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3 7 6一 江苏农业科学2 0 1 1 年第 3 9卷第 6期 宋维彦， 王秀敏， 靳桂双 铁铜锌对凡纳滨对虾生长和非特异免疫的影响 J 江苏农业科学， 2 0 1 1 ， 3 9 ( 6 ) ： 3 7 6 3 7 9 铁铜锌对凡纳滨对虾生长和非特异免疫的影响 宋维彦 ， 王秀敏 ， 靳桂双 (日照职业技术学院 ， 山东 日照 2 7 6 8 2 6 ) 摘要： 用分别添加不同浓度 F e “、 c u “、 z n “的基础饲料喂养凡纳滨对虾 ( L i t o p e n a e u ,v a n n a m e i ) 4 1 d后 ， 以生长 率和饵料系数为指标分析了F e 、 c u ”、 z n 对凡纳滨对虾生长的影响， 并以血清抗菌活力 、 溶菌活力、 过氧化氢酶活 力为指标分析凡纳滨对虾非特异性免疫的变化。研究结果表明： ( 1 ) 在饲料中适当添加微量元素可以提高凡纳滨对 虾生长率和降低饵料系数， 分别添加 2 5 0 m S k g F e 2 、 1 5 m s k g C u “、 3 0 mg k g Z n “时效果最佳。( 2 ) 不同浓度的微 量元素对凡纳滨对虾非特异免疫能力有较大的影响 ， 分别添加 5 m sk g C u 、 1 5 a s k g Z n 时凡纳滨对虾血清抗菌 活力最强； 分别添加 1 5 0 m g k g F e “ 、 2 m sk g C u “、 1 5 m g k g Z n ”时凡纳滨对虾血清的溶菌活力明显高于对照组 ； 分 别添加 2 5 0 m g k g F e “、 5 m sk g C u “、 1 5 m g k g Z n “时凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力最强。 关键词：F e 、 C u “、 Z n “； 凡纳滨对虾；生长性能； 非特异性免疫 中图分类号：s 9 6 8 2 2 文献标志码： A 文章编号： 1 0 0 2 1 3 0 2 ( 2 0 1 1 ) 0 6 0 3 7 6 0 4 微量元素在虾类体内含量甚微， 却在虾类生命和机体代 谢过程中起着重要作用。研究虾类微量元素的营养生理作用 及需要量， 对完善饲料营养成分、 提高饲料效率、 促进鱼虾的 生长具有积极的作用。铁、 铜、 锌是微量元素中重要的组成部 分， 是维持水生动物正常的内在环境、 维持物质正常代谢、 促 进动物生长发育和繁殖的必需营养物质。铁是核酸还原酶和 收稿 日期 ： 2 0 1 1 一O 1一 O 3 基金项 目： 山东省高等学校优秀青年教师国内访问学者项 目。 作者简介 ： 宋维彦( 1 9 6 5 一 )， 男 ， 山东莒南人 ， 硕士 ， 副教授 ， 主要从事 水产养殖教学及 虾蟹养殖研究 。E ma i l ： f z s w y 1 6 3 c o rn。 生物氧化过程中某些酶的活性中心或辅酶， 缺铁会影响这些 酶的活性及这些酶涉及的生化反应过程， 对虾类生长有重要 的影响。铜是虾类血液中血蓝蛋白的重要组分， 甲壳类血细 胞中携带氧的是血蓝蛋白， 结合氧的元素是铜， 对氧分在虾体 内的输送起着重要的作用。D e p l e d g e估计， 虾体内约 4 0 的 铜存在于血蓝蛋白中 。更重要的是， 铜对虾类的赖氨酸氧 化酶、 细胞色素氧化酶、 过氧化物歧化酶等起着重要作用。锌 是许多酶的组成成分， 以及某些酶如碱性磷酸酶的激活； 缺锌 会导致鱼虾生长不良。目前， 几种重要的微量元素的功能及 其需要量的研究正在引起人们越来越多的关注。 本试验主要研究微量元素铜、 铁、 锌在饲料中不同的添加 ( 上接 第 3 7 5页) 源抗体的易感雏鸭后， 死亡鸭呈角弓反张， 死亡鸭肝脏肿大， 表面有出血点， 经 R T P C R鉴定及序列分析表明， 该分离毒 株为 I 型鸭病毒性肝炎病毒。