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神经生长因子联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤.doc神经生长因子联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤.doc -- 5 元

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1TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,China2AffiliatedHospitalofMedicalCollegeofChinesePeoplesArmedPoliceForce,Tianjin300162,China3FirstPeoplesHospital,Lingyuan122500,LiaoningProvince,ChinaFanGuangming★,Studyingformastersdegree,Attendingphysician,TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,ChinaPhoenix2a2163.comCorrespondencetoZhangSai,Doctor,Doctoralsupervisor,Chiefphysician,AffiliatedHospitalofMedicalCollegeofChinesePeoplesArmedPoliceForce,Tianjin300162,Chinazhangsai718yahoo.comReceived20100106Accepted20100227神经生长因子联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤★范广明1,张文彬2,张赛2,王丽君3NervegrowthfactorcombinedwithneuralstemcelltransplantationfortreatingspinalcordinjuryinratsFanGuangming1,ZhangWenbin2,ZhangSai2,WangLijun3AbstractBACKGROUNDTheeffectsofsimpleneuralstemcellNSCtransplantationonrepairofdamagedspinalcordarenotideal.PreviousstudieshaveshownthatnervegrowthfactorNGFhasbotheffectsofneuronnutritionandprocessgrowthpromotion,caneffectivelycontributetotherecoveryofneurofunctionfollowingspinalcordinjurySCI.OBJECTIVEToinvestigatetheeffectofneuralstemcelltransplantationcombinedwithNGFapplicationontherecoveryofmotorfunctionofratswithSCI.METHODSAtotalof42SpragueDawleyratswereusedtoestablishSPImodels,andthendividedrandomlyintothreegroupsmedium,simpleNSCsorNSCsNGF.At1weekfollowinginjury,medium,simpleNSCsorNSCsNGFwereseparatelyinjectedintodamagedsites.At1,2,4,6,8weekspostinjury,allanimalswereevaluatedonthehindlimbbehaviorwithBasso,BeattieandBresnahanBBBlocomotorratingscaleandinclinedplanetest.At4weeksposttransplantation,histopathologyhematoxylineosinstainingandBrdUimmunohistochemistrywereperformed.At8weeksposttransplantation,horseradishperoxidaseHRPnervetraceandsomatosensoryevokedpotentialtestingwereperformedtoobservetherecoveryofnerveelectrophysiology.RESULTSANDCONCLUSIONAt4weeksfollowinginjury,motorfunctionoftherathindlimbwassignificantlyimprovedinthesimpleNSCsgroupandNSCsNGFgroup.TherecoverywasrapidintheNSCsNGFgroupthanthesimpleNSCsgroupPsimpleNSCsgroupmediumgroup,therewassignificantdifferenceamonggroupsP单纯神经干细胞组培养液组且各组之间差异有显著性意义P单纯NSCs组培养液组,见表4及图1012。表4伤后各组大鼠BrdU阳性细胞数及HRP阳性神经纤维束Table4NumbersofhorseradishperoxidaseHRPpositivenervefibersandBrdUpositiveneuroninratsofeachgroupfollowinginjuryx_±s,n10GroupBrdUpositivecellnumber4wkposttraumaHRPpositivenervefibernumber8wkposttraumaMedium37.91±5.1210.42±1.71SimpleNSCs92.53±6.1741.21±2.42NSCsNGF113.21±7.6385.32±4.56NSCsneuralstemcellsNGFnervegrowthfactorP单纯NSCs组培养液组,且各组之间差异有非常显著性意义P0.01。4周后BBB评分,斜板实验培养液组单纯NSCs组NSCsNGF组,各组之间差异有显著性意义P0.05。NSCsNGF组体感诱发电位明显恢复,波幅增高与其他两组比较差异有显著性意义P0.05。总之,神经干细胞的移植的同时腹腔注射NGF3μg/kgd,连续用药1周,可以使移植的神经干细胞更好的在损伤部位存活,增殖分化与迁移,促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,这可以为临床治疗脊髓损伤提供新的思路和方法。