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3 9 5 4现代生物医学进展w w w h e n g w u y i x u e c o m P r o g r e s s i n Mo d e r n B i o m e d i c i n e V o L 1 0 N O 2 0 O C T 2 0 1 0 欧前胡素的提取分离方法和药理学研究进展 水 刘笑笑 曹蔚王四旺 ( 第四军医大学药学系天然药物学教研室 陕西西安 7 1 0 0 3 2 ) 摘要: 欧前胡素为线型呋喃香豆素类化合物, 从白芷、 欧前胡等植物中提取分离得到。其提取方法主要有热回流提取法、 渗滤法和 超临界流体萃取法。欧前胡素具有抑制癫痫发作、 扩张血管、 抑制心肌肥大、 抑制肿瘤细胞增殖、 抗微生物、 影响药物代谢酶活性 等多种药理作用。本文对其基本性质、 提取分离方法和药理学等方面的研究进展加以综述, 为欧前胡素的开发与研究提供参考。 关键词: 欧前胡素; 提取; 药理作用 中图分类号: R 2 8 5 5 文献标识码: A 文章编号: 1 6 7 3 6 2 7 3 ( 2 0 1 0 ) 2 O 3 9 5 4 0 3 M e t h o d o f Ex t r a c t i o n a n d I s o l a t i o n o f I mp e r a t o r i n a n d I t s Ad v a n c e s i n Ph a r ma c o l o g y * L I UXi a o - x i a o , C AO We i ,WANG S i - w a n g ( De p a r t me n t o f N a t u r a l Me d i c i n e , S c h o o l o f P h a r ma c F o u r t h Mi l i t a r yMe d i c a l U n i v e r s i t y , X i 、a n 7 1 0 0 3 2 , C h ina ) ABS TRACT:I m p e r a t o r i n i s a l i n e a r f u r a no c o u ma r m i s o l a t e d f r o m he r b a l me di c i ne s s u c h a s An ge l i c a d a h uric a a n d I mpe r a t o r i a o s t h m t h i u m L I mp e r a t o r i n s h o ws p o t e n t p h a r ma c o l o g i c a l a c t i v i t i e s i n c l u d i n g a n t i s e i z u r e , v a s o d i l a t a t i o n , a n t i t u mo r , a n t i mi c r o b i a l e ff e c t s a n d a ffe c t i n g t h e a c t i v i t i e s o f d mg me t a b o l i z i n g e n z y me s T h i s p a p e r p r e s e n t s a c o mp r e h e n s i v e e x p a t i a t i o n o n t h e b a s i c c h a r a c t e r s , a b s t r a c t i n g me t h o d s a n d p h a rm a c o l o g i c a l e ffe c t s o f i mp e r a t o fi n , wh i c h ma y s e r v e a s r e f e r e n c e ma t e ri a l s f o r f u r t h e r r e s e a r c h e s Ke y Wo r d s : I mp e r a t o r i n ; E x t r a c t i o n p r o c e s s e s ; P h a r ma c o l o g i c a l e ff e c t s Ch in e s e Li b r a r y C l a s s i fi c a t i o n: R 2 8 5 5 Do c u me n t c o d e : A A r t i c l e I D: 1 6 7 3 - 6 2 7 3 ( 2 0 1 0 ) 2 0 - 3 9 5 4 - 0 3 欧前胡素( i m p e r a t o r i n ) , 线型呋喃香豆素类化合物, 存在于 白芷, 欧前胡, 蛇床, 独活, 北沙参, 当归 等多种植物中。 