四溴双酚A在鲫鱼不同器官中的分布、富集及病理研究.pdf

中国环境科学 2013,33(4)：741747 China Environmental Science 四溴双酚 A 在鲫鱼不同器官中的分布、富集及病理研究 杨苏文*,徐范范,赵明东 (中国环境科学研究院湖泊生态环境研究中心,环境基准与风险评估国家重点实验室,北 京 100012) 摘要：研究了将鲫鱼(Carassius auratus)长期暴露于不同浓度的四溴双酚 A(TBBPA)后的器官组织分布和浓缩富集系数,同时对不同暴露时 间的鲫鱼不同器官病理切片进行了观察.结果显示,各浓度组鲫鱼肝脏和肾脏的 TBBPA 含量都表现出先升高后下降的趋势,鳃和肌肉中 TBBPA 含量只有在高浓度时呈现相同的趋势.病理切片显示鲫鱼肝脏、 肾脏和鳃等器官组织均表现出时间-剂量依赖性的病理损伤,在相同 暴露浓度下,雄鱼的性腺损伤程度高于雌鱼. 关键词：四溴双酚 A；鲫鱼；组织分布；生物富集；病理损伤 中图分类号：X171.5 文献标识码：A 文章编号：1000-6923(2013)04-0741-07 Distribution and bioaccumulation of tetrabromobisphenol A in Carassius auratus tissues and its pathological effect. YANG Su-wen*, XU Fan-fan, ZHAO Ming-dong (State Key Laboratory of Environmental Criteria and Risk Assessment, Research Center of Lake Eco-environment, Chinese Research Academy of Environmental Sciences, Beijing 100012, China). China Environmental Science, 2013,33(4)：741747 Abstract：Distribution and bioaccumulation of TBBPA in different Carassius auratus tissues exposed to varied TBBPA concentrations were measured and analyzed. The corresponding pathological effects were also assessed. Results indicated that the concentrations of TBBPA increased firstly, then decreased in Carassius auratus liver and kidney at high as well as low dose group. Indicating that both the fish liver and kidney had a strong capacity of bioaccumulation. Nevertheless, the concentrations of TBBPA showed a similarity only at high dose in gill and muscle. The bioaccumulation capacity of the gill and muscle was comparatively lower. Pathological observations revealed that the pathological damage was time-dose-dependent in the liver, kidney and gill. Under the same TBBPA concentration, the gonad damage caused by TBBPA to the male was more serious than that to the female. Key words：tetrabromobisphenol A(TBBPA)；Carassius auratus；tissue distribution；bioaccumulation；pathological 四溴双酚 A(TBBPA)是世界范围内被广泛 应用的溴代阻燃剂,主要通过塑料和电子产品的 制造与加工处置和循环利用过程进入环境1,目 前已在土壤、 水体、 沉积物和大气等环境介质以 及人体内检测到2 -8.TBBPA 的水环境暴露水平 日益升高,对水生生物具有潜在毒害影响. 环境污染物对水生生物的毒性效应是进行 毒性效应研究及生态风险评价的基础.鲫鱼是分 布于我国大部分地区的经济性鱼类,为本土物种, 对 TBBPA 毒性效应及生态系统风险评价研究具 有广泛代表性,目前已被普遍应用于生态毒理学 方面的研究,但有关 TBBPA 在鱼体中组织分布 和富集效应的研究还较鲜见9.