1 0 0 抑制动脉血栓的形成 ， 因而可预防心肌梗塞的发生 ； 亚油酸对维持机体细胞膜功能也起着重要作用 另外 ， 在龙头鱼脂肪酸中还发现了 l 5 二十四碳烯酸， 其含量为 0 5 3 该脂肪酸又名神经酸， 具有促进神经细 胞生长发育的功能， 是各国科学家公认的能修复疏通受损大脑神经通路 神经纤维， 并促使神经细胞再生 的双效物质 8 1 3 结论 本研究首次对龙头鱼中的脂肪酸成分进行了详细分析 本文采用 B l i g h D y e r 方法提取其 中的脂肪酸 成分， 该方法在提取过程中为三相体系， 甲醇对龙头鱼肉中的蛋 白质发生作用 ， 更多的脂肪油析出， 提高了 样品的得油率 ， 同时该方法为低温提取 ， 尽量避免多不饱和脂肪酸在提取过程中的变性 利用氢氧化钾 甲 醇法甲酯化后检出了 1 5种脂肪酸甲酯 ， 不饱和脂肪酸甲酯 的相对百分含量为 5 0 2 4 其 中的 4 ， 7 ， 1 0 ， 1 3 ， 1 6 ， 1 9 二十二碳六烯酸甲酯( D H A) 、 5 ， 8 ， 1 1 ， 1 4 ， 1 7 二十碳五烯酸甲酯和 l 5 二十四碳烯酸甲酯的含量相对 比较高 ， 由于其对人的脑部具有 良好的营养作用 ， 因此本研究结果将对龙头鱼的药用 、 食用等方 面的进一 步开发利用提供科学依据 参考文献 1 马亭， 陈文锐， 胡国昌， 等 深海鱼油中脂肪酸的分析 J 分析化学， 1 9 9 9 ， 2 7 ( 4 ) ： 4 1 5 4 1 8 2 曾淑兰， 关紫峰， 蔡云萍， 等 深海鱼油、 海豹油脂肪酸组份的分析研究 J 质谱学报， 1 9 9 9 ， 2 0 ( 1 ) ： 7 O 7 5 3 刘希光 ， 于华华 ， 赵增芹 ， 等 海蜇不同部位脂肪酸的组成研究 J 分析化学 ， 2 0 0 4 ， 3 2 ( 1 2 ) ： 1 6 3 51 6 3 8 4 卫煌英， 曹艳平， 周永浩， 等 河豚鱼脂肪酸的气相色谱一 质谱分析 J 分析化学， 1 9 9 8 ， 2 6 ( 1 2 ) ： 1 5 0 1 1 5 0 3 5 回瑞 华 ， 侯冬岩 ， 李铁纯 ， 等 棉籽油中脂 肪酸不 同的酯化方法与气相色谱 质谱分 析 J 质谱学报 ， 2 O O 5 ， 2 6 ( 2 ) ： 9 09 2 6 张越华， 曾和平， 等 脂肪酸在生命过程中的作用研究进展 J 中国油脂， 2 0 0 6 ， 3 1 ( 1 2 ) ： l 1 1 6 7 侯冬岩， 回瑞华， 李铁纯， 等 冠心苏合丸挥发性成分分析 J 鞍山师范学院学报， 2 O O 4 ， 6 ( 6 ) ： 4 4 4 7 8 王性 炎， 樊金栓 ， 王妹清 ， 等 中国含神经酸植物 开发利用研究 J 中国油脂 ， 2 0 0 6 ， 3 1 ( 3 ) ： 6 9 7 1 An a l y s i s o f F a t t y Ac i d s I -I a r p o d o n Ne h e r e u s i n b y GC MS S U N L i y a n g， D I A O Q u a r t - p i n g， T A O J n g ( D e p a r t me n t o f C h e m i s t r y ， A n s h a n N o r m a l U n i v e r s i t y ， A n s h a n 1 1 4 0 0 7 ， Chi n a ) A b s t r a c t ： T h e c o n t e n t s o f f a t t y a c i d s i n n a l o n n e h e r e u s w e r e d e t e r mi n e d b y c a p i l l a r y g a s c h ro m a t o g r a p h y m a s s s p e c t r o m e t r y f o l l o w i n g B l i s h Dye r e x t r a c t i o n a n d p o t a s s i u m h y d r o x i d e m e t h a n o l e s t e r fi c a t i o n T h e r e s u l t s s h o w ed t h a t B l i g h Dye r e x t r a c ti o n e x h i b i ts a h i s h e x t r a c t i o n e ffic i e n c y U n s a t u r a t ed f a t ty aci d a r e th e m a i n c o m pon e n ts i n th e fi ft e e n k i n ds o ff a t ty aci d s f o u n d i n Ha r po d o n n e h e r e u s ， i n w h i c h the r e l a t i v e c o n