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!“# 年 # 月 $%:#“ -“#K ( “C4A- 3;“3;2=9 2 -“?4#9 3;29 4=; 2 B#“ :#“ -“#K ( 0.7L#( 37 2 2 ) :“,=24,4,5 C4BB9 “B %2L# 2 -“?4#9 3;29 4=; 2 B#“ “ “B =;9 4,;4?4=“ .# “ 2 9=4-2=9C ?D “C4A- C“C9:D# A#B2=9.3“#D2:( GOG.)+P) $0;9 2-4,“ 2:4C :“-3“4=4“, “B ()*+! 2 2,2#DN9C ?D ;45; 39:L.2 :“#A-,(.!# - I,$ “ - 4$ C$ )4=; :“#A-, =9-399 4=; 2 B#“ 4,C4:2=9 =;2= ()*+!4 4=; ()*+!2 4,M9=452=9C$ 0;9 4,;4?4=“ 24, 2,C D92= 39 + =;2, “=;9$ :26 ;-/3:59# :;04+ “) 离子交换色谱柱 () 43 ? * % 43 5* ;* ) 购自 %12032452 公司。灵芝发酵液由本课题 组制备, 所用试剂为分析纯。 !#“色谱条件 凝胶色谱: 流动相为 $) 33/.A # 的磷酸钠缓冲 液 (-B G ) ; 流动相 ! 为 !) 33/.A # 醋酸钠溶液, 流动相 9 为 !) 33/.A # 醋酸钠溶液$甲醇$乙腈 (体积比为 + !+ !) , 梯度洗脱, 流速 * ) 3#A 357; 柱温 #) H; 进 样量 $ “#; 检测波长 “( 73。 !$“实验方法 样品的粗分离: 取灵芝发酵液 ) 3#, 旋转真 空浓缩为原来的 A$ 后, 加入乙醇至乙醇体积占溶 液总体积的 “)F 后, 以( ) 0A 357 的速率离心去除 沉淀, 上清液中继续加入乙醇至其体积分数为 ()F 后, 离心 收集 所得沉淀, 即得 乙 醇 分 级 沉 淀 部 分 (“)F I()F) 。 抑制剂的粗提取: 将前述乙醇分级沉淀部分复 溶于磷酸盐缓冲液中, 以, $) 0A 357 离心除去不溶 物, 取上清液冻干, 即为抑制剂粗品。 #“结果与讨论 #!“蛋白酶抑制剂的分离纯化 #!“凝胶色谱 称取 “G “” 节所制备的抑制剂粗品 “) 3+78 4/+485/7:$ 3#A 8L+G M+8+485/7 28 !() 73G !0:G () );!G “#$ #) );“G “#$ !) );#GN ) )G 可以看出, 该抑制剂粗品的凝胶色谱图中有 # 个峰, 测定发现峰 ! 和峰 “ 交叠处的流出液有较强 的蛋白酶 ! 抑制活性, 其相对分子质量在! )与 #$ )之间。重复实验 “ 次, 合并具有抑制剂活性 的流出液, 透析冻干, 得到冻干粉。 图 #“4+0*( .57+,!() 73;;/88+; .57+,!$ 73G #!#“强阴离子交换色谱 称取 “!G G ” 节所制备冻干粉 !$ 3, 溶于 ! 3# $) 33/.A # 的 *05C$BD. 缓冲液 (-B (* () 中用 于离子交换色谱分离, 结果见图 !。 (%! !第 ! 期田亚平等: 灵芝发酵液中蛋白酶抑制剂 “#$%9) 的含量相对很低, 因此 “#$%(/ .78,*-2,)8-076 ?2,213):!$ (A !$纯度鉴定 !将几次离子交换色谱分离富集所得的 “#$%I9 J25, “?5)*9+ .,D?2 N O,.?33+9* KA /)2( $)?9( D4,,#*$,( (#(叶波平, 王庆华,周书进,金国虔,奚!涛,吴梧桐A 药物生物技术) , “(李平作,章克昌A 微生物学通报) ,“ +S $9+

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