4参考文献1FehlingsMG,SekhonLH.Acuteinterventionsinspinalcordinjurywhatdoweknow,whatshouldwedoClinNeurosurg.200148226242.2BetheaCL,ReddyAP,PedersenD,etal.Expressionprofileofdifferentiatingserotoninneuronsderivedfromrhesusembryonicstemcellsandcomparisontoadultserotoninneurons.GeneExprPatterns.20099294108.3BukovskyA,CaudleMR,SvetlikovaM.Steroidmediateddifferentiationofneural/neuronalcellsfromepithelialovarianprecursorsinvitro.CellCycle.200872235773583.4ChigrF,RachidiF,SeguraS,etal.Neurogenesisinhibitioninthedorsalvagalcomplexbychronicimmobilizationstressintheadultrat.Neuroscience.20091582524536.5MaletićSavatićM,VingaraLK,ManganasLN,etal.Metabolomicsofneuralprogenitorcellsanovelapproachtobiomarkerdiscovery.ColdSpringHarbSympQuantBiol.200873389401.6WuXF,LiuJS,WangZA,etal.QiluYixueZazhi.2000153181182.吴兴富,刘金生,王召安,等.神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病效果观察J.齐鲁医学杂志,2000,153181182.7TheMinistryofScienceandTechnologyofthePeoplesRepublicofChina.GuidanceSuggestionsfortheCareandUseofLaboratoryAnimals.20060930.中华人民共和国科学技术部.关于善待实验动物的指导性意见.20060930.8PalliniR,VitianiLR,BezA,etal.Homologoustransplantationofneuralstemcellstotheinjuredspinalcordofmice.Neurosurgery.200557510141025.9AlbinRL,MinkJW.RecentadvancesinTourettesyndromeresearch.TrendsNeurosci.2006293175182.10EngelmannCM,SiertL.Cognitivedisturbancesfollowingseveretraumaticbraininjury.UgeskrLaeger.20071693217219.11NordenboAM,JakobsenJK.Rehabilitationofseveretraumaticbraininjury.UgeskrLaeger.20071693197.12SaberiH,MoshayediP,AghayanHR,etal.TreatmentofchronicthoracicspinalcordinjurypatientswithautologousSchwanncelltransplantationaninterimreportonsafetyconsiderationsandpossibleoutcomes.NeurosciLett.200844314650.13MeletisK,BarnabéHeiderF,CarlénM,etal.Spinalcordinjuryrevealsmultilineagedifferentiationofependymalcells.PLoSBiol.200867e182.Figure12Numberofhorseradishperoxidasepositivenervefiberswasmoreintheneuralstemcellsnervegrowthfactorgroupthanthemediumandsimpleneuralstemcellsgroups40图12NSCsNGF组伤处HRP阳性纤维多于培养液组和单纯NSCs组40范广明,等.神经生长因子联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤P.O.Box1200,Shenyang110004cn.zglckf.com2578www.CRTER.org脐血间充质干细胞的培养与分化①本刊中文部14CarvalhoKA,VialleEN,MoreiraGH,etal.FunctionaloutcomeofbonemarrowstemcellsCD45/CD34aftercelltherapyinchronicspinalcordinjuryinWistarrats.TransplantProc.2008403845846.15XiaoQ,DuY,WuW,etal.Bonemorphogeneticproteinsmediatecellularresponseand,togetherwithNoggin,regulateastrocytedifferentiationafterspinalcordinjury.ExpNeurol.20102212353366.16WangD,ZhangJJ,YangZX.TreatmentofspinalcordinjurybytransplantingneuralstemcellswithNgRgenesilencing.ZhongguoWeiZhongBingJiJiuYiXue.20102212831.17ForetA,QuertainmontR,BotmanO,etal.Stemcellsintheadultratspinalcordplasticityafterinjuryandtreadmilltrainingexercise.JNeurochem.20101123762772.18LüHZ,HuJG.Expressionofbonemorphogeneticproteins2/4inneuralstemcellsandtheirlineages.ActaNeurobiolExpWars.2009694441447.19LeeSH,ChungYN,KimYH,etal.Effectsofhumanneuralstemcelltransplantationincaninespinalcordhemisection.NeurolRes.20093199961002.20JingWL,YanFX,ZuoYZ.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiuyuLinchuangKangfu.200812511004510049.景文莉,闫凤霞,左彦珍.骨髓间充质干细胞不同移植途径治疗大鼠脊髓损伤的比较J.