因此本研究以鲫 鱼(Carassius auratus)为受试生物,通过分布动力 学定量地确定鱼体各组织器官中 TBBPA 含量, 研究 TBBPA 在鱼体肝脏、肾脏、鳃和肌肉中的 吸收与富集效应,结合不同暴露时间鲫鱼肝脏、 肾脏、鳃、性腺的组织病理学,以期初步确定 TBBPA在鲫鱼体内的分布特征及作用靶器官,为 阐明 TBBPA 的毒性效应机制机理及生态风险评 价提供参考. 1 材料与方法 1.1 组织分布与生物富集实验方法 收稿日期：2012-08-08 基金项目：国家水体污染控制与治理科技重大专项(2008ZX071- 05005) * 责任作者, 副研究员, yangsw 742 中 国 环 境 科 学 33 卷 1.1.1 实验动物 鲫鱼(Carassius auratus)购于 北京市通州区花鸟鱼虫市场,体长为(6.951.05) cm,体重为(5.900.80)g,在室内驯化 2 周,死亡率 稳定在 1%2%以下,试验用水为自来水,室内静 置 48h 去氯,温度(251),光周期为 14h:10h,溶 液 氧 为 (7.50.5)mg/L,pH 值 (7.80.2), 水 硬 度 (10910)mg/L (以 CaCO3计). 1.1.2 实验方法 TBBPA工业品(97%)为美国Alfa Aesar公司进口,采用乙醇作为助溶剂配制50mg/mL 的储备液备用.将 360 条鲫鱼随机放入盛有 60L 处 理液的玻璃缸内,每缸 30 条鱼,根据 TBBPA 对鲫鱼 的 96h-LC50值10及慢性毒性实验浓度设置的一般 规则11 -12,设定亚致死处理浓度为 0.5mg/L 和 2.0mg/L,24h 更换一次相同浓度的处理液,并以助溶 剂乙醇处理的鱼作对照,实验期间每天喂食 1 次.实 验周期为 32d13.在暴露时间分别为 2,4,8,16,32d 取 样,进行前处理后(方法参见文献9),HPLC 测定肝 脏、肾脏、鳃和肌肉中TBBPA 含量,并利用公式计 算生物富集系数(公式见2.2 节). 1.2 组织病理切片实验方法 1.2.1 实验仪器 Thermo Shandon Excelsior 组 织处理机,TKY-BMB,湖北泰康医疗设备有限公 司石蜡包埋机,Leica RM2235 型切片机,Thermo Shandon Varistain Gemini 全自动染片机,Thermo Shandon Consul 全 自 动 封 片 机 , 德 高 Zeiss Imager. M1 显微镜. 1.2.2 实验方法 暴露实验第2,4,8,16,32d每次随 机取 10 尾鲫鱼.取鲫鱼肝脏、肾脏、鳃、精巢和卵 巢组织放置于4%甲醛溶液中固定24h,固定后的组 织在清水冲洗 15h 以上,经 50%100%各级乙醇梯 度脱水,2:1、1:1、1:2 的二甲苯/石蜡和全石蜡逐级 渗透,最后包埋于切片用石蜡中,制成组织蜡块.将 埋有组织的蜡块固定在切片机上,7m 切片,用明 胶甘油将组织薄片贴于载玻片上,37烘干.组织 切片经二甲苯脱蜡和70% 100%各级乙醇梯度脱 水,用苏木精染色,经过1%盐酸分化和0.1%氨水显 色后,再经 50%90%各级乙醇梯度脱水,用 0.5%酒 精伊红(95%酒精配制)染色,95%和 100%的乙醇进 一步脱水,最后用中性树胶封片.显微镜下观测并 拍照,采用 Photoshop 软件进行图像处理和分析.观 察各染毒组中甲状腺滤泡上皮厚度、细胞肥大和 增生、胶质减少和滤泡上皮细胞周围血管增生等 病变现象. 1.3 数据分析 数据采用 origin 7.5 和 sigma Plot 10.0 处理. 2 结果与分析 2.1 TBBPA 在鲫鱼不同器官的组织分布 由图 1 可见,鲫鱼肝脏组织在第 8d 出现吸收 高峰,随后下降,其中 0.5mg/L 暴露组 32d TBBPA 的浓度低于第 2d 的浓度,而 2.0mg/L 暴露组 32d 后的肝组织浓度为第 2d 浓度的 4.1 倍,达到 146.61ng/g.0.5mg/L组肾脏组织在4d达到最大值, 随后逐步降低,32d 时浓度稍高于第 2d,为对照的 4.5 倍.2.0mg/L 组在第 8d 达到最大值,32d 时浓度 为第 2d 浓度的 3.4 倍,为对照组的 7.3 倍.0.5mg/L 组的肌肉组织中 TBBPA 含量随暴露时间延长缓 慢升高,高浓度组在第 8d 出现吸收高峰,后快速下 降,在暴露终点又显著回升,为对照组的 4 倍.低浓 度组鳃中 TBBPA 随时间变化幅度较小,第 32d 与 对照组极为接近,高浓度组第 4d 时出现吸收高 峰,32d 时为对照组的 5.2 倍. 结果显示,各浓度组肝脏和肾脏 TBBPA 含 量都表现出先升高后下降的趋势,鳃和肌肉在 0.5mg/L 时 TBBPA 含量变化不大,高浓度时先升 高后下降,肌肉在暴露后期又出现升高趋势. 