具有抑 制癫痫发作、 扩张血管、 抑制心肌肥大、 抑制肿瘤细胞增殖、 抗 微生物、 影响药物代谢酶活性等多种药理作用, 为重要的天然 活性物质。本文对其基本性质、 提取方法和药理作用等方面的 研究进展加以综述 。 1基本性质 2 1 欧前胡素, 又称欧芹属素乙、 前胡内酯、 白芷乙素、 化学名 为 9 - ( 3 一 Me t h y l b u t 一 2 一 e n y l o x y ) 一 7 H f u r o 3 , 2 - g c h r o me n 一 7 一 o n e , 属 线 型呋喃香豆素类化合物 。 为棱柱状结晶( 乙醚 ) 、 长细针晶( 热 水 ) , 熔点为 1 0 2 C, 不溶于水, 微溶于沸水, 易溶于氯仿, 溶于 苯 、 乙醇、 乙醚 、 石油醚和碱性氢氧化物。 具光敏活性 。 分子式为 C。6 H 4 0 , 分子量 2 7 0 2 8 。其化学结构如右图所示。 2提取方法 2 1热回流提取法 白芷中欧前胡素的提取通常采用 9 5的乙醇回流提取, 粱明金【 3 等以欧前胡素为指标, 用薄层色谱法对提取香豆素类 成分所用的溶剂种类 、 极性和提取方式进行系统研究 , 结果表 明用 4 倍量 9 5乙醇回流提取 2次( 每次 l h ) 的方法提取 白芷 中的香豆素类有效成分可以获得较高提取效率。 但该法加热时 间过长, 消耗溶剂多, 且香豆素类成分受热易损失 。醇提物的 干燥方法对其中欧前胡素的含量亦有显著影响, 董芙蓉 等考 察常压干燥、 减压干燥、 冷冻干燥、 微波干燥等四种不同干燥方 法对白芷醇提物中欧前胡素和异欧前胡素含量的影响, 结果表 明各种干燥品中欧前胡素含量均有所降低。 其中冷冻干燥为最 佳干燥方法, 损失最小, 外观良好, 干燥品加甲醇溶解迅速而且 完全, 但所需干燥时问较长; 微波干燥法干燥速度最快, 但有效 成分损失较大, 易于焦化, 干燥后浸膏溶解困难; 常压干燥速度 慢, 有效成分损失较大, 同样存在干燥后浸膏溶解困难的现象; 减压干燥 与常压干燥相 比速度较快 , 其他基本相 同。 2 2渗滤法 渗滤法与热回流提取 法比较 , 除 了具有操作 简便 、 提取率 高的优点以外, 更重要的是 , 渗滤法可以避免香豆素成分受热 损失 。 郑翠英嘲 等以欧前胡素转移率为指标, 采用单因素、 正交 试验的方法 , 优化渗滤法的提取工艺参数。首先对乙醇浓度进 行考察, 提取率随乙醇浓度的增加而增加, 但当乙醇浓度达 6 0 0 o , 舌, 提取率变化不大。 用 6 0 乙醇对白芷细粉分别用热回流、 超声和渗滤法提取,欧前胡素的转移率分别为 8 4 9 4、 8 0 6 2 和 9 2 6 6, 表明渗滤法优 于回流提取法和超声提取法。 又分 别对溶媒用量 、 浸泡时间等因素进行正交实验 。 结果显示 , 6 0 + 基金项 目: 陕西省科学技术研究发展计划项 ( 2 0 1 0 K1 2 0 1 0 2 ) 作者简介: 刘笑笑, ( 1 9 9 0 - ) , 女, 本科生, 主要研究方向: 天然药物学 T e l : 0 2 9 - 8 4 7 7 3 7 5 2 , E - ma i l : x i a o x 8 9 0 5 1 6 3 t o m 通信作者: 王四旺, T e l : 0 2 9 8 4 7 7 4 4 7 8 , E m a i l : s i w a n g w fi n m u e d u c n ( 收稿 日期 : 2 0 1 0 0 7 - 2 1接受 日期 : 2 0 1 0 0 8 - 2 1 ) 现代生物医学进展ww w s h e n g w u y l x u e c o m P r o g r e s s i n Mo d e r n B i o me d i c i n e V o L l O N O 2 0 0 C T 2 0 1 0 3 9 5 5 乙醇浓度、 浸泡 6 h 、 6倍量溶媒提取的提取效果最佳。 2 3超临界流体萃取 超临界流体萃取技术是一种集萃取、 分离于一体的高新分 离技术 , 具有效率高、 速度快 、 选择性好、 无残留溶剂且适用于 热敏物质等优点。美国 F DA已逐渐将超临界流体萃取技术替 代溶剂萃取技术 。刘文【 等用超临界 C O 2对四种白芷的干燥 粉末萃取 2 h ,萃取液用甲醇稀释后用高效液相色谱法测定其 含量, 得贵州习水、 四川达县、 遂宁、 浙江余杭、 安徽亳州白芷中 欧前胡素的含量分别为: 0 8 2 3 , 1 1 8 9 , 1 4 4 8 , 0 6 4 8 , 0 7 8 1 mg g 。 