根据笔者所在研究室制定的江 苏省农业地方标准I型鸭病毒性肝炎病毒的检测 R T P C R方法 和文献 1 1 中介绍的方法， 合成 1对 I型鸭病毒 性肝炎病毒特异性引物， 以分离株的R N A为模板， 进行 R T P C R扩增 ， 结果得到6 3 2 b p的目的片段。R TP C R与其他诊 断方法相比， 具有快速省时、 敏感、 特异性高等优点， 可用于 I 型鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断， 对指导发病地区及时 采取有效防治措施具有重要的现实意义。 鸭病毒性肝炎主要危害 3周龄以内雏鸭， 且发病急， 死亡 率高， 尤其小于 1 周龄的雏鸭死亡率可高达 9 5 以上。通过 疫苗接种雏鸭可避免该病的发生， 如果已经发病可用高免血 清或鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体进行治疗， 可有效控制病情。 该养鸭场根据诊断结果使用抗鸭病毒性血清进行治疗， 发病 雏鸭在第2天即停止死亡。 参考文献： 1 郑献进 鸭肝炎病毒血清型鉴定及 I 型变异株弱毒疫苗的研究 D 北京 ： 中国农业大学 ， 2 0 0 6 2 王永坤， 谢静， 郭闯， 等 鸭病毒性脑炎病原分离与鉴定 J 水禽世界 ， 2 0 0 7 ( 4) ： 1 31 6 3 李春霞， 郭洪勋， 孙 刚， 等鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定 J 畜牧兽医科技信息， 2 0 0 4 ( 3 ) ： 3 9 4 0 4 殷震 ， 刘景华动物病毒学【 M 2版北京： 科学出版社， 1 9 9 7 5 刘美玲 鸭病毒性肝炎 的流行病学特征及防制 J 中国畜牧兽 医 ， 2 0 0 8 ， 3 5 ( 7 ) ： 1 0 31 0 4 6 H a n s e n W R， B r o w n S E， N a s h o l d S E ， e t a 1 I d e n t i f i c a t i o n o f d u c k p l a g u e v i r u s b y p o l y me r a s e c h a i n r e a c t i o n J A v i a n D i s e a s e ， 1 9 9 9 ， 4 3 ( 1 ) ： 1 0 61 1 5 7 P r i t e h a r d L ， Mo r r i s s y C， v a n P h u e k ， e t a 1 De v e l o p me n t o f a p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n t o d e t e c t v i e t n a me s e i s o l a t e s o f d u c k v i r u s e n t e r i t i s J V e t e ri n a r y M ic r o b i o l o g y ， 1 9 9 9 ， 6 8 ( 1 2 ) ： 1 4 9 1 5 6 8 王平， 潘文石， 胡寿文， 等 北京小鸭病毒性肝炎的研究 ( 一) 诊断与防治 J 北京大学学报： 自然科学版， 1 9 8 0 ( 1 ) ： 5 6 7 4 9 马秀丽， 宋敏训， 黄兵， 等I型鸭病毒性肝炎病毒 R TP C R 检测方法的建立 J 家禽科学， 2 0 0 6 ( 1 1 ) ： 1 1 1 3 1 0 姜军平实用P C R基因诊断技术 M 北京： 世界图书出版公 司， 1 9 9 6 1 1 魏雪涛， 张晓勇， 李银， 等I 型鸭肝炎病毒 R T P C R检测方 法的建立 J 浙江农业学报， 2 0 1 0 ， 2 2 ( 1 ) ： 1 0 1 3 宋维彦等： 铁铜锌对凡纳滨对虾生长和非特异免疫的影响 量对凡纳滨对虾生长和非特异免疫的影响。 