通心络胶囊干预载脂蛋白E 基因敲除小鼠MMP-1, MMP-9 及TIMP1 的研究.doc通心络胶囊干预载脂蛋白E 基因敲除小鼠MMP-1, MMP-9 及TIMP1 的研究.doc

收藏 分享

资源预览需要最新版本的Flash Player支持。
您尚未安装或版本过低,建议您

通心络胶囊干预载脂蛋白E基因敲除小鼠MMP1、MMP9及TIMP1的研究STUDYOFTONGXINLUOCAPSULEININTERVENTIONOFAPOLIPOPROTEINEGENEKNOCKINGOUTMMP1,MMP9ANDTIMP1INMICE韩旭李七一夏卫军赖仁胜陈小虎郭宏敏赵惠HANXU,LIQIYI,XIAWEIJUN,LAIRENSHENG,CHENXIAOHU,GUOHONGMIN,ZHAOHUI江苏省中医院(中国210029)TRADITIONALCHINESEMEDICINEHOSPITALINJIANGSUPROVINCECHINA,210029中图分类号R2856文献标识码A文章编号1818-0086(2010)04摘要目的通过通心络胶囊对载脂蛋白E基因敲除〔APOE(/)〕模型组小鼠基质金属蛋白酶1(MMP1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)水平等指标的干预变化,探究其治疗冠心病(CHD)的机理。方法将40只APOE(/)小鼠作为实验组,建立冠状动脉粥样硬化(AS)模型,随机分为模型组等5组,分别给予辛伐他汀及不同剂量的通心络胶囊进行干预,另选8只同系的小鼠作为正常对照组。通过对模型组小鼠血清MMP1、MMP9和TIMP1水平的观察,比较分析通心络胶囊对APOE(/)小鼠冠状AS的调节作用并探讨其机理。结果通心络胶囊高剂量组小鼠血清MMP1和MMP9水平均低于模型组,而TIMP1水平高于模型组,与模型组相比,均有统计学意义(P005或P001)。通心络胶囊中剂量组小鼠血清MMP9水平低于模型组,与模型组相比有统计学意义(P005)。结论通心络胶囊具有抑制血管重构和稳定斑块的作用。关键词通心络胶囊;APOE(/)小鼠;冠状AS;MMP1;MMP9;TIMP1;干预ABSTRACTOBJECTIVESTOINVESTIGATEMECHANISMOFTONGXINLUOCAPSULEMANAGINGCORONARYHEARTDISEASECHDBYOBSERVINGCHANGESRESULTINGFROMINTERVENTIONOFAPOLIPOPROTEINEGENEKNOCKINGOUTAPOE/MMP1,MMP9ANDTIMP1INMICEMODELMETHOD40APOE/MICE,ASEXPERIMENTALGROUP,WEREUSEDTOESTABLISHCORONARYARTERIOSCLEROSISASMODELANDTHENWERERANDOMLYDIVIDEDINTO5MODELGROUPSSIMVASTATINANDTONGXINLUOCAPSULEATDIFFERENTDOSAGEWEREADMINISTRATEDTOMICERESPECTIVELYASINTERVENTIONAND8MICEOFSAMEKINDWERESELECTEDASCONTROLGROUPTONGXINLUOCAPSULESEFFECTINREGULATINGCORONARYASINAPOE/MICEANDITSMECHANISMWERECOMPAREDANDANALYSEDDURINGTHEEXPERIMENTBYOBSERVINGSERUMMMP1,MMP9ANDTIMP1LEVELSINMODELMICERESULTSINGROUPADMINISTRATEDHIGHDOSETONGXINLUOCAPSULE,SERUMMMP1ANDMMP9LEVELWERELOWERTHANTHATINMODELGROUPWITHOUTINTERVENTION,BUTTIMP1WASHIGHERTHEDIFFERENCEISSIGNIFICANTSTATISTICALLYP005ORP001INTHEGROUPADMINISTRATEDMODERATEDOSAGETONGXINLUOCAPSULE,THESERUMMMP9WASLOWERTHANTHATINMODELGROUPWITHOUTINTERVENTION,WHICHALSOHASSTATISTICALSIGNIFICANCEP005CONCLUSIONTONGXINLUOCAPSULEISOFSOMEEFFECTINTHEINHIBITIONOFVASCULARREMODELINGANDSTABILIZATIONOFPLAQUESKEYWORDSTONGXINLUOCAPSULE,APOE/MICE,CORONARYAS,MMP1,MMP9,TIMP1,INTERVENTION1实验材料11药品与试剂通心络胶囊石家庄以岭药业股份有限公司生产,规格每粒038克。