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β半乳糖苷结合凝集素9真核表达载体的构建和鉴定.docβ半乳糖苷结合凝集素9真核表达载体的构建和鉴定.doc

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Β半乳糖苷结合凝集素9真核表达载体的构建和鉴定作者邱文洪吴丽娜叶许楚娟易路阳郭凯文【摘要】目的构建Β半乳糖苷结合凝集素9的真核表达载体并鉴定。方法通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Β半乳糖苷结合凝集素9基因,插入真核表达载体PCDNA31中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性。结果DNA测序和酶切鉴定证明Β半乳糖苷结合凝集素9基因正确克隆至PCDNA31的多克隆位点。结论成功构建Β半乳糖苷结合凝集素9的真核表达载体PGAL9。【关键词】GAL9;构建;真核表达载体半乳糖凝集素家族GALECTINFAMILY成员参与了许多生理和病理过程,包括细胞间黏附、细胞生长调节、RNA转录后加工、炎症反应、免疫调节、肿瘤的转化以及细胞的凋亡等1,2。Β半乳糖苷结合凝集素9GAL9是一种糖结合蛋白,属于半乳糖凝集素家族GALECTINFAMILY成员,组织分布广泛,在介导细胞分化、凋亡、黏附、细胞间聚集、炎症反应的调控和肿瘤转移等方面,发挥着重要作用3。目前对GAL9发挥作用的具体机制仍知之甚少,值得进一步深入探讨和研究,从而使GAL9作为疾病治疗的新的靶点成为可能。为此,本研究拟通过构建表达人GAL9蛋白的真核表达载体,为进一步研究GAL9的作用机制打下基础。1材料和方法11材料T4连接酶、限制性内切酶MBI,TAQ酶和RT试剂盒PROMEGA,RNA提取试剂盒INVITROGEN,质粒提取试剂盒、DNA凝胶纯化试剂盒QIAGEN,DNAMARKERTIANGEN,TRIZOL、1640培养基,人淋巴细胞分离液天津灏洋生物制品科技有限责任公司,胎牛血清杭州四季青生物工程材料有限公司,GALECTIN9引物英骏生物技术有限公司。12引物设计参照GENBANK上GAL9NM0095872序列设计引物如下上游引物P15CCAAGCTTGGGTTAAGTCGTTCCCTCTACAA3,下游引物P25CGGAATTCCGAGGACCCAGACTGCCCCAC3,下划线分别为HINDⅢ和ECORⅠ酶切位点,扩增GAL9的CDS序列,共1176BP。13分离人外周血单个核细胞静脉取血,加入肝素溶液10~50U/M1血样本抗凝,用PH72HANKS液将抗凝血稀释1倍;吸取人淋巴细胞分离液置于刻度离心管中,加入稀释的全血;2000R/MIN离心20MIN;吸取所有单个核
编号:201312182205304160    类型:共享资源    大小:30.00KB    格式:DOC    上传时间:2013-12-18
  
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abingge上传于2013-12-18

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