其中四川遂宁和达县白芷中的欧前胡素含量较高, 品质较好。 3药理作用 3 1对中枢神经系统的作用 L u s z c z k i j j fs 等用小鼠最大电休克癫痫发作阈值模型研究 了欧前胡素抑制癫痫发作的作用。其研究发现提前 3 0 m i n腹 腔注射 5 0和 1 0 0 mg k g 的欧前胡素能使小鼠癫痫发作的电 压阈值分别提高 3 8 和6 8 ,且证明了欧前胡素提高小鼠在 电刺激下癫痫发作阈值的作用呈剂量和时间依赖性。 C h o i s y tg 等发现欧前胡素可使v- 氨基丁酸( G AB A) 转氨 酶钝化, 从而提高神经元突触间隙的抑制性神经递质 v 氨基 丁酸含量。在放射 自显影实验中, 欧前胡素可以抑制 3 H标记 的地西泮与 V 氨基丁酸 A亚型 ( GA B A A) 苯二氮卓受体复 合物的结合,而呋喃香豆素类化合物与此受体有一定的亲和 力, 为其部分激动剂 1 0 , l l 】 。同时, 欧前胡素能增强三种传统抗癫 痫药的抗癫痫活性。 欧前胡素( 4 0 mg k g 。 。 , 腹腔注射) 能够显著 提高卡马西平 、 苯巴比妥和苯妥英抑制小鼠最大电休克癫痫发 作的作用, 使其半数有效量分别从 1 0 3 mg k g 降低至 6 0 mg k g ( 4 2 ; P 0 O 1 , 卡马西平) 、 从 1 9 6 mg k g 降低至 1 2 2 mg k g ( 3 8; P o 0 5 , 苯巴比妥) 、 从 1 2 8 mg k g 降低至 8 5 mg k g ( 3 4 ; P 0 0 5 , 苯妥英) 【 。 3 _2对心血管系统的作用 各种体内外实验表明欧前胡素有显著的血管扩张作用, 同 时最新的研究还表明欧前胡素有明显的抑制心肌肥大的作用。 Ni e Ht ” 等人用不同的溶剂( 环己烷、 乙酸乙酯 、 丙酮 、 甲醇, 9 5 乙醇 、 水 ) 提取白芷中的有效成分, 制成浸膏 , 作用于去甲肾 上腺素预处理的小鼠胸动脉, 并用高效液相色谱法测定浸膏中 有效成分的含量。结果表明欧前胡素扩血管作用呈剂量依赖 性, 环己烷提取物扩血管作用最强 , 同时其中含欧前胡素浓度 最高( 4 O 9 , w w) , 且欧前胡素的血管扩张作用为异欧前胡素 的4倍。 由此认为川自芷中扩血管作用的主要活性成分是欧前 胡素。 J i a n - Y u H e 】等提出欧前胡素扩张血管的作用机制可能是 抑制电压依赖性钙通道的活性, 同时作用于钙调节蛋白, 抑制 细胞外钙的内流以及细胞内钙从钙池的释放。 Y a n Z h a n g t 等人研究了欧前胡素对心肌肥大的影响。欧 前胡素与维拉帕米在心肌细胞膜色谱分析中有相近的色谱保 留峰。 欧前胡素能减少血管紧张素I I 预刺激的心肌细胞的蛋白 含量, 减小细胞体积, 且其作用具有剂量依赖性。 经欧前胡素治 疗的自发性高血压大鼠的心脏体重比明显降低, 表明欧前胡素 在体内外均显示抗心肌肥大作用。 3 3抗肿瘤活性 S i g u r d s s o n s 【 I 5 等用人胰腺癌细胞株 P A NC 一 1 从当归果实 提取物中筛选出抑制癌细胞增殖的成分, 分别是欧前胡素和花 椒毒素, 其中欧前胡素的半数有效量为 2 7 m g ml 。 。 。Ki m Y K q 等人从白芷中分离出6种呋喃香豆素类成分( 包括欧前胡素) , 这六种成分对人非小细胞肺癌细胞系 A5 4 9 、卵巢癌细胞系 S K- OV - 3 、 黑素瘤细胞系 S K - ME L 一 2 、 中枢神经系统肿瘤细胞系 X F 4 9 8和结肠癌细胞系 H C T 一 1 5均有体外的抑制癌细胞增长 作用。Ya n g p yt 等发现欧前胡素有抑制细胞粘附分子 1 ( i I 1 t e r c e l l u l a r a d h e s i o n mo l e c u l e - 1 , I C A M- 1 ) 表达的作用。 经氧化型 低密度脂蛋白体外培养的U9 3 7 泡沫细胞中 I C AM 1 及其 m R N A的表达可增高 l 0 一 l 5倍,而 1 0 0 m mo l L - 的欧前胡素可使 此种细胞中I C A M 1 蛋白含量及其mR N A表达量各降低 7 9 和 7 4。抑制细胞粘附可能是欧前胡素抑制肿瘤细胞增殖的 机制之一 。 3 4抗菌和抗病毒活性 欧前胡素具有显著的抗菌抗病毒活性 。R o s s e l l i S t 9 1等在 Ma g y d a r i s t o me n t o s a的花中提取到七种成分, 并对其中包括欧 前胡素在内的四种成分进行抑菌实验, 发现欧前胡素对革兰氏 阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的抑制活性( 最小抑菌浓度为 3 2 1 2 8 mg ml ) 。 