2.2 TBBPA 在鲫鱼不同组织器官的生物富集 根据时间(x)和TBBPA在鲫鱼不同组织器官 的浓度(y)拟合得到式(1),符合毒代动力学一级吸 收模型,根据所得方程得到各个参数见表 1,TBBPA 暴露实验中各器官组织富集系数(a)随 暴露时间的变化见图 2. 2 0 0.5 e x x b ya = (1) 式中: y 为 TBBPA 在鲫鱼不同组织器官的浓度;x 为暴露时间;拟合公式后得到参数 a,b,x0,其中,a 为各器官组织富集系数;x0为相应变化时间. 结果显示,各器官富集系数随暴露时间的延 长先升高再逐渐减小.在实验浓度下肝脏富集系 数相近,最大富集系数为 395,均落在 1011d 之 4 期 杨苏文等：四溴双酚 A 在鲫鱼不同器官中的分布、富集及病理研究 743 间;0.5mg/LTBBPA 组鲫鱼肾脏的最大富集系数 为 945,2.0mg/L 组肾 脏的 富 集 系数 远 小于 0.5mg/L 处理组,表明鲫鱼肾脏功能可能受损不 能执行正常的排泄和解毒机能.2.0mg/L 组鲫鱼 鳃的富集系数显著高于 0.5mg/L 组,最大富集系 数为 72,时间为 10.26d,肌肉富集系数变化不大. 0.5mg/L 2.0mg/L 肾脏 400 300 200 100 0 0 2 481632 TBBPA 浓度(ng/mg) 肝脏 500 300 200 100 0 0248 16 32 400 0.5mg/L 2.0mg/L 腮 120 100 60 20 0 0 2 481632 TBBPA 浓度(ng/mg) 80 40 处理时间(d) 0.5mg/L 2.0mg/L 肌肉 18 14 10 6 2 0248 16 32 20 16 12 8 4 处理时间(d) 0.5mg/L 2.0mg/L 图 1 TBBPA 在鲫鱼不同器官的组织分布 Fig.1 Tissue distribution of TBBPA in Carassius auratus 表 1 鲫鱼各器官的富集系数及参数 Table 1 Bioaccumulation factor and the parameters in 低浓度(0.5mg/L) 高浓度(2.0mg/L) 参 数 肝 肾 鳃 肌肉肝 肾 鳃 肌肉 a 395.00 945.04 46.56 11.62333.37 289.61 72.526.65 b 4.35 3.65 6.30 27.684.544.58 6.1381.79 x0 10.62 10.41 9.40 25.0410.5410.46 10.2648.60 2.3 TBBPA 暴露对鲫鱼器官组织的组织病理变化 对照组肝组织切片(图 3A)的肝细胞呈多角 型,细胞核大而圆,核仁居中,胞质染色深,细胞膜 界限清晰.暴露后2d,肝细胞轻微肿胀,胞质淡染, 部分细胞空泡化,单位面积内肝细胞数量减少. 暴露后 48d,肝细胞肿胀严重,肝细胞索状结构 破坏,肝细胞弥散.暴露后 16d,肝细胞索状结构 消失,部分细胞的胞膜破裂、 溶解,胞浆基质变淡, 胞核高度浓缩,有的甚至核仁都不可见,发现色 素沉积物.暴露后32d(图3B),肝细胞肿胀扩展到 整个肝,细胞基质大量丢失,胞核固缩(坏死),高 浓度组中发现大量色素沉积物,经普鲁士蓝染 色证实为含铁血黄素沉积物.实验中暴露 TBBPA 后,鲫鱼肝脏表现出时间-剂量依赖性的 病理损伤,具体分析见表 2,说明肝脏可能是 TBBPA 作用的靶器官. 对照组肾组织切片(图 3C)的正常肾小体为 一圆囊结构,肾小球是一团毛细血管,肾小囊包在 肾小球外面,两层之间为肾小囊腔.暴露后 24d, 肾小管中有弥散的色素沉积,部分肾小球毛细血 管明显萎缩,甚至坏死,并在肾小管上皮细胞内发 744 中 国 环 境 科 学 33 卷 现少量色素沉积物.暴露后 816d,肾小球毛细血 管明显萎缩,肾小囊腔变宽,肾小球及其附近区域 发现大片的色素沉积物,肾小管上皮细胞中色素 沉积增多.暴露后 32d(图 3D),肾小球囊内大片的 色素沉积,可能为坏死的肾小球毛细血管球残骸, 经普鲁士蓝染色证明是含铁血黄素.暴露TBBPA 后肾脏的病变呈时间依赖性增长,具体分析见表 3,主要表现为肾小球毛细血管萎缩、 坏死,肾小囊 腔变宽,肾小球及肾小管上皮细胞内色素沉积增 多,但两剂量组之间差异不显著. 处理时间(d) 0 5 10 152025 3035 800 700 600 500 400 300 200 100 0 1.5mg/L 肝脏 肾脏 腮 肌肉 BCF 处理时间(d) 0 5 10 152025 3035 300 250 200 150 100 50 0 2.0mg/L BCF 图 2 长期暴露后 TBBPA 在鲫鱼不同器官组织的生物 富集系数(BCF)变化 Fig.2 Bioconcentration factor (BCF) of TBBPA in different tissues of Carassius auratus after long- term exposure 对照组鳃丝切片(图 3E)结构完整清晰,鳃小 片排列整齐有序.