1 材料与方法 1 1试 验 用 虾 凡纳滨对虾( L i t o p e n a e u 鲫n o r 口 e ) 购自日照市涛雒镇某 村的人工养殖对虾， 试验初始平均体重为( 8 2 5 0 5 )g ， 平 均体长( 7 9 0 0 5 )(2 m 。体质健壮， 无伤无病。 1 2试验 饲料 试验饲料是 自己制作的， 配方见表 1 。以七水硫酸亚铁 ( F e S O 7 H 0分析纯 ) 为铁源 ； 以七水硫酸锌 ( Z n S O 7 H ： 0分析纯) 为锌源； 以五水硫酸铜( C u S O 5 H ： 0分析纯) 为铜 源； 在 基 础 饲 料 中 分 别 添 加 F e “ 5 0 、1 5 0 、 2 5 0 、 5 0 0 mg k g ， Cu “ 2、 5、 1 5、 6 0 mg k g ， Z n 2 5 、1 5、 3 0、 1 0 0 mg k g ， 以不添加微量元素的饲料为对照， 充分搅拌均匀， 制成颗粒为 试验饲料。养殖水体和基础饲料中铁铜锌元素含量见表 2 。 表 1 基础饲料的原料组成 原料 鱼粉 鲜鱼 豆粕 淀粉 多种维生素 含量( ) 3 5 2 O 1 5 3 0 0 5 表 2 水体 中和基础饲料中铁铜锌元素含量 含量 ( mg k g ) 样 品 一 ， F e Cu Zn 虾用水0 I I 1 0 0 0 8 0 0 3 1 基础饲料0 9 7 6 0 2 8 3 1 5 3 2 1 3 凡纳滨对虾生长试验 用规格为 1 1 m 0 8 m x 1 1 I I 1 水族箱养殖试验。每组 设 3个平行。试验用虾先在水族箱中驯养 1 周以上， 驯养期 间活动正常， 死亡率低于5 。试验前 1 d停止投饵， 选择身 体健康、 反应灵敏、 大小基本一致的凡纳滨对虾随机分组 ， 每 组 2 O尾。每 日投饵 2次， 早晚各 1 次， 投喂量以饱食为准 ； 每 日换水 1次， 每次换水量为3 0 ； 换水时吸出粪便和残饵 ， 收 集残饵， 晒干称重。养殖试验时间共 4 1 d ， 每 1 0 d测量 1次 体长和体重。其间光照为室内自然光。养殖用水为经过曝气 的 自来水， 水质标准 p H值 7 4 7 7； 溶解氧 5 5 mg L； 总 硬度( 均值) 2 8 m g L ； 总碱度 ( 均值) 2 5 m m o l L ； 水温为 2 3 2 1 5； 充气养殖。 凡纳滨对虾生长试验测定指标 ： 存活率 = 试验终虾尾数 试验初虾尾数 X 1 0 0 体长( 重) 增长率 = 试验终虾平均体长( 重)一试验初虾 平均体长( 重) 试验初虾平均体长( 重) X 1 0 0 特定生长率 =( 1 n试验终虾平均体重 一l n 试验初虾平均 体重) 虾的生长天数 X 1 0 0 1 4 凡纳滨对虾非特异免疫试验 凡纳滨对虾非特异免疫试验每个水族箱养殖凡纳滨对虾 5 O尾 ， 饲养条件、 管理方法同“ 1 3 ” 。 在试验开始第 1 、 1 0 、 2 0 、 3 0 、 4 0天取凡纳滨对虾胸血窦血 淋巴液 ， 每次取 8 尾 ， 5 0 0 0 r ra i n离心 1 0 ra i n ， 一2 0保存。 F e “、 c n “、 z n “对凡纳滨对虾血清抗菌活力的测定方 法， 采用 B o m a n等 及 H u l t m a r k等 改进的方法进行。 F e “、 c n “、 z n “对凡纳滨对虾血清溶菌活力的测定方法 按 H u l t m a r k等 改进的方法进行。 Fe “ 、cn “、Z n “对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力的测 定， 采用改进的史成银等 方法在9 6 孔酶标板中进行。 2 结果与分析 2 1 F e “ 、 C n “、 Z 对凡纳滨对 虾生长的影响 在基础饲料和试验条件完全相同的条件下 ， 随着在饲料 中F e S O 7 H ： O添加量的增加， 凡纳滨对虾的体重和体长也 增加。