中国组织工程研究与临床康复,2008,12511004510049.21CaoQL,HowardRM,DennisonJB,etal.Differentiationofengraftedneuronalrestrictedprecursorcellsisinhibitedinthetraumaticallyinjuredspinalcord.ExpNeurol.20021772349359.22NaghdiM,TiraihiT,NaminSA,etal.Transdifferentiationofbonemarrowstromalcellsintocholinergicneuronalphenotypeapotentialsourceforcelltherapyinspinalcordinjury.Cytotherapy.2009112137152.23PurcellEK,SinghA,KipkeDR.Alginatecompositioneffectsonaneuralstemcellseededscaffold.TissueEngPartCMethods.2009154541550.24DemirO,SinghS,KlimaschewskiL,etal.Frombirthtilldeathneurogenesis,cellcycle,andneurodegeneration.AnatRecHoboken.20092921219531961.25MaedaK,KannoH,YamazakiY,etal.TransplantationofVonHippelLindaupeptidedeliveredneuralstemcellspromotesrecoveryintheinjuredratspinalcord.Neuroreport.2009201715591563.26LeeSH,ChungYN,KimYH,etal.Effectsofhumanneuralstemcelltransplantationincaninespinalcordhemisection.NeurolRes.20093199961002.27LeeSI,KimBG,HwangDH,etal.OverexpressionofBclXLinhumanneuralstemcellspromotesgraftsurvivalandfunctionalrecoveryfollowingtransplantationinspinalcordinjury.JNeurosciRes.2009871431863197.28TanYX,YuJX,WangDF,etal.EffectsofNGFpretreatmentoncerebralinjuryingerbils.NanjingYikeDaxueXuebaoYingwenban.2009234265269.29BowesM,TuszynskiMH,ConnerJ,etal.Continuousintrathecalfluidinfusionselevatenervegrowthfactorlevelsandpreventfunctionaldeficitsafterspinalcordischemia.BrainRes.20008832178183.30ZhangYP.ZhongguoXiandaiYaowuYingyong.200931856.张燕萍.神经生长因子对脑梗死大鼠神经元凋亡与脑梗死体积的影响J.中国现代药物应用,2009,31856.31CarpentierPA,PalmerTD.Immuneinfluenceonadultneuralstemcellregulationandfunction.Neuron.20096417992.1微囊微环境体外扩增人脐血造血干/祖细胞李双月中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,辽宁省大连市116023国家科技部973项目2005CB522702国家自然科学基金重点项目20736006国家卫生部传染病重大专项课题2008ZX10002019推荐理由目前,造血干细胞体外扩增多为二维培养,有明显的局限性①细胞仅能在水平线形成单层,难以接近体内三维环境。②二维环境培养的细胞在细胞与细胞的接触,细胞与底物的相互作用均与生理条件下三维空间体系有异。而造血干细胞依赖于体内微环境,包括细胞因子和造血生长因子,与支持细胞类型和细胞外基质分子的相互作用,三维空间构型等。微胶囊为包封细胞的生长提供了三维立体的生长环境,细胞在其中表现出许多不同于传统二维培养的特性,如细胞聚集成团、呈三维立体生长、发挥功能等,并更有利于造血干细胞的扩增。更重要的是,课题组已经建立起微囊化细胞的规模化制备、培养和冷冻保存工艺,可以利用微囊微环境来进行造血干细胞的规模化扩增。见2009年36期7063页。2脐血间充质干细胞的体外培养及其表面标志的变化刘素芳郑州大学医学院,1生理学教研室,2干细胞中心河南省郑州市450052河南省科技攻关项目200702002推荐理由间充质干/祖细胞是一群存在于造血系统内的非造血细胞,1982年由Fridenshtein等发现并建立了以贴壁培养为主要手段的分离扩增方法。实验在以往基础上,通过改进分离较多的脐血单个核细胞,并培养出融合状态的间充质细胞。且加入了碱性成纤维细胞生长因子,干细胞因子促进细胞的增殖。这些细胞因子可以使G0期细胞启动进入G1期,从而发挥其增殖潜能。见2010年14期2591页。3人脐带血间充质干细胞分离培养体系的优化筛选刘岱中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院整形美容外科,北京市100032国家自然科学基金资助项目30672188推荐理由人脐带血中的间充质干细胞含量少、增殖慢,因此改进其采集分离方法、优化体外培养条件,已成为人脐带血间充质干细胞体外研究和临床应用的前期重要工作。大多数学者在脐带血间充质干细胞体外培养过程中,常按照骨髓间充质干细胞的培养体系进行,但两者生物学特征尚有一定差异,因此若完全按照骨髓间充质干细胞的培养体系进行培养效率较低,建立脐带血间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。实验首次提出羟乙基淀粉沉降淋巴细胞分离液两步分离法,即首先用羟乙基淀粉沉降红细胞,将上清液离心获得的细胞再次用FicollPaque分离。其优点在于与目前实验室常用的淋巴细胞分离液分离相比,获得单个核细胞的数量明显增多,纯度较高,其培养效率明显提高相对于免疫磁珠分离,其纯度低,但是对细胞的损伤小更重要的是,该方法经济有效,适于大规模采集分离,能够为细胞治疗学、组织工程学等前沿科学领域提供更多的细胞。见2009年10期1839页。全文详见http//www.crter.org/sites/MainSite/Detail.aspxStructID102766来自本文课题的更多信息利益冲突无赞助,无其他利益冲突。课题的意义本实验在神经干细胞的移植的同时腹腔注射神经生长因子,连续用药1周。可以使移植的神经干细胞更好的在损伤部位存活,增殖分化与迁移,促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,这可以为临床治疗脊髓损伤损伤提供新的思路和方法。设计或课题的偏倚与不足如果能够结合生物组织工程和生物材料方面的研究进展,将干细胞、药物和生物材料联合应用治疗大鼠脊髓损伤,并且再进一步细化动物分组,对早期移植和晚期移植结果进行比较,整个实验就会更加完善。提供临床借鉴的价值随着社会的发展、交通的发达,脊髓损伤的发病率呈上升趋势,脊髓损伤是危害人类生命健康及生活质量的常见杀手之一,本实验为临床药物联合干细胞移植治疗脊髓损伤提供实验数据和理论基础。ISSN16738225CN211539/R2010年版权归中国组织工程研究与临床康复杂志社所有2009年版权归中国组织工程研究与临床康复杂志社所有
编号:201312191414426500    大小:761.50KB    格式:DOC    上传时间:2013-12-19
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