暴露后 24d,鳃切片中观察到 鳃小片上皮细胞轻度增生,部分还伴有鳃小片细 胞的脱落,使邻近鳃小片相互粘连.暴露后 86d, 鳃小片上皮细胞增生加剧,部分鳃小片扭曲、细 胞脱落.暴露后 32d(图 3F),在两剂量组均可观察 到鳃小片大量融合. 表 2 鲫鱼肝组织结构随暴露时间变化 Table 2 Liver structure changes of Carassius auratus with time in chronic exposure test 肝组织结构变化 暴露情况 细胞数量减少空泡化 色素沉积 核固缩 对照 0.5mg/L 2d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 4d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 8d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 16d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 32d 2.0mg/L 注:表示没有观察到明显效应;表示效应轻微;表示效应严重 表 3 鲫鱼肾组织结构随暴露时间变化 Table 3 Kidney structure changes of Carassius auratus with time in chronic exposure test 肾组织结构变化 暴露情况 肾小球萎缩、囊腔变宽 肾小管改变 色素沉积 对照 0.5mg/L 2d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 4d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 8d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 16d 2.0mg/L 对照 0.5mg/L 32d 2.0mg/L 注同表2 4 期 杨苏文等：四溴双酚 A 在鲫鱼不同器官中的分布、富集及病理研究 745 B E C D A J F I BM Sz G H Pf Bc 图 3 鲫鱼 TBBPA 暴露的器官组织病理观察 Fig.3 Observation of histopathology exposured TBBPA in Carassius auratus A:肝脏对照组;B:肝脏 2.0mg/L TBBPA 暴露 32d;C:肾脏对照组;D:肾脏 2.0mg/L TBBPA 暴露 32d; E:鳃对照组;F:鳃 2.0mg/L TBBPA 暴露 32d;G:精巢对照组; H:精巢 2.0mg/L TBBPA 暴露 32d;I:卵巢对照组;J:卵巢 2.0mg/L TBBPA 暴露 32d Nu 为细胞核;Li 为含铁血黄素沉积;Cd 为细胞坏死;Rc 为肾小球;Cy 为肾小囊腔;Dt 为肾小管;Pf 为鳃丝;Bc 为血细胞;SZ 为精子;BM 为基 膜;Ed 为发育初期;Md 为发育中期;Ld 为发育后期 对照组精巢切片(图 3G)可见排列整齐完整的 精小叶,精小叶腔内充满大量的精子细胞,核圆形,较 致密,聚集在一起形成大的团块.暴露后 24d,精小 叶排列混乱,基膜局部溶解,间质细胞增多.暴露后 816d,精小叶基膜部分溶解,小叶间质进一步扩大. 暴露后 32d(图 3H),精小叶基膜相互溶解,精子聚集 在一起形成大的团块,基膜外间质细胞局部增多. 对照组和两剂量组卵巢切片观察(图3I,J),卵 746 中 国 环 境 科 学 33 卷 母细胞呈圆形、椭圆形或多角形,细胞质嗜碱性, 核浅蓝色,位于细胞中央.核仁沿核膜内缘分布. 经对比发现,对照组与处理组未见异常现象. 3 讨论 肝脏是生物体最主要的物质代谢场所和解 毒器官,污染物易造成肝脏的脂肪化和细胞扩增 等组织损伤14,还可造成线粒体囊泡化和细胞核 损伤等超微结构的变化15.组织学研究表明, TBBPA 能引起孕期小鼠的肝脏损伤16.本研究 结果表明,TBBPA 暴露对肝脏表现为时间-剂量 依赖性关系,同时病理切片显示,鲫鱼肝细胞空泡 变性,细胞核膜破裂、核仁溶解消失,部分肝细胞 坏死,表明 TBBPA 蓄积对肝脏具有较强毒害作 用17 -19.陈玛丽等20发现 TBBPA 低剂量(0.025, 0.25mg/L)暴露 12 周能够引起红鲫肝脏脂肪化、 空泡化和线粒体囊泡化等现象,而高剂量暴露还 导致肝脏细胞核损伤和细胞间隙增大等现象,造 成红鲫肝脏的损伤.