饲料中F e S O 7 H ： O添加量达 2 5 0 m e , k g时， 对体重 和体长的影响最大， 对饵料 的利用率最高； 饲料 中 F e S O 7 H ： O添加量达到5 0 0 m g k g时， 体重和体长也比对照降低。 饲料中添加 F e S O 7 H 2 O对凡纳滨对虾的成活率没有影响。 在饲料中随着 C u S O 5 H ： O添加量的增加， 凡纳滨对虾的体 重和 体长 也 增 加。当饲 料 中 C u S O 5 H ： O加 入 量 达 1 5 m g k g 时， 对体重和体长的影响最大， 超过此量则生长逐 渐下降。但是这时的饵料系数较大 ， 在饲料中添加 C u S O 5 H ： O 5 m g k g 时饵料利用率最高。当饲料 中添加 C u S O 5 H 2 O达到 6 0 mg k g时， 虾的成活率 下降； 在饲料 中添加 Z n S O 7 H O 时对凡纳滨对虾生长影响差异不显著， 但添加 量较大时成活率下降( 表 3 ) 。 2 2 F e “、 C n “、 Z n “对凡纳滨对虾非特异免疫的影响 2 2 1 F e 、 C n “ 、Z n 2 对凡纳滨对虾血清抗菌活力的影响 虾类在免疫中主要靠体液免疫和细胞免疫。体液免疫中抗 菌活力是其中的重要一种； 饲料中的微量元素影响到虾类的 非特异免疫 能力。从 图 1 、 图 2 、 图 3看 出， 在饵料 中添加 F e S O 7 H O 对凡纳滨对虾血清的抗菌活力影响差异不是很 显著； C u S O 5 H： O对凡纳滨对虾的抗菌活力随添加量的增 加而增大， 当添加量达到 5 m g k g时抗菌活力最强； 凡纳滨对 虾的抗菌活力随饵料中Z n S O 7 H ： O添加而增加， 当添加量 达 1 5 m g k g 时抗菌活力最强 ， 超过此量随添加量的增加而 下降。 2 2 2 Fe “ 、Cn “、Z n 2 对凡纳滨对虾血清溶菌活力的影响 血清的溶菌活力也是凡纳滨对虾非特异免疫的一项重要指 标， 从图4 、 图5 、 图6可以看出， 在饵料中添加 F e S O 7 H 2 O 1 5 0 m g k g以内时， 对凡纳滨对虾血清的溶菌活力明显高于 没有添加的， 但是超过此， 对达凡纳滨对虾血清的溶菌活力反 而下降； 在饵料中添加C u S O 5 H ： O 5 m g k g以内时， 凡纳滨 对虾血清的溶菌活力随添加量的增加而增加， 但是当添加量 达到和超过5 m g k g时， 对凡纳滨对虾血清的溶菌活力随着 添加量的增加而下降； 在饵料中添 Z n S O 7 H ： O 1 5 m g k g 时 对凡纳滨对虾的血清溶菌活力影响最大， 超过此量， 血清溶菌 活力下降。 2 2 3 F e “、 C n “、 Z n 2 对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力 的影响从图7可以看出， 铁( F e s o 4 7 H ： 0) 对凡纳滨对虾 血清过氧化氢酶( P O D) 相对活力( A P O D) 的影响随添加量的 增加而增强， 达到 1 5 0 m e , k g 时最强， 超过此量下降， 在饵料 中添加铁( F e s o 4 7 H ： O) 前 1 0 d凡纳滨对虾血清过氧化物 酶相对活力表现出比对照组增强幅度大， 3 0 d时达到最大， 以后基本不再变化。从图8可以看出， 铜( C u S O 5 2 O) 对 凡纳滨对虾过氧化氢酶活力的影响随添加量的增加而增强， 达到5 m g k g 时最强 ， 超过 此 量下 降 ， 在 饵料 中添 加铜 - 3 7 8 江苏农业科学2 0 1 1 年第 3 9卷第 6期 0 2 5 0 2 0 、 O 1 5 0 1 0 o 0 5 O 时间 ( d) 图1 不 同浓 度的铁对凡纳滨对虾血清抗菌活力的影响 一 0 3 O 025 02O 、0 1 5 嫂0 1 0 粗O O 5 O 时间 ( d ) 圈2 不同浓度的铜对凡纳滨对虾血清抗菌活力的影响 一 三 她 髓 摆 04 0 O_ 3 5 O 3 O 02 5 0 2 O 0 1 5 0 1 O O O 5 O 时间 ( d) 图3 不 同浓度的锌对凡纳滨对虾血清抗菌活力的影 响 一 0 1 6 0 1 4 o 1 2 O 1 0 瓣 0 时间 ( d) 图4 不同浓度的铁对凡纳滨对虾血清溶菌活力的影响 ( C u S O 5 H O ) 2 0 d时表现出比对照组增强， 3 0 d时达到最 大， 以后基本不 再变化。