MTT法测定肺癌对化疗药物敏感性的实验分析.doc

MTT法测定肺癌对化疗药物敏感性的实验分析【摘要】目的研究肺癌患者外周血淋巴细胞抗癌药敏试验和化疗疗效的相关性，为临床肿瘤个体的化疗疗效提供有效地依据。方法用MTT吸光度法来测定我院收治的30例肺癌患者外周血标本对临床上常用的几种化疗药物敏感性或者耐药性，然后比较其差异。结果肺癌化疗的敏感性个体存在的差异是比较大的，各个药物对患者淋巴细胞的抑制率和平时具体医疗事件中临床上得到的数据是一致的，各种用药方案中存在比较大的差异（P<；0.05）.结论患者外周淋巴细胞抗癌药敏试验，对临床上肿瘤化疗个体的指导和疗效预测有很大价值。【abstract】objectivetostudythelungcancerpatientsperipheralbloodlymphocytecancerdrugsusceptibilitytestandchemotherapycurativeeffectofcorrelation,forclinicalcancerindividualchemotherapycurativeeffectprovideeffectivebasis.MethodsusingMTTmethodtodeterminethespectrophotometrywere30casesofourpatientswithlungcancerperipheralbloodofclinicalspecimensofseveralnormalchemotherapydrugsensitivityordrugresistance,andthencomparethedifference.Resultsthesensitivityofthelungcancerchemotherapyindividualdifferencesislarger,theelderbrotherthedrugtotheperipheralbloodlymphocyteinhibitionratetothespecificmedicalincidentwhenpeaceclinicaldatafromisconsistent,allkindsofexistingintheregimenofthebigdifference(P<；0.05).Conclusionpatientsperipherallymphocytescancerdrugsusceptibilitytestofclinicalcancerchemotherapy,individualguidanceandcurativeeffectofthepredictionisofgreatvalue.【关键词】MTT肺癌化疗在临床上，肺癌患者的死亡率极高，并且还在逐年增加，化疗是现代医学上治疗肺癌尤其是晚期肺癌的最有效的手段之一，长期以来，大多数医生在利用化疗治疗肺癌患者时都采用常规的治疗方法，但实际上肿瘤和其他大多数病症一样，也存在着个体之间的差异，而且大量临床实践表明，化疗的名感性差异和患者肿瘤细胞的耐药性有关，因此在治疗之前对要去进行敏感性测试可以使药物更加适应不同个体，并且可以使治疗更加个性化和合理化。收集我院在2010-2011年间收治的采用四甲基偶氮唑盐（MTT）治疗的32例肺癌患者的外周血淋巴细胞进行体外培养后检测抗药敏感性，根据个体的敏感程度进行个性化化疗，并观察患者敏感记录和化疗疗效之间的相关性。1资料与方法1.1实验观察患者的情况1.1.1一般资料我院在2010-2011年间收治的肺癌患者32例，男性14例，女性18例，所有患者均有非常典型的肺癌表现，鳞癌17例，腺癌15例，患者年龄在27-75岁之间，各位患者病灶均很明确，对患者进行性别、年龄、临床治疗历史和病程等方面进行分析，差异性较小（P>；0.05）没有统计学意义。1.1.2取血分别在32例患者身上取外周静脉血2ml。1.1.3试验用药品为32例患者所用的药物均为临床上治疗肺癌的常用药物，包括顺铂、多西紫三醇、长春瑞宾、吉西他滨，利用生理盐水配置母液，再用培养液配置工作液，对于工作液应当在20下保存以备使用。试验中的用药量结和临床上治疗普通患者一样。1.1.4试剂采用哈尔滨制药六厂出产的小牛血清、MTT和生理盐水配兑成2mg/ml的工作液，在20的条件下保存，天津天士力制药有限公司出产的完全培养液RPMI、淋巴细胞分离液、二甲基亚砜。1.2方法1.2.1分离和培养PBL的分离和培养要在无菌条件下进行，将2ml外周静脉血加入相同体积的Hanks液进行均匀混合，利用试管加入到4ml淋巴分离液中，每分钟离心2000圈，分离出PBL，再用Hanks液清洗两次，然后用含有15%小牛血清的RPMI培养液配置成单细胞悬液，活细胞数量可以达到90%以上，把细胞浓度控制在252/ml将去接入到孔板，每个孔保持在100ul。每个孔的加药量在20ul左右，设置8组单药组，每组设置4个复孔，然后将剩余的96个孔放入到37的二氧化碳孵化箱进行培养。1.2.2MTT检测在培养48h在每孔加入大约20ul的MTT工作液，然后把上清液去掉，每个孔加入100ulDMSO,然后稍微震动，以便使蓝色晶体充分溶解然后用酶标仪测量各个孔的光密度。1.2.3判断标准判断抑制率采用以下通用公式进行：抑制率=（1-药物的光密度值/对照组光密度值）100%；外周血淋巴细胞抑制率若>；20%即为敏感，药敏感率=药敏例数/总例数。1.3统计学分析通过对以上32例患者的年龄、性别、病程等进行分析比较，差异较小，没有实际统计学意义（P>；0.05）.对患者要敏感程度各种指标进行比较，并对所得数据采用SPSS10.0统计软件进行t检验，有显著性差异，有统计学意义（P<；0.05）.2结果3讨论随着现代医学的不断发展，临床上治疗癌症的新化疗药物不断被研发出来，但是在临床治疗中医护人员往往只注重治疗的一般疗效，对患者个体差异关注的比较少。实际上针对不同病例进行肿瘤治疗是非常必要的，可以使患者在癌症化疗过程中的到做好的治疗效果和最小的伤害，实践证明对患者采用MTT方法进行药敏试验可以掌握患者药敏程度。并且MTT方法简单易操作，并且操作快捷，是目前最有效的药敏试验之一，并且临床上得到了很好地证明。临床上医生可以在具体治疗时根据患者的药敏试验选择化疗药物。当然，MTT方法也可以根据不同的临床需要进行不同药物和不同浓度的用药方案，从而使临床用药更加注重患者个体差异。参考文献1SargentJM.TheuseoftheMTTassaytostudydrugresistanceinfreshtumoursamples.RecentResultsinCancerResearch,2011,31(05):55-582闵发胜,张宁,杨生斌,余汉中,孙建国,章必成.NSCLC患者外周血淋巴细胞抗癌药敏试验与化疗疗效的相关性J.华南国防医学杂志,2010,2(06):20-213HeinzLudwig；WernerLinkesch；HeinzGisslinger；ElkeFritz；HelmutSinzinger；Thaddä；usRadaszkiewicz；AndreasChott；RoswithaFlener；MichaelMicksche；Interferon-alfacorrectsthrombocytosisinpatientswithmyeloproliferativedisordersJ.CancerImmunologyImmunotherapy,4WalterBerger,UlrikeSetinek,PeterHollaus,ThomasZidek,ElisabethSteiner,L.Elbling,H.Cantonati,JohannesAttems,AndreaGsur,MichaelMicksche.MultidrugresistancemarkersP-glycoprotein,multidrugresistanceprotein1,andlungresistanceproteininnon-smallcelllungcancer:prognosticimplicationsJ.JournalofCancerResearchandClinicalOncology,2010,15(08):33-345邓晓斌,王珊,邹琳,李长春,章均,欧阳军.小儿恶性肿瘤化疗前后外周血多药耐药基因、多药耐药相关蛋白基因、肺耐药蛋白基因的变化及临床意义J.第三军医大学学报,2011,18(06):32-366BergerW,SetinekU,Hollau