这可能与污染物通过引起肝 脏的物质代谢紊乱20,或者通过诱导活性氧的产 生导致肝脏细胞代谢增强, 进而引起肝脏中物 质代谢紊乱21 -24有关. 肾脏是鱼体最重要的毒物排泄器官,肾功能 受损时,以肾脏作为主要去除途径的毒物消除速 度减慢,可产生蓄积和病变,排泄 TBBPA 机能受 损,导致血液 TBBPA 含量升高使血流不丰富的 肌肉组织也出现 TBBPA 的积累现象.Schauer 等 25在研究小鼠一次口服 300mg TBBPA/kg bw 的代谢动力学时发现,TBBPA在小鼠体内的代谢 半衰期为 13h,由于 TBBPA 与谷胱甘肽等生物转 化酶或发生硫化反应使其生物利用性降低, TBBPA 对机体的损害是通过与受体或酶的结合 进行的.而 kang 等26研究发现小鼠完全排泄 TBBPA 需要 2d,TBBPA 不会在体内积累,对肾脏 没有损伤.本研究表明低浓度 TBBPA 暴露鲫鱼 肝脏和肾脏可正常代谢,高浓度组则代谢受阻.这 可能与 TBBPA 随血液进入肾脏后,自由基对细 胞中的各种酶造成损伤,使鱼类机体抗氧化系统 损伤所致 27 -28,产生蓄积和病变,排泄机能受损 有关. 本研究中鲫鱼精巢的病理损伤严重,精小叶 基膜破裂,这可能导致小叶内部环境的紊乱,激素 营养物质的平衡受到破坏,不利于精子的成熟和 发育,这一结论与陈玛丽29的研究结果一致,而 本研究同时发现,在相同 TBBPA 浓度暴露下鲫 鱼卵巢组织未发现病理损伤,表明 TBBPA 暴露 下鲫鱼精巢比卵巢更易受到毒害威胁.在对鲫鱼 鳃切片的的观察表明,鳃小片上皮细胞大面积增 生、融合会严重影响鳃的正常气体交换,这必然 影响鳃的呼吸、分泌和排泄功能,这些与在试验 过程中观察到的实验组的鱼经常将嘴露出水面 或鳃盖煽动速度加快的缺氧现象相吻合. 4 结论 4.1 组织分布动力学的研究表明,肝脏和肾脏 是 TBBPA 含量最高的部位,具有较强生物富集 能力. 在暴露 1011d 时,肝脏和肾脏富集能力最 强,最大富集系数分别达到 395 和 945.鳃和肌肉 的富集能力较低. 4.2 不同浓度 TBBPA 暴露后,鲫鱼肝脏、肾脏 和鳃均表现出时间-剂量依赖性的病理损伤,低 浓度肝组织切片未见明显病变; 肾脏有弥散性 沉积;鳃小片上皮细胞轻度增生,部分伴有鳃小片 细胞的脱落,后期有融合现象.高浓度肝细胞肿胀 严重,肝细胞索状结构破坏,肝细胞弥散,细胞基 质大量丢失,胞核固缩;肾小球毛细血管明显萎缩, 甚至坏死;鳃小片上皮细胞的大面积增生,致使数 条鳃小片融合在一起. 4.3 在相同暴露浓度下,雄鱼的性腺损伤程度 高于雌鱼.精巢在 2.0mg/L TBBPA 暴露下病理损 伤严重,卵巢未发现明显病变. 参考文献： 1 Hale R C, Alaee M, Manchester-neesving J B, et al. Polybrominated diphenyl ether flame retardants in the North American environment J. Environ. Int., 2003,29:771-779. 2 Watanabe I, Kashimoto T, Tatsukawa R, et al. Identification of the flame retardant tetrabromobisphenol A in the river sediment and mussel collected in Osaka. Bull. Environ J. Contam. Toxicol., 1983,31:48-52. 3 De Wit C A. An overview of brominated flame retardants in the 4 期 杨苏文等：四溴双酚 A 在鲫鱼不同器官中的分布、富集及病理研究 747 environment J. Chemosphere, 2002,46:583-624. 4 Cariou R, Antignac J P, Zalko D, et al. Exposure assessment of French women and their newborns to tetrabromobisphenol-A: occurrence measurements in maternal adipose tissue, serum, breast milk and cord serum J. Chemosphere, 2008,73:1036- 1041. 5 Geens T, Roosens L, Neels H, et al. Assessment of human exposure to bisphenol-A, triclosan and tetrabromobisphenol-A through indoor dust intake in Belgium J. Chemosphere, 2009,76:755-760. 