HPLC法测定异烟肼注射液含量.doc

HPLC法测定异烟肼注射液含量【摘要】目的建立用HPLC法测定异烟肼注射液含量的方法。方法HPLC法，采用HypersilBDSC18柱，以乙腈0.075molL-1磷酸二氢钠溶液（体积比595）为流动相，流速为1.0mLmin-1，检测波长262nm。结果异烟肼在9.9099.00gmL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999），平均回收率100.3%（RSD=1.0%）。结论本法操作简便，快速准确，重复性好，可作为本品质量控制方法。【关键词】HPLC法；异烟肼注射液；异烟肼Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminingthecontentofisoniazidinisoniazidinjection.MethodSampleswereanalyzedonanHypersilBDSC18columnusingacetonitrile0.075molL-1sodiumdihydrogenphosphate(595)asmobilephase.Theflowratewas1.0mLmin-1andthedetectionwavelength262nm.ResultsTherewasagoodlinearityforisoniazidintherangeof9.90-99.00gmL-1(r=0.9999).Theaveragerecoverywas100.3%withRSD1.0%.ConclusionThemethodissimple,rapidandaccurate,whichissuitableforthequalitycontrolofisoniazidinjection.Keywords:HPLC；isoniazidinjection；isoniazid异烟肼注射液为抗结核药，卫生部药品标准采用溴酸钾滴定法测定异烟肼含量1。本文参照文献2建立了HPLC法测定异烟肼注射液的含量，试验结果表明，本法操作简便，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。1仪器与试药1.1仪器Agilent1100液相色谱仪（安捷伦公司），HypersilBDSC18柱（菲罗门公司），TU1901型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），AG285电子天平（梅特勒-托利多公司）。1.2试药异烟肼对照品（质量分数99.4%，批号T2006236，广州白云山明兴制药有限公司提供）。异烟肼注射液（批号061101，061102，061103；规格2mL100mg，广州白云山明兴制药有限公司生产）。乙腈（色谱纯，德国默克公司），磷酸二氢钠（分析纯），水（注射用水，广州白云山明兴制药有限公司自制）。2方法与结果2.1对照品溶液的制备取异烟肼对照品约100mg，精密称定，置100mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（0.9900mgmL-1）；精密量取2mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.03960mgmL-1的对照品溶液。2.2供试品溶液的制备精密量取异烟肼注射液2mL（约相当于异烟肼100mg），置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。2.3空白对照溶液的制备除异烟肼外，按处方采用“2.2”项下的方法制备空白对照溶液。2.4色谱条件与系统适用性试验色谱柱为HypersilBDSC18柱（200mm4.6mm，5m），流动相为乙腈0.075molL-1磷酸二氢钠溶液（体积比595），流速为1.0mLmin-1，检测波长为262nm，柱温为30，进样量为20L。分别将对照品溶液、供试品溶液与空白对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数以异烟肼峰计算应不低于6000。空白对照溶液在异烟肼峰处无干扰。结果见图1。图1对照品（A）、样品（B）及空白对照（C）高效液相色谱图（1.异烟肼）略2.5线性关系考察分别精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL对照品贮备液，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依法测定，记录色谱图，以峰面积（A）为纵坐标、质量浓度()为横坐标计算得回归方程：A=32.697-14.975，r=0.9999。结果表明，异烟肼在9.9099.00gmL-1范围内线性关系良好。2.6精密度试验取对照品溶液，连续重复进样5次，结果峰面积的RSD为0.04%，表明方法精密度良好。2.7重复性试验取同一批号异烟肼注射液（061101）5份，依法测定，计算，结果异烟肼含量的RSD为0.4%，表明方法重复性较好。2.8稳定性试验取供试品溶液于0、3、6、12、24、48h分别依法测定，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.6，表明供试品溶液在48h内稳定。2.9回收率试验精密量取已知含量为1.023mgmL-1的异烟肼注射液（批号061101）1.0mL，置50mL量瓶中，分别精密加入对照品贮备液（0.9900mgmL-1）0.8、1.0、1.2mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，依法测定。结果见表1。表1异烟肼回收率试验结果略2.10样品测定取本品，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法计算异烟肼含量。同时采用溴酸钾法测定含量。结果见表2。表2样品测定结果略3讨论3.1测定波长的选择照紫外可见分光光度法，取对照品溶液在200400nm的波长范围内扫描，绘制吸收光谱图，测得异烟肼的最大吸收波长为262nm；另取空白对照溶液在此范围内扫描，发现在异烟肼最大吸收峰处无干扰，故选择262nm为检测波长。3.2流动相的选择曾选用不同比例的甲醇0.075molL-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.025molL-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.075molL-1磷酸二氢钠溶液为流动相进行试验，发现以乙腈0.075molL-1磷酸二氢钠溶液（体积比595）为流动相的测定结果比较理想，故确定以此为流动相。3.3本法与现有药品标准方法的比较经试验，本文方法与溴酸钾法1测定异烟肼注射液的含量结果无显著差异，且本法灵