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fat1转基因小鼠的构建与鉴定.docfat1转基因小鼠的构建与鉴定.doc

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FAT1转基因小鼠的构建与鉴定【摘要】目的构建和鉴定携带有外源FAT1基因的转基因小鼠。方法将FAT1基因的CDNA与动物表达载体PEFNEO连接,构建PEFFAT1重组质粒,酶切、测序鉴定正确后,以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核中,并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠,通过PCR、SOUTHERNBLOT杂交等方法确立阳性整合有目的基因的G0代小鼠。结果成功构建了PEFFAT1重组质粒,将其显微注射到小鼠受精卵中,得到G0代小鼠,PCR、SOUTHERNBLOT杂交确立了4只整合有FAT1基因的首建鼠。结论FAT1基因可整合到小鼠体内,得到的转基因小鼠为研究FAT1基因的生物学功能提供了动物模型。【关键词】小鼠转基因DNA重组FAT1基因[ABSTRACT]OBJECTIVETOCONSTRUCTANDIDENTIFYTHETRANSGENICMICEWITHEXTRINSICFAT1GENEMETHODSFAT1CDNAANDANIMALEXPRESSIONVECTORPEFNEOWERECONJUGATEDTOCONSTRUCTTHERECOMBINANTPLASMIDPEFFAT1WHICHWASDIGESTEDBYRESTRICTENZYMEANDSEQUENCEDCORRECTLYTHEOBTAINEDLINEARRECOMBINANTPLASMIDPEFFAT1WASMICROINJECTEDINTOTHEARSENOBLASTSOFMOUSEZYGOTE,WHICHWASIMPLANTEDINTOTHEUTERUSTOPRODUCETRANSGENICMICEPCRANDSOUTHERNBLOTWEREPERFORMEDTOIDENTIFYTHEPOSITIVEG0GENERATIONOFFAT1TRANSGENICMICERESULTSRECOMBINANTPLASMIDPEFFAT1WASSUCCESSFULLYCONSTRUCTEDANDFOURG0MICEWITHINTEGRATEDFAT1GENEWEREIDENTIFIEDVIAPCRANDSOUTHERNBLOTCONCLUSIONFAT1GENECANBEINTEGRATEDINTOMOUSETOOBTAINTHETRANSGENICMOUSETHATPR
编号:201312182203504070    类型:共享资源    大小:32.00KB    格式:DOC    上传时间:2013-12-18
  
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