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黄芩不同中医调剂品的HPLC 指纹图谱比较研究.pdf黄芩不同中医调剂品的HPLC 指纹图谱比较研究.pdf -- 5 元

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实际情况,将修正后的最佳提取条件定为提取时间4min,乙醇体积分数80,料液比1∶10。在此条件下紫草总萘醌的得率为0175,质量分数30133。参考文献1中国药典S1一部1200512黄志纾,张敏,马林,等1紫草的化学成分及其药理活性研究概况J1天然产物研究与开发,2005,1217328313SinghB,SharmaMK,MeghwaPR,etal1Anti2inflamma2toryacti2vityofshikoninderivativesfromArnebiahispidissi2maJ1Phytomedicine,2003,10375238014AssimopoulouAN,BoskouD,PapageorgiouVP1Antioxi2dantacti2vitiesofalkannin,shikoninandAlkannatinctoriarootextractsinoilsubstratesJ1FoodChem,2004,8743324315KimSH,KangIC,YoonTJ,etal1Antitumoractivitiesofanewlysynthesizedshikoninderivative,22hyim2DMNQ2S233J1CancerLett,2001,172171217516罗学娅,李明辉,伦永志,等1左旋紫草素抗副流感病毒作用J1中草药,2005,364568257117谢秀琼,邱明丰1对制剂中紫草成分和提取工艺的探讨J1中国药房,1997,826026118梁瑞红,谢明勇,刘薇1超临界CO2萃取新疆紫草萘醌得率的响应曲面分析J1食品科学,2004,25507627819史伟国,祖元刚,赵春建,等1匀浆法提取喜树果和喜树叶中喜树碱的研究J1林产化学与工业,2009,29179282110张琳,杨磊,贾佳,等1匀浆法提取长春花中长春碱、文多灵和长春质碱J1高校化学工程学报,2008,2957682773111赵春建,祖元刚,付玉杰,等1匀浆法提取沙棘果中总黄酮的工艺研究J1林产化学与工业,2006,26238240112杨磊,李家磊,祖元刚,等1印楝种子中印楝素A的匀浆提取工艺J1东北林业大学学报,2008,36965267113杨磊,肖长文,赵春建,等1pH控制匀浆法从迷迭香中提取鼠尾草酸J1黑龙江大学自然科学学报,2008,2545142518114田浩,刘玉,夏禄华,等1匀浆法提取花生植株中白藜芦醇J1东北林业大学学报,2008,36381283115祖元刚,赵春建,李春英,等1鲜法匀浆萃取烟叶中茄尼醇的研究J1高校化学工程学报,2005,1967572761116祖元刚,祖柏实,史权,等1打浆萃取装置P1ZL0227522510,2002209211117杨磊,马春慧,黄金明,等1兴安落叶松中二氢槲皮素提取方法的比较J1森林工程,2009,2556211118杨秀芳1正交实验法优选紫草的提取工艺J1中成药,2005,2733512353119李洪玲,乔秀文,曾宪佳,等1新疆紫草中紫草素的微波提取工艺优选J1时珍国医国药,2007,181148120白研,白粉云,毋福海,等1正交试验优选紫草提取工艺J1中药新药与临床药理,2006,17428922911黄芩不同中医调剂品的HPLC指纹图谱比较研究任子瑜,秦雪梅3①,薛黎明,李震宇,郭小青,张丽增山西大学中医药现代研究中心,山西太原030006摘要目的比较黄芩不同中医调剂品黄芩生饮片、3种酒制黄芩、条芩与枯芩样品之间的HPLC图谱,探讨各组样品间的化学差异。方法采用HPLC法。色谱条件HypersilODS2C18柱200mm416mm,5μm,流动相甲醇20105磷酸水溶液线性梯度洗脱体积流量110mL/min检测波长280nm。运用相似度软件、SIMCA2P与SPSS软件对指纹图谱进行分析。结果不同黄芩指纹图谱组间分类明显,组内集中性好生品与酒制品之间分类明显,差异很大不同酒制品相比,酒炒和酒炒炭样品比较相近,酒烘与酒炒样品则差异明显枯芩与条芩相比,差异明显。其中变化明显的成分是黄芩中黄酮类成分中极性较小的成分。结论证明了古代中医区别用药的合理性,为黄芩质量控制及综合评价提供可靠的科学依据,并为黄芩合理用药提供参考。关键词生黄芩酒制黄芩条芩枯芩HPLC指纹图谱中图分类号R28215文献标识码A文章编号02532267020100420573204黄芩为唇形科多年生草本植物黄芩Scutellar2iabaicalensisGeorgi的干燥根,始载于神农本草经。古文献记载黄芩用药有病在头面及手指,皮肤者,须用酒炒之,借酒力以上腾。咽之下脐之上须酒洗之,在下生用大凡生升熟降枯而飘者泻上焦之火,实而坚者,退下部之热清上用枯,清下用实,内行用醋,外行酒炒。