从 图 9看 出， 在饵 料 中添 加锌 ( Z n S O 7 I - I 0) ， 对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力的影响 一0 1 6 宴8 ： 1 0 2 0 3 0 4 0 时间 ( d ) 图5 不同浓度的铜对凡 纳滨对 虾血清溶菌活力的影响 O_ 1 6 3 o 14 詈 时 间 ( d) 图6 不同浓度 的锌对凡纳滨对虾血清溶菌活力的影响 ： 0 0 5 吕 0 0 4 0 0 3 藿o 0 2 竖 0 0 1 0 捌 1 0 2 0 3 O 4 0 时间 ( d) 图7 不 同浓度的铁对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活 力的影响 ： O 0 6 00 5 、 O 0 4 鑫 0 0 3 髓 O 0 2 001 0 1 0 2 0 3 0 4 0 时 间 ( d) 图8 不同浓度的铜对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力的影响 随添加量的增加而增大， 当添加量达到1 5 mg k g 时最大， 超过 此量开始下降， 在试验过程添加微量元素锌， 在 1 0 d时表现 出 比对照组增强 ， 3 0 d 时达到最大 。 结果表明 ， 微量元素 宋维彦等： 铁铜锌对凡纳滨对虾生长和非特异免疫的影响 - 3 7 9 、 室 藿 O O 6 O O 5 0 0 4 0 0 3 0 O 2 0 O 1 l O 2 0 3 0 4 0 时间 ( d ) 图9 不同浓度的锌对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力的影响 铁、 铜、 锌对凡纳滨对虾血清过氧化氢酶活力有一定的促进 作用。 3 结论与讨论 微量元素铜、 铁、 锌是虾类进行新陈代谢及维持正常生长 发育不可缺少的营养物质。微量元素在动物体内的含量虽 少， 但却具有重要的生理功能， 它们是酶的辅基成分或酶的激 活剂， 构成软组织中某些特殊功能的有机化合物。饲料中缺 乏微量元素或含量不足， 动物会出现各种微量元素缺乏症。 如鱼缺乏微量元素， 会出现生长缓慢、 贫血、 皮肤及鳍发炎、 糜 烂、 死亡率高等症状 J 。 3 1 微量元素对凡纳滨对虾生长的影响 试验前对养殖用水进行火焰原子吸收测定( 表 2 ) ， 测定 结果试验用水中 F e ”、 C u “、 z l 1 2 的含量很低， 不影响本试验 结果。本试验 是对基 础饲料测定后 ( 表 2 ) 添加 的 F e “、 C u “、 Z n “； 试验研究结果表明， 基础饲料中添加适量的微量 元素能促进凡纳滨对虾的生长 ， 在饲料中添加 2 5 0 m g k g F e “对凡纳滨对虾体重、 体长增长最快， 饵料系数最小 ， 饲料 的利用率最高 ， 这时饲料中铁的总量在 3 4 7 6 m sk g 。这与 牙鲆( P a r a l i c h t h y s o l i v a c e u s ) 幼鱼对铁的需要量为 3 7 3 m g k g 的结果相似 ， 但与饲料 中添加 1 4 1 7 m g k g铁养殖鲤鱼 ( C y p r i n u s c a r p i o ) 生 长最 好相 差较 大 J 。当用添 加 F e 5 0 0 m g k g 的饲料饲养凡纳滨对虾 ， 生长速度和对饲料的利用 率都下降， 这时饲料中 F e “的含量将近6 0 0 m S k g ， 说明饲料 中F e 含量过高对凡纳滨对虾生长不利。 