批号20060501。MMP1、MMP9、TIMP1测定试剂盒,购自晶美生物工程有限公司,美国ORIONODIAGOSTICA公司生产,批号00604。胆固醇,上海生化试剂厂,批号051124。12实验动物APOE(/)小鼠,40只,鼠龄8周龄,雌雄各半,体重1822G。(品系C57BL/6J,购自美国JACKSON实验室)由北京大学实验动物中心提供。同遗传背景C57BL/6J小鼠8只,鼠龄8周龄,雌雄各半,体重1822G。动物生产许可证号SCXK(京)20020001。南京中医药大学实验中心,实验动物使用许可证SYXK(苏)20020123。13实验仪器SYSMAX全自动生化分析仪日本SYSMEX公司TGL16G台式高速离心机上海医用分析仪器厂UN754分光光度计上海第三分析仪器厂JA2003分析天平上海天平仪器厂AUP235G01实验室级专用超纯化水机重庆颐洋实业有限公司DKZ2型电热恒温振荡水槽上海精宏实验设备有限公司LDZ52低速自动平衡离心机北京医用离心机厂LRB12752计数器芬兰14实验条件小鼠单笼饲养,自由饮水,室温202℃。2实验方法21高脂饲料配制方法以5胆固醇,10猪油,01丙基硫氧嘧啶,加入小鼠标准饲料粉中。饲料粉经充分混合后由江苏省青龙山动物养殖场加工成颗粒饲料。22APOE(/)小鼠冠状动脉粥样硬化建立APOE(/)小鼠适应性喂养一周后给予高脂饲料,连续喂养12周。同时选取相同遗传背景的8周龄正常C57BL/6J小鼠8只,雌雄各半作为正常对照组,23给药方法和剂量231正常对照组喂普通颗粒小鼠饲料,同时给予等量蒸馏水。232模型组喂高脂饲料,同时给予等量蒸馏水。233通心络胶囊1组除与模型对照组相同外,给予通心络胶囊2G(生药)/KG体重。234通心络胶囊2组除与模型对照组相同外,给予通心络胶囊4G(生药)/KG体重。235通心络胶囊3组除与模型对照组相同外,给予通心络胶囊8G(生药)/KG体重。236辛伐他汀组除与模型对照组相同外,给予辛伐他汀005G/KG体重。24血清MMP1、MMP9、TIMP1浓度水平测定采用定量夹心酶免疫分析技术。3统计分析方法描述性统计分析,定性指标以频数表,百分率或构成比描述;定量指标以均数,标准差描述。两组对比分析,定性资料采用卡方检验,FISHER精确概率法,WILCOXON秩和检验,CMH2检验。定量资料符合正态分布用T检验(组间进行方差齐性检验,以005作为检验水准,方差不齐时选用SATTERTHWAITE方法进行校正的T检验),不符合正态分布用WILCOXON秩和检验,WILCOXON符号秩和检验。假设检验统一使用双侧检验,给出检验统计量及其对应的P值。以P≤005作为有统计学意义,以P≤001作为有高度统计学意义。以上统计分析均用SAS统计软件进行处理。4实验结果从表1中可见,APOE(/)小鼠造模后12周,模型组APOE(/)小鼠血清MMP1和MMP9水平显著升高,而TIMP1水平显著降低,与正常组相比,均有统计学意义(P005或P001)。通心络胶囊高剂量组APOE(/)小鼠血清MMP1和MMP9水平均低于模型组,而TIMP1水平高于模型组,与模型组相比,均有统计学意义(P005或P001)。通心络胶囊中剂量组APOE(/)小鼠血清MMP9水平低于模型组,与模型组相比,有统计学意义(P005)。表1通心络胶囊对APOE(/)小鼠血清MMP1、MMP9及TIMP1水平的影响(ΜG/L,XS)分组剂量(G/KG)动物数(N)MMP1MMP9TIMP1正常组8290881536482634765157882156模型组8330633833▲8056312014▲▲63381176▲▲低剂量组2830888503065663832370252263中剂量组48312133868666881378987253041高剂量组88283633864648881121593882548辛伐他汀组0058293752871568501044988752459注与正常组相比,▲▲P001,▲P005;与模型组比较,P005,P001。5讨论AS的形成涉及脂质代谢紊乱、血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移和增殖等。大量研究已证实,细胞外基质(ECM)合成或降解失衡是AS形成过程中十分重要的环节,AS形成过程也是ECM重建即血管重构的过程2。基质金属蛋白酶(MMPS)是一族可降解ECM胶原的重要蛋白酶类,在AS发生期可促进VSMC向内皮的移位,其在分解冠脉粥样斑块纤维帽ECM,使纤维帽变薄、易于破裂方面起着重要作用3。研究发现,粥样斑块组织中,尤其是纤维斑块的肩部可检出大量巨噬细胞及多种MMPS。在泡沫化过程中多种细胞因子调节其他细胞分泌大量MMPS进一步降解ECM,促使脂质条纹的形成并加速粥样斑块的发展4。