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文档简介

肿瘤基因突变检测标本,病理评估合格的 标本适用于EGFR 基因突变检测,建议采用灵敏度 高的ARMS检测 方法,用于突变检测的标本,1. Dacic S. Adv Anat Pathol 2008; 15(4):241-247. 2. Sequist LV, et al. Clin Cancer Res 2006; 12(14S):4403s-4406s. 3. Bai H, et al. J Clin Oncol 2009; 27(16):2653-2659.,肿瘤基因突变检测标本类型,冰冻组织 外科手术标本:最好标本,可得高质量肿瘤DNA 支气管镜、穿刺活检测标本:量少,但肿瘤DNA质量仍好 固定包埋组织 外科手术标本:可得足量肿瘤DNA,但DNA片段化 支气管镜、穿刺活检测标本:可得肿瘤DNA量少且片段化 细胞学标本 胸水、肺泡冲洗液和痰液标本:肿瘤细胞含量不确定,通常很少 血液标本 血清、血浆标本:含肿瘤DNA,但含量不稳定,DNA片段化 循环血肿瘤细胞:可得较高质量肿瘤DNA,但量很少,不同类型标本处理方式,新鲜组织标本: 1、迅速低温放置,如有条件可放置-80或者液氮保存,如果没有条件可使用-20保 存,但是保存时间不宜太久; 2、放入组织保存液中保存,组织保存液的能渗透0.5cm厚度的组织,因此用组织保存液保存时,建议组织不宜过大。核酸在组织保存液中 37 稳定存放1天,25 稳定存放一周,4 1个月或20 长期存放 石蜡组织标本 1、手术、穿刺、活检标本等放入10%中性福尔马林中固定后制作成蜡块,可保存数年之久。(病理科常规处理样本方式) 细胞学标本 1、胸水样本、心包积液、脑脊液等,建议在收到标本后两个小时内离心收集沉淀细胞进行检测,如来不及操作可离心后将沉淀冻存至-20保存,等使用时取出;亦可将沉淀包埋成蜡块后再切片检测; 2、或者将样本直接放置4保存过夜再离心收集沉淀,可能会一定程度影响DNA的完整性,但一般不影响实验结果。细胞学标本建议涂片后经病理诊断含有肿瘤后在进行检测。 血液标本 1、血液标本收集后使用EDTA抗凝,由于血浆、血清中游离核酸以及循环肿瘤细胞量极少,建议尽可能在收集标本后2小时内进行核酸提取,以避免核酸更深降解。,标本通常较大,能提供足够的肿瘤组织用于检测 标本可以是冰冻或福尔马林固定组织,手术标本,标本接收、固定,组织处理、石蜡包埋,切片及H&E染色,组织学观察,支气管镜活检,标本较小 通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理 建议采用灵敏度高的ARMS检测方法,细针穿刺活检,标本较小 通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理 建议采用灵敏度高的ARMS检测方法,细胞学标本,细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少,需要采用灵敏度高的ARMS检测方法 建议有条件的病理科制备细胞蜡块: 处理流程:细胞学标本经离心处理后,常规福尔马林固定、处理及石蜡包埋即可 制备细胞蜡块的好处: (1)便于长期保存;(2)方便用于EGFR基因突变的检测及其他分子生物学标记物的检测,胸水或支气管刷片或痰液,涂片、染色,病理诊断,液基细胞学,病理诊断,细胞蜡块,切片染色,病理诊断,四、胸水标本处理流程,收集胸水50-500mL,室温静置30分钟,吸去上清,剩余 5-50mL,沉淀物室温250g离心10分钟,吸去上清,低温保存,酒精固定涂片,福尔马林固定切片,福尔马林固定的标本 固定要及时,离体后即时处理1h 固定液:10% 中性缓冲福尔马林(新鲜配制) 固定液的量:应为组织体积的10倍以上 固定时间:小组织6-12h,大标本6-48h 冰冻标本 组织离体后立即速冻1h,标本的质量控制,肺转移性肝细胞性肝癌,未检测到肿瘤组织,病理评估不达标样本导致EGFR突变检测呈阴性结果,小细胞性肺癌,肿瘤细胞太少,4 例肺肿块切除标本EGFR突变检测呈阴性,Rubbish In; Rubbish Out,选择正确、合适的肺癌组织,是保证突变检测成功第一步及重要的步骤,诊断:确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌 肿瘤量:确保有足够的肿瘤组织用于突变检测 尽量保证200-400个肿瘤细胞 对于技术成熟的实验室,可以尝试进行200个肿瘤细胞的标本检测 5-10uM 10张切片能满足突变检测需求 当细胞数较少时,可以适当增加切片数,以满足检测需求 肿瘤比例

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