S a n c h o R I捌 等的研究表明欧前胡素能够抑制水泡性口腔炎 病 毒 假 型 或糖 蛋 白 g p l 6 0包 膜 的人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 I型 ( H I V- 1 ) 对 T细胞和 H e L e 细胞的感染。然而, 欧前胡素并没有 抑制细胞周期中的反转录和整合过程, 而是强烈抑制细胞周期 蛋白D1 的表达, 使细胞周期停止在复制前期( G1 期) 。进一步 研究发现转录因子 S p l 可能是此类天然抗 H I V 一 1 化合物作用 的靶点 。 3 5对药物代谢的影响 欧前胡素对药物代谢酶 - 细胞色素 P 4 5 0和谷胱甘肽 S 转移酶的活性有一定的影响。Kl e i n e r H E I2 等研究了简单香豆 素 、 线型呋喃香豆素和角型呋喃香豆素对小鼠肝脏药物代谢酶 ( 细胞色素P 4 5 0和谷胱甘肽 s 转移酶 , G S T )活性的影响, 发 现这几种香豆素均能提高谷胱甘肽 s 转移酶的活性,而线型 3 9 5 6现代生物医学进展 www s h e n g wu y i x u e c o m P r o g r e s s i n Mo d e r n B i o me d i c i n e V o L 1 0 NO 2 0 OC T2 0 1 0 呋喃香豆素的代表化合物欧前胡素还能显著提高 P 4 5 0的活 性, 尤其是 P 4 5 0 2 B和 3 A亚型。 4结论与展望 综上所述, 欧前胡素具有广泛的药理作用, 有较高的应用 价值。 对其药效学虽已有一定研究, 但其作用机制仍不甚明了。 作用机制的深入研究将对欧前胡素的直接应用或作为前体物 质进行改造有重要的指导作用。 随着对欧前胡素提取分离方法 和药理机制研究的深入, 对于阐明以欧前胡素为主要成分中药 的药效物质基础及新药的研发均将具有重要的意义。 参 考 文 献( R e f e r e n c e s ) 1 】J i a n - Y u He , We i Z h a n g , L a n g C h o n g He I mp e r a t o r i n i n d u c e s v a s o d i l a t a t i o n p o s s i b l y v i a i n h i b i t i n g v olt a g e d e pe n d e n t c a l c i u m c h a n n e l a n d r e c e p t o r - me d i a t e d C a 2 i n fl u x a n d r e l e a s e J E u r o p e a n J o u rna l o f P h a r ma c o l o g y , 2 0 0 7 , ( 5 7 3 ) : 1 7 0 - 1 7 5 2 常新全, 丁丽霞 中药活性 成分分析手册 M 北京: 学苑出版社, 2 0 0 2 : 6 O 1 6 0 2 Ch a n g Xi n - q u an , Di n g Li x i a A Ha n d bo o k o n An a l y s i s o f t h e Ac t i v e C o mp o s i t i o n i n T r a d i t i o n a l C h i n e s e Me d i c i n e M B e ij i n g : X u e y u a n Pu b l i s h i n g Co mp a n y , 2 0 0 2 : 6 0 1 6 0 2 3 粱明金, 杨广德, 贺浪冲 白芷 中欧前胡素的提取方法研 究【 J 中成药, 2 0 0 0 , 2 2 ( 1 2 ) : 8 2 9 8 3 1 L i ang Mi n g - j i n , Y a n g Gu a n g d e , He L a n g c h o n g S o l v e n t E x t r a c t i o n Me t h o d s o f l mp e r a t o r i n i n R a d i x An g e l i c a e D a h u r i c a J C h i n e s e T r a d i t i o n a l P a t e n t Me d i c i n e , 2 0 0 0 ,2 2 ( 1 2 ) : 8 2 9 8 3 I 4 袁瑜, 张 良, 李玉锋, 等 渗漉法提取 白芷总香豆素的工艺研 究 J 