MMP1是MMPS家族重要的一员,主要降解间质胶原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、X型胶原和蛋白聚糖的核心蛋白。研究表明MMP1的表达及活性增强与CHD的发生、发展密切相关5。NIKKARI等6报道人类AS斑块脂质核心强烈表达MMP1,通过降解Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白,使纤维帽变薄,促进粥样斑块进入不稳定状态。另外,原位酶谱实验证明人的粥样斑块,尤其是机械张力最高之处,MMP1表达增加7倍,而该处又是斑块破裂常见之处,据此推测,在这些部位基质降解过度同时又有机械张力过度而使纤维帽破裂7。MMP9是MMPS家族中明胶酶的一种,研究表明8,MMP9与AS关系密切,可以高效降解基底膜的主要成分IV型胶原。BROWN等9报道MMP9通常在新近斑块破裂的冠状动脉旋切标本中表达。PETERSON等10研究发现MMP9含量在不稳定心绞痛病人斑块组织中明显高于稳定型心绞痛病人,MMP9的过表达,可使ECM降解活性增强,从而降低斑块强度,促使斑块破裂。冠状动脉内径狭窄程度也与MMP9呈正相关。TIMP1为MMPS的组织抑制剂11,INOKUBO等121314认为正常内皮细胞和平滑肌细胞有TIMP1和MMP9的表达,且两者处于平衡状态,以共同维持ECM合成与降解相对平衡,使斑块趋向稳定,不易破裂。MMP9升高、TIMP1的降低预示着硬化斑块的不稳定或破裂。在急性冠状动脉综合征的发生过程中,MMP9表达增加大于TIMP1表达增加,使冠状AS斑块纤维帽的胶原降解大于合成,导致斑块脆性增加并最终破裂15。GEORGE16研究证实用TIMP1或调节其与MMP9之间的比例可起到治疗AS的作用。我们既往研究提示通心络胶囊具有抑制APOE/小鼠冠状AS的作用17,本实验结果表明该药还能通过抑制MMP1、MMP9和升高TIMP1血中浓度而具有抑制血管重构和稳定斑块作用,且其强度与药量的大小有关,推测其机制可能为①抑制VSMC的增殖和移行,②调节ECM的合成和降解,③稳定斑块纤维帽。参考文献1JNAL.BRESLWO.MOUSEMODELSOFATHEROSELEROSISJ.SEINECE1996,V0L272685688.2温进坤,韩美基质金属蛋白酶与血管壁细胞外基质重建J生命的化学,2002;2254614633SHAHPK,FALKE,BADIMONJJ,ETALHUMANMONOCYTEDERIVEDMACROPHAGESINDUCECOLLAGENBREAKDOWNINFIBROUSCAPSOFATHEROSCLEROTICPLAQUEPOTENTIALROLEOFMATRIXDEGRADINGMETALOPROTEINASESANDIMPLICATIONSFORPLAQUERUPTUREJCIRCULATION,1995,92156515694SMEGLINA,FRISHMANWHELASTINOLYTICMATRIXMETALLOPROTEINASESANDTHEIRINHIBITORSASTHERAPEUTICTARGETSINATHEROSCLEROTICPLAQUEINSTABILITYJCARDIOLOGYINREVIEW,2004;121411505GALINAK,UWES,ELENAR,ETALEVIDENCEFORINCREASEDCOLLAGENOLYSISBYINTERSTITIALCOLLAGENASESLAND3INVULNERABLEHUMANATHEROMATOUSPLAQUESJCIRCULATION,1999,99250325096NIKKARIST,O’BRIENKD,FERGUSONM,HATSUKAMIT,WELGUSHG,ALPERSCE,ETALINTERSTITIALCOLLAGENASE(MMP1)EXPRESSIONINHUMANCAROTIDATHEROSCLEROSISJCIRCULATION,1995,9213933987LEERT,LIBBYPTHEUNSTABLEATHEROMAJARTERIOSCLERTHROMBVASCBIOL,1997,17185918798POLLANENPJ,KARHUNENPJ,MIKKELSSONJETALCORONARYARTERYCOMPLICATEDLESIONAREAISRELATEDTOFUNCTIONALPOLYMORPHISMOFMATRIXMETALLOPROTEINASE9GENEANAUTOPSYSTUDYJARTERIOSCLERTHROMBVASCBIOL2001,21144614509BROWNDL,HIBBSMS,KEARNEYM,ETALIDENTIFICATIONOF92KDGELATINASEINHUMANCORONARYATHEROSCLEROTICLESIONS,ASSOCIATIONOFACTIVEENZYMESYNTHESISWITHUNSTABLEANGINAJCIRCULATION,1995;912125213110PETERSONM,PORTERKE,LOFTUSIM,ETALMARIMASTATINHIBITSNEOINTIMALTHICKENINGINAMODELOFHUMANARTERIALINTIMALHYPERPLASIAJEURJVASCENDOVASCSURG2000,1946146711CAIW,VOSSCHULTER,AFSAHHEDJRIA,ETALALTEREDBALANCEBETWEENEXTRACELLULARPROTEOLYSISANDANTIPROTEOLYSISISASSOCIATEDWITHADAPTIVECORONARYARTERIOGENESISJJMOLCELLCARDIOL,2000,32997101112INOKUBOY,HANADAH,ISHIZAKAH,ETALPLASMALEVELSOFMATRIXMETALLOPROTEINASE9ANDTISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASE1AREINCREASEDINTHECORONARYCIRCULATIONINPATIENTSWITHACUTECORONARYSYNDROMEJAMHEARTJ,2001,14121121713DOLLERYCM,HUMPHRIESSE,MCCLELLANDA,ETALEXPRESSIONOFTISSUEINHIBITOROFMATRIXMETALLOPROTEINASES1BYUSEOFANADENOVIRALVECTORINHIBITORSSMOOTHMUSCLECELLMIGRATIONANDREDUCESNEOINTIMALHYPERPLASIAINTHERATMODELOFVASCULARBALLOONINJURYJCIRCULATION,1999,993199320514YOONYW,KWONHM,HWANGKC,ETALUPSTREAMREGULRATIONOFMATRIXMETALOPROTEINASEBYEMMPRIN;EXTRACELLULARMATRIXMETALLOPROTEINASEINDUCERINADVANCEDATHEROSCLEROTICPLAQUEJATHEROSCLEROSIS,2005,180137~4415FURMANC,LUOZ,WALSHK,ETALSYSTEMICTISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASE1GENEDELIVERYREDUCESNEOINTIMALHYPERPLASIAINBALLOONINJUREDRATCAROTIDARTERYJFEBSLET,T2002,531(2)12212616GEORGESJTHERAPEUTICPOTENTIALOFMATRIXMETALOPROTEINASESINHIBITORSINATHEROSCLEROSISJEXPERTOPININVESTIGDRUGS,2000,9993100717李七一,韩旭,夏卫军等通心络胶囊对载脂蛋白E基因敲出小鼠冠状动脉硬化的影响J南京医科大学学报,2009;2991237~1241
编号:201312191415536550    类型:共享资源    大小:68.00KB    格式:DOC    上传时间:2013-12-19
  
5
关 键 词:
管理 组织 经营
  人人文库网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
关于本文
本文标题:通心络胶囊干预载脂蛋白E 基因敲除小鼠MMP-1, MMP-9 及TIMP1 的研究.doc
链接地址:http://www.renrendoc.com/p-246550.html

当前资源信息

4.0
 
(2人评价)
浏览:14次
abingge上传于2013-12-19

官方联系方式

客服手机:17625900360   
2:不支持迅雷下载,请使用浏览器下载   
3:不支持QQ浏览器下载,请用其他浏览器   
4:下载后的文档和图纸-无水印   
5:文档经过压缩,下载后原文更清晰   

相关搜索

精品推荐

相关阅读

人人文库
关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

网站客服QQ:2846424093    人人文库上传用户QQ群:460291265   

[email protected] 2016-2018  renrendoc.com 网站版权所有   南天在线技术支持

经营许可证编号:苏ICP备12009002号-5