可见,自古以来,为提高临床疗效,满足不同病症需求,黄芩的应用有别。杨云等1~4通过正交试验确定了黄芩最佳的酒炙与炭制工艺,并比较了黄芩炮制前后4种黄酮类成分量的变化。而在不同的酒黄芩炮制品中,酒烘样品色泽鲜亮均匀,工艺条件易于控制。对于黄芩酒炒样375中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第41卷第4期2010年4月①收稿日期2009211222基金项目山西省科技攻关项目042033作者简介任子瑜1984,女,河南省新乡市人,硕士研究生,研究方向为中药质量控制。Tel13835117085E2mailqinxmsxu.edu1cn3通讯作者秦雪梅Tel03517011202E2mailqinxmsxu1edu1cn品,中国药典对酒炒工艺参数的规定很笼统,但在炒制过程中,往往又会存在着炒制过度、外观色泽不均等问题5。对于枯芩与条芩,文献则大多以黄芩苷的量比较评价6,7,具有一定的局限性。指纹图谱是多组分、多靶点的整体综合控制中药质量的方法,已成为国内外广泛接受的中药质量控制评价模式8~11。本实验针对以上的问题,进行了酒烘黄芩、酒炒黄芩、酒黄芩炒炭3种酒制品与生品,条芩与枯芩等黄芩样品的HPLC指纹图谱研究,除了应用常用的相似度分析外,主要采用偏最小二乘法2显著性分析PLS2DA方法进行了模式识别分析并进一步寻找到了主要的差异峰,同时结合SPSS聚类分析,能更加全面、客观、科学评价黄芩的质量,为黄芩的合理用药及药效研究提供依据与参考。1仪器与试药Waters高效液相色谱分析仪1525泵,2487紫外检测器,Breez色谱工作站KQ2200DB型数控超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司BS210S电子天平北京塞多利斯天平有限公司。甲醇为色谱纯,水为纯净水,磷酸、乙醇均为分析纯黄芩苷、黄芩素对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号分别为1107152200514、1115952200604。黄芩药材经山西大学化学化工学院药学系主任秦雪梅教授鉴定为唇形科黄芩属植物黄芩Scutel2lariabaicalensisGeorgi1的干燥根。其中5份黄芩饮片分别购自山西太原长城药店、山西太原黄河大药房、山西华阳药业有限公司、山西太原荣华大药房与山西太原万民大药房,用一种饮片分别按中国药典方法炮制为酒烘、酒炒、酒炒炭样品。条芩与枯芩各5份分别收集于内蒙古各地。2方法与结果211色谱条件HypersilODS2C18柱200mm416mm,5μm,流动相为甲醇20105磷酸水溶液线性梯度洗脱,见表1体积流量110mL/min柱温室温进样量10μL检测波长280nm。表1流动相梯度洗脱程序Table1Gradientelutionofmobilephaset/min甲醇/0105磷酸水溶液/04060354060406040506040604060212对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷、黄芩素对照品适量,用甲醇溶解,摇匀,分别制成61、70μg/mL的对照品溶液。213供试品溶液的制备及测定取各种黄芩样品粉末过20目筛0115g,精密称定,置50mL具塞锥形瓶中,精密加入70乙醇20mL,称定质量,超声60min,放凉,补定质量,摇匀,滤过,用70乙醇定容至50mL量瓶洗涤,精密移取1mL置10mL量瓶,用甲醇定容,摇匀,即得。按211项下的色谱条件测定,记录HPLC图谱。214数据分析方法21411相似度计算按中国药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行计算,得出相应的对照图谱及相似度值。21412模式识别用Simca2P1115软件Umetrics,Umea,Sweden,以黄芩样品的HPLC图谱的各相对峰面积值为变量,进行了偏最小二乘法2显著性分析PLS2DA,并进一步寻找各组贡献较大的成分。21413聚类分析以黄芩样品的HPLC图谱的各相对峰面积值为变量,数据通过SPSS1116软件进行聚类分析与t检验,置信区间设为95,所得P值与0105比较,当P0105时没有显著性差异P0105,同样可以看出两种酒炒黄芩样品无显著差异,与图3和图4所得的结果相一致。B02生品B12酒烘样B22酒炒样B32酒炒炭样B02RadixScutellariaB12wine2bakcdRadixScutellariaB22winc2friedRadixScutellariaB32wine2friedcarbonRadixScutellaria图4生品和酒制黄芩之间的SPSS聚类分析图Fig14SPSSHierarchicalclusteringanalysisbetweenRadixScutellariaandwineRadixScutellaria21513条芩与枯芩比较条芩与枯芩的HPLC指纹图谱经相似度软件分析相似度为01915,说明二者之间的图谱整体来看差异不大。