6 Labadie P, Tlili K, Alliot F, et al. Development of analytical procedures for trace-level determination of polybrominated diphenyl ethers and tetrabromobisphenol A in river water and sediment J. Anal. Bioanal. Chem., 2010,396:865-875. 7 张普青,李玉文,李敬瑶,等.巢湖沉积物及水体中四溴双酚 A 浓 度分布及时空分布特征 J. 内蒙古科技与经济, 2011,5(31): 51-55. 8 肖 潇,陈德翼,梅 俊,等.贵屿某电子垃圾拆解点附近大气颗 粒物中氯代/溴代二英、 四溴双酚 A 污染水平研究 J. 环境 科学学报, 2012,32(5):1142-1148. 9 杨苏文,王圣瑞,闫振广,等.四溴双酚 A 在 5 种巢湖鱼类体内的 组织分布与生物浓缩因子研究 J. 环境科学, 2012,33(6): 1852-1857. 10 Yang S W, Yan Z G, Xu F F, et al. Developme nt of freshwater aquatic life criteria for Tetrabromobisphenol A in China J. Environmental Pollution, 2012,169:59-63. 11 Li H, Jiang H, Gao X, et al. Acute toxicity of the pesticide methomyl on the topmouth gudgeon (Pseudorasbora parva): Mortality and effects on four biomarkers J. Fish Physiol. Biochem., 2008,34:209-216. 12 孙翰昌,丁诗华,陈大庆,等. Cu2+对中华倒刺鲃抗氧化功能的毒 理效应 J. 农业环境科学学报, 2006,25(1):69-72. 13 GB 21808-2008 生态毒理试验方法 S. 北京:中国标准出版 社, 2010. 14 Nero V, Farwell A,Lister A, et al. Gill and liverhistopathologicalchanges in yellowperch (Perca flavescens) and goldfish (Carassius auratus) exposed to oil sands process- affected water J. Ecotoxicol. Environ. Saf., 2006,63(3):365- 377. 15 Hugla J L, Thome J P. Effects of polychlorinated biphenyls on liver ultrastructure, hepatic monooxygenases, and reproductive success in the barbel J. Ecotoxicol. Environ Saf,. 1999,42(3): 265-273. 16 Tada Y, Fujitan I T, Ogat A A, et al. Flame retardant tetrabromobisphenol A induced hepatic changes in ICR male mice J. Environ. Toxicol. Pharmacol., 2007,23(2):174-178. 17 Weater P W, Canton J H. Histopathological study of Poecilia reticulata ( guppy) after long-term exposure to bis( tri-n-butyltin) oxide (TBTO ) and di-n-butyltindichloride(DBTC) J. Aquatic toxicology, 1987,10:143-165. 18 Weater P W, Canton J H, Van Iersel A A J, et al. The toxicity of bis( tri-n-butyltin) oxide( TBTO) and di-n-butyltindichloride ( DBTC) in the small fish species Oryzias latipes( medaka) and Poecilia reticulata guppy J. Aquatic Toxicology, 1990,16:53-72. 19 王锡珍,陆宏达.关于阿维菌素对异育银鲫的急性毒性和组织病 理研究