HPLC法测定奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量.doc

HPLC法测定奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量【关键词】奥拉西坦摘要:目的建立奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量测定方法。方法高效液相色谱法，用氨基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈水（体积比8020），检测波长210nm。结果奥拉西坦质量浓度在0.0250.20mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=10000）；精密度、重复性试验结果RSD分别为0.10%和0.30%；平均回收率为100.85%，RSD0.79。结论本法简便，灵敏，准确，重现性好，建立的定量方法可用于控制该注射液的质量。关键词:奥拉西坦；注射液；含量测定；高效液相色谱法Abstract:ObjectiveToestablishaquickandefficienthighperformanceliquidchromatographicassayforthedeterminationofoxiracetaminoxiracetaminjection.MethodChromatographywasperformedonacolumn(250/4.6NUCLEOSIL1005NH2)usingacetonitrilewater(8020)asthemobilephaseunderthedetectionwavelengthof210nm.ResultThelinearrangewas0.0250.20mg/ml（r=1.0000）.Theaveragerecoverywas100.85%andRSD0.79%.ConclusionThemethodisconvenient,sensitiveandaccurateforthequalitycontrolofoxiracetaminjection.Keywords:oxiracetam；oxiracetaminjection；contentdetermination；HPLC奥拉西坦注射液主要成分为奥拉西坦。奥拉西坦（化学名：4羟基2氧代1吡咯烷酰胺）是一种智能促进药，能改善思维记忆功能和学习成绩，对防治老年性痴呆疗效显著1。测定奥拉西坦含量的方法，目前国外文献报道有柱切换法2和柱前衍生化法3；国内有凯氏定氮法。本文采用HPLC法测定奥拉西坦的含量，为控制该产品的质量提供依据。1仪器与试药Agilent1100sereil高效液相色谱仪；METTLERAE240电子分析天平（1/10万）；奥拉西坦工作对照品由岳阳市制药三厂提供（质量分数99.7%），奥拉西坦注射液（广东世信药业有限公司提供，批号：030901、030902、030903，规格：5mL1g），实验用水为超纯水；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件采用色谱柱250/4.6NUCLEOSIL100-5NH2，流动相为乙腈水(体积比8020)，流速1.0mL/min，检测波长210nm，进样20L，柱温为室温。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含约012mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备精密量取样品2mL置100mL的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。再精密量取3mL置100mL的量瓶中，加流动相稀释制成每1mL中含0.12mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。2.3阴性样品干扰试验按样品处方量除不加奥拉西坦外，按其工艺制备阴性制剂。再按“供试品溶液的制备”项下方法制得阴性对照液。按上述色谱条件测定，结果显示阴性制剂对奥拉西坦测定无干扰，HPLC图谱见图1。2.4线性关系精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含1mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取0.50，1.0，2.0，3.0，4.0mL置于20mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积(A)对质量浓度()进行回归，得回归方程：A10375+22.11，r1.0000。结果表明奥拉西坦在0.0250.2mg/mL范围内峰面积与质量浓度呈良好线性关系。2.5精密度试验取浓度为0.1mg/mL的对照品溶液，连续进样5次，记录峰面积，RSD为0.10%，表明精密度良好。2.6稳定性试验取同一供试品溶液在0、1、2、3、4、5、6、7、8h分别进样，记录峰面积。结果平均峰面积为1316.2，RSD031，表明供试品溶液在室温下8h内稳定。2.7重复性试验取样品（批号为030903），按供试品溶液制备方法配制6份供试品溶液,按供试品含量测定方法测定，测得平均值为101.02，RSD0.30，结果表明该方法重复性好。2.8回收率试验取已知含量的同批样品3份，分别精密加入奥拉西坦对照品160mg(80%)、200mg(100%)、240mg(120%),加流动相溶解并稀释制成每1mL含0.12mg的奥拉西坦溶液。照上述色谱条件测定，各进样3次，记录色谱图，计算加样回收率。结果见表2。表2加样回收率试验结果（略）2.9供试品的测定取样品3批，按上述色谱条件进行测定，按外标法计算含量并与凯氏定氮法作比较。凯氏定氮方法：精密量取本品1mL，置凯氏烧瓶中，加水250mL，摇匀，加40%氢氧化钠溶液20mL，连接蒸馏装置，另取2%硼酸溶液40mL作为吸收液，加入甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，进行蒸馏，至吸收液的总体积约为200mL时，停止蒸馏，吸收液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每mL的硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于15.82mg的C2H10N2O3。结果见表3。表3含量测定结果（略）3讨论本法操作简单，结果准确，方法可靠，重现性好。与凯氏定氮法相比，操作更为简便快速，可用于奥拉西坦注射液的含量测定，为该制剂的测定提供了一种新方法。将按“2.9”项下方法配制的每1mL中约含1.0mg的样品溶液做降解试验（强光、强热、强酸），结果降解产物均能与主峰达到基线分离，对主成分测定不产生影响，说明本色谱系统的专属性良好。HPLC图谱见图2。参考文献:1江一帆.世界最新药物手册M.中国医药科技出版社,1994:381.2LECAILLONJB.Determinationofoxiracetaminplasmaandurinebycolumn-switchinghighperformanceliquidchromatographyJ.JChromatogr,1989,497:22