由图5中PLS2DA分析可以看出条芩A0和枯芩A1组内聚合状态较好,样品间的分类明显。进一步分析其Loarding图,显示条芩与枯芩之间的575中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第41卷第4期2010年4月图5条芩和枯芩PLS2DA分析的Scoreplot图A0条芩A1枯芩Fig15PLS2DAScoreplotofdriedRadixScutellariaA0andwizenedRadixSculellariaA1差异主要在于8、9、10号峰上面表3。与条芩相比,枯芩中8号峰和9号峰的量降低,10号峰即黄芩素的量升高。说明随着生长时间的延长黄芩中黄芩素的量升高。因此,本实验认为黄芩药材随着种植年限的增加,所含成分种类几乎没有变化,而是相关成分的量有明显变化。同时也证明了古代对条芩与枯芩在临床上区别应用的正确性。3讨论PLS2DA分析结果显示生品在不同的酒制过程中有近一半的成分发生明显变化,进一步证实了自古以来黄芩分生品与炮制品临床应用的合理性酒炒与酒炒炭样品在炒制过程中辅料相同,只是炒的程度不同。分析结果提示两种酒炒黄芩有相互代用的可能性,但还取决于进一步的临床实践中国药典黄芩炮制项下面关于黄芩炮制规定没有具体的工艺参数,因此本实验也同时证明了黄芩炮制工艺条件较宽的笼统规定是比较合理的。酒烘与酒炒样品,炮制方法明显不同,且差异也较大。因此,在药用方面,酒烘样品不能取代酒炒样品。中国药典及各地炮制规范中也尚未收载酒烘黄芩,临床仍应使用传统的酒炒黄芩。对相关峰的进一步研究与指认,将能更好地探讨成分变化对药效的影响。枯芩中10号峰黄芩素的量升高,5号峰黄芩苷与8、9号峰的量下降,这与文献报道12枯芩由于中空而缺少木质部,使黄芩苷的量大大降低相一致。如能进一步指认8、9号峰,可为枯芩与条芩临床区别用药提供参考。相似度评价软件是从宏观、整体的角度去评价药材的整体面貌,体现了指纹图谱整体性与模糊性的特点。主要适用于存在较大差异的样品如不同产地,不同种的样品,从而建立具有代表性的模式指纹图谱,作为对未知药材鉴别与评价的依据。PLS2DA则是以HPLC图谱峰的相对峰面积值为考察变量进行分析。模式识别与指纹图谱不同的是,在分析过程中,它把强的信号与较弱的信号放在同一水平上考虑13。适合于分析有细微区别的样品,并可以寻找到引起差异的主要标志物。本实验采用PLS2DA方法对有细微差异的不同黄芩样品进行了模式识别分析,并与SPSS聚类分析结果相互结合,能更好地进行聚类及寻找主要差异成分,从而避免了仅以单一指标或者有限的指标去评价药材质量的问题,为中药质量评价提供了新的思路与方法。参考文献1杨云,冯卫生1酒黄芩HPLC指纹图谱研究J1中药材,2006,291212892129212杨云,冯卫生1黄芩酒炙工艺及酒黄芩HPLC指纹图谱研究J1中成药,2007,295713271613杨云,闻永久1黄芩炭制工艺及其HPLC指纹图谱研究J1中国中药杂志,2007,321515182152114杨云,万焱1黄芩及其炮制品的HPLC图谱对比研究J1化学世界,200711421515薛黎明1酒黄芩炮制工艺及饮片标准研究J1中成药,2007,294545254716刘平,古今1RP2HPLC法考察枯芩与子芩不同部位中黄芩苷含量和不同炮制方法的影响J1中国药物应用与监测,200722322517赵婷,闫永红,王文全1热河黄芩中黄酮类成分的指纹图谱研究J1中国药品标准,2007,823423618王文燕,赵强,张铁军,等1决明子的HPLC指纹图谱及模式识别研究J1中草药,2009,401016382164119王文燕,赵强,张铁军,等1白芍的的HPLC指纹图谱及模式识别研究J1中草药,2009,4011181021813110王文燕,赵强,张铁军,等1牛黄降压丸的高效液相指纹图谱研究J1中草药,2010,41156257111王文燕,赵强,张铁军,等1川芎药材的的HPLC指纹图谱及模式识别研究J1中草药,2009,4012198021983112谢琴,华晓东,王菊美,等1不同产地、不同部位黄芩的黄芩苷含量测定J1上海中医药杂志,2001,339240113MichelF,YoungH,LucA,etal1MetabolomicanalysisofStrychnosnux2vomica,StrychnosicajaandStrychnosignatiiextractsby1HnuclearmagneticresonancespectrometryandmultivariateanalysistechniquesJ1Phytochemistry,2004,651993220011675中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第41卷第4期2010年4月
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abingge上传于2013-12-19

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