用添加 21 5 m sk g C u “的饲料饲养凡纳滨对虾， 生长 率和饵料利用率都比对照组提高。从体长、 体重的增长率和 特定生长率结果看， 基础饲料 中添加 1 5 mg k g C u 效果最 好， 这时饲料中 C u “的含量在 2 0 1 3 mg k g ， 与鲤鱼饲料最适 铜含量为 2 3 5 m g k g 相差不大 ， 和斑节对虾( P e n a e u s n o n o d o n ) 饲料中需添加 3 0 m sk g C u S O 5 H： O相似 J 。 从试验结果看 ， 饲料添加z n 3 0 m sk g时凡纳滨对虾体 长、 体重增长最快， 特定生长率最大， 这时饲料中 z n 含量在 5 5 3 2 m g k g ， 比牙鲆对锌要求应在 1 1 9 2 mg k g以上要小得 多 ， 但是这时饵料 系数 比饲料 中添加 z n 5 m sk g和 3 0 m g k g 都 大， 饲 料 利 用 率 较 低。当 饲料 中 添 加 z n 1 0 0 m sk g ， 饲料中z n “的含量达到 1 2 5 3 2 m sk g时， 凡纳滨 对虾的成活率下降， 说明饲料中过高的 Z n 有一定的毒害作 用。从以上结果可以看出， 饲料 中添加 2 5 0 m sk g F e 或者 1 5 m g k g C u “或者 3 0 m g k g Z n “能促进凡纳滨对虾生长。 但由于本试验是单一因子试验， 实际在饲料中存在多种微量 元素， 多种微量元素之间在吸收利用上存在拮抗或者促进作 用 ， 2种及 2种以上的微量元素对凡纳滨对虾生长的影响还 需要进一步研究。 3 2 微量元素对凡纳滨对虾非特异免疫的影响 饲料中适量添加 F e 不仅对凡纳滨对虾的生长有影响， 对凡纳滨对虾的非特异免疫也有影响。在基础饲料中添加 F e “ ，凡纳滨对虾血清的抗菌活力影响差异不显著； 但在基础 饲料中添加 1 5 0 m sk g F e “， 凡纳滨对虾血清溶菌活力和血 清过氧化氢酶活力达到最强。说明饲料中添加 F e “能调节 凡纳滨对虾的非特异免疫能力 ， 但对抗菌、 溶菌、 过氧化氢酶 活力的影响不尽相同。饲料中添加 5 m g k g C u “， 凡纳滨对 虾血清过氧化氢酶活力和血清的抗菌活力达到最高。饲料中 添加 2 m sk g C u “， 血清溶菌活力达到最高。c u “是甲壳类 血蓝蛋白中的必需元素， 不仅在供氧运输中起到重要作用 ， 在 甲壳类 非特异免疫 中也 起到重要作 用 。饲料 中添加 1 5 m g k g 的Z n 时凡纳滨对虾的非特异免疫功能达到最佳 状态， 这时凡纳滨对虾抗菌活力、 溶菌活力、 过氧化氢酶活力 最强。饲料中的 F e “、 C u “、 Z n 对凡纳滨对虾血清非特异 能力的影响， 是一个慢慢变化的过程 ， 一般都是在饲养到 2 O 3 0 d达到最高值 ， 说明通过饲料对虾类非特异免疫调节要 在平时的养殖中进行， 不能到虾类发病后用这种方法进行治 疗。通过对基础饲料添加 F e “、 C u 2 、 Z n 单一因子试验发 现， 在基础饲料中适量添加 F e “、 C u “、 z I l 2 ， 可以提高凡纳 滨对虾非特异免疫能力。 参考文献 1 D e p l e d g e M H R e e v a l u a t i o n o f m e t a b o l i c r q u i r e m e n t s f o r c o p p e r a n d z i n c i n d e c a p o d c r u s t a c e a n s J Ma r i n e E n v i r o n m e n t al R e s e a r c h， 1 9 8 9， 2 7 ( 2 ) ： 1 1 51 2 6 2 B o ma n H G， N i l s sonF a y e I ， P a u l K， e t a1I n s e c t i mm u n i t y ：I C h a r a c t