时珍 国医国药, 2 0 0 8 , 9 ( 2 ) : 3 0 2 3 0 3 Yu a n Yu , Z ha n g L i an g , L i Yu f e n g , e t a 1 Re s e a r c h o i3 t h e Pe r c o l a t i o n E x tr a c t P r o c e s s o f C o u ma r i n s i n An g e l i c a e D a h u r i c a J L i s h i z h e n Me d c in e a n dy l a t e r i a Me d i c a Re s e a r c h , 2 0 0 8 , 9 ( 2 ) : 3 0 2 3 0 3 【 5 董芙蓉, 李慧, 孙学刚, 等 干燥方法对白芷醇提取物有效成分的影响 J 安徽 中医学院报,2 0 0 7 ,2 6 ( 6 ) :4 5 4 7 Do n g F u r o n g , Li Hui , S u n Xu e g a n g , e t a 1 T he I nfl u e n c e s o f Di ffe r - e n t Dr y i n g M e t h o d s o n t h e Co n t e n t s o f I mp e r a t o r i n an d I s o i mp e r a - t o r i n i n E x tr a c t s o f A n g e l i c a d a h u r i c a J J o u r n a l o f An H u i T C M C o l - l e g e , 2 0 0 7 , 2 6 ( 6 ) : 4 5 4 7 6 】郑翠英, 夏艳姣,徐超群 白芷中香豆素类成分的提取f J 】 华西药学杂 志, 2 0 0 8 , 2 3 ( 6 ) : 6 8 3 - 6 8 4 Z h e n g C u i y i n g , X i a Ya n - j i a o , Xu C h a o q u n E x t r a c t i o n o f c o u ma r i n s in R a d i x An g e l i c a d a h u r i c a J WC J P S , 2 0 0 8 , 2 3 ( 6 ) :6 8 3 6 8 4 7 】刘文, 韩笑, 王学勇 超临界 C O 2萃取 白芷中欧前胡素的研究 J 中 国药学杂志, 2 0 0 3 , 3 8 ( 2 ) : 9 9 1 0 0 Li u W e n , Han Xi a o , W an g Xue - y o n g S t ud y o n e x t r a c t i o n o f i mp e r a t o r i n i n An g e l i c a d a h u r i c a b y s u p e r c r i t i c a l fl u id J _1 C h i n P h a r m J , 2 0 0 3 , 3 8 ( 2 ) : 9 9 1 0 0 8 L u s z c z k i J J ,Gl o w n i a k K C z u c z wa r S J ,e t a 1 T i me c o u r s e a n d d o s e r e s p o n s e r e l a t i o ns hips o f i mpe r a t o r i n i n the mo u s e ma x i ma l e l e c t r o s h o c k s e i z u r e t h r e s h o l d mo d e l J Ne u r o s c i R e s , 2 0 0 7 , 5 9 : 1 8 2 2 9 C h o i S Y, Ah n E M, S o n g MC, e t a 1 In v i t r o GA B A tr a n s a mi n a s e i n - h i b i t o r y c o mp o u n d s f r o m t h e r o o t o f An g e l i c a d a h u r i c a J P h y t o t h e r Re s , 2 0 05 , 1 9 : 8 3 9 8 4 5 1 0 De k e r me n d j i an A i J , Ni e l s e n M, e t a 1 C h ara c t e r i s a t i o n o f t h e f u r a - n o c o u ma r i n