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短发夹RNA沉默hTERT 基因抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的实验研究.doc短发夹RNA沉默hTERT 基因抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的实验研究.doc

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短发夹RNA沉默HTERT基因抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的实验研究作者孙卫东于如同马衍刚【摘要】目的研究靶向人端粒酶逆转录酶(HTERT)的短发夹RNA(SHRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中HTERT基因表达的抑制作用,以及影响肿瘤增殖并诱导细胞凋亡的作用,为脑胶质瘤的基因治疗探讨新的依据。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型。将成功造模的36只裸鼠随机分为3组(每组12只)。HTERTSHRNA组肿瘤体内原位注射HTERT质粒SHRNA(PSHRNA)20ΜG脂质体60ΜLPBS;PBS组肿瘤体内原位注射PBS150ΜL;空质粒组肿瘤体内原位注射空质粒20ΜG脂质体60ΜLPBS。观察肿瘤生长情况。苏木精伊红染色观察肿瘤组织的病理改变,WESTERNBLOT检测HTERT蛋白的表达,钙依赖性磷脂结合蛋白V碘化丙啶双染流式细胞仪测凋亡率。结果成功建立稳定的裸鼠U251细胞皮下移植瘤模型。治疗5周后HTERTSHRNA组肿瘤体积较PBS组和空质粒组明显缩小,抑瘤率为582;病理学检查HTERTSHRNA组肿瘤生长受到抑制,肿瘤细胞散在稀疏,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡;WESTERNBLOT示HTERTSHRNA组HTERT蛋白表达受抑制;流式细胞仪检测HTERTSHRNA组肿瘤细胞凋亡率明显高于PBS组和空质粒组(PLT;001)。结论HTERTSHRNA可在裸鼠移植瘤体内有效发挥作用,抑制人端粒酶逆转录酶蛋白在体内表达,从而能有效抑制裸鼠胶质瘤增殖生长,促进肿瘤细胞凋亡。【关键词】徐州医学院附属医院神经外科,江苏徐州221002ABSTRACTOBJECTIVETOEXPLORETHEINHIBITORYEFFECTOFSILENCINGHUMANTELOMERASEREVERSETRANSCRIPTASEHTERTGENE′SSHORTHAIRPINRNASSHRNASONTHEGROWTHOFHUMANGLIOMAINNUDEMICEBYRNAINTERFERENCETECHNIQUETOAFFORDANEXPERIMENTALBASISFORCONCERNEDGENETHERAPYOFGLIOMAMETHODSHUMANGLIOMAU251CELLS,CULTUREDINVITRO,WEREUSEDTOESTABLISHMODELSO
编号:201312182240035033    类型:共享资源    大小:35.00KB    格式:DOC    上传时间:2013-12-18
  
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