p h e l l o p t e r i n a s a r a t b r a i n b e n z o d i a z e p i n e r e c e p t o r p a r t i a l a g o n i s t i n v i t r o J Ne u r o s c i L e t t , 1 9 9 6 , 2 l 9 : l 5 1 - 1 5 4 1 1 B e r g e n d o r ffO, D e k e r me n d j i a n K, Ni e l s e n M, e t a 1 F u r a n o c o u ma fi n s w i t h a ffin it y t o b r a i n b e n z o d i a z e p i n e r e c e p t o r s i n v i tr o J P h y t o c h e m i s t r y , 1 9 9 7 , 4 4 : l 1 21 - l 1 2 4 1 2 L u s z c z k i J J ,G l o wn i a k K, C z u c z wa r S J I mp e r a t o r i n e n h a n c e s t h e p r o t e c t i v e a c t i v i t y o f c o n ve n t i o n a l an t i e p i l e p t i c d rag s a g a i n s t ma x i rea l e l e c tr o s h o c k i n d u c e d s e i z u r e s i n mi c e J E u r J P h a r ma c o l , 2 0 0 7 5 7 4 : 1 3 3 一 l 3 9 1 3 Ni e H, Me n g L Z , Z h o u J Y I mp e r a t o r i n i s r e s p o n s i b l e f o r t h e v a s o d i l a t a t i o n a c t i v i t y o f An g e l i c a Da h u r i c a v a r F o r m o s an a r e g u l a t e d b y ni t r i c o x i d e i n an e n d o t h e l i u m d e p e n d e n t ma n n e r J C h i n J I n t e g r Me d 2 0 0 9 , 1 5 ( 6 ) : 4 4 2 4 4 7 1 4 Z h a n g Y, Ya n J u n C a o , Yi n g Z h u a n Z h an, e t a 1 F u r a n o c o u ma r i n s - i m- p e r a t o r i n i nh i b i t s myo c ard i a l h y p e r t r o p h y bo t h i n v i tro a nd in Vi v o J F i t o t e r a p i a , 2 0 1 0 , Au g 4 E p u b a h e a d o f p r i n t 1 5 S i g u r d s s o n s ,Og r n u n d s d o R i r H M,Gu d b j a r n a s o n s A n t ip r o l i f e r a t i v e e ff e c t o f A n g e l i c a a r c h a n g e l i c a fru i t s J Z N a tu r f o r s c h C,2 0 0 4 , 5 9 r 7 + 8 ) : 5 2 3 - 5 2 7 1 6 Kim YK Ki m YS , R y u S Y A n t i p r o l i f e r a t i v e e ff e c t o f f t t r a n o c o u ma tin s fro m t h e r o o t o f Ang e l i c a d a h u r i c a o n c u l t u r e d h u ma n t u mo r c e l l l i n e s J P h y t o t h e r R e s , 2 0 0 7 , 2 1 ( 